一、肉狗人工诱导发情技术（论文文献综述）
纪俊明[1]（2015）在《犬Zfx/Zfy基因干扰载体构建及性控效果的观察》文中提出动物性别控制技术的相关研究早在多年前就已经开始。目前国际上家畜性别控制技术方法主要有三种:（1）X精子与Y精子的分离方法。（2）胚胎的性别鉴定方法。（3）控制家畜受精环境方法。尽管家畜性别控制的方法很多,但由于影响因素较多很难找到合适的即经济又方便的性别控制方法,在生产上推广应用。如今,随着科学技术水平的发展,以及对细胞遗传学、分子生物学等理论的深入研究,从基因水平研究控制性别已经成为一种新的研究方向,同时也使性别控制在生产中应用推广成为了一种可能。性别控制技术中的性控精液已经广泛应用于奶牛、猪等家畜的生产,而RNA干扰技术在新型的养犬业中还无人研究。RNA干扰是一种转录后的基因沉默现象且已被证实和广泛应用。通过体外人工合成或体内产dsRNA在细胞内特异性地降解其同源的m RNA,使得相应的基因沉默,实现阻止目标基因表达的目的。Zfx/Zfy基因均属于ZFY（zinc finger-Y）基因家族,Zfx编码的蛋白作为转录因子,在精子形成过程中具有一些功能并与精子的发生有关。本研究拟在前期研究的基础上,构建出犬的Zfx、Zfy基因干扰的载体同时进行犬生精细胞、支持细胞体外培养,将干扰载体转入犬生精细胞,利用实时定量PCR检测Zfx、Zfy基因的表达情况,体外验证RNA干扰载体的沉默效应,筛选出犬体外有效的Zfx、Zfy基因的RNA干扰载体,再利用犬体外Zfy基因沉默效应有效的RNA干扰载体对犬进行Zfx、Zfy基因体内干扰试验,最后统计其后代性别比例,以此达到研究人为控制犬性别的目的。具体研究结果如下:1.犬ZfxZfy基因mRNA序列（No.XM005641207No.JX964866）,按照RNAi设计原则,针对该基因的编码区各设计并合成3对shRNA干扰片段。以pLL3.7慢病毒骨架质粒作为载体,成功地构建了6个重组表达载体pLL3.7 xa-xcpLL3.7ya-yc,经测序验证,成功构建了表达载体。2.将构建好的6个犬ZfxZfy基因shRNA重组质粒表达载体进行体外RNAi试验。初步筛选出细胞水平上对Zfx基因干扰效果较好的表达质粒载体pLL3.7-xa,其使Zfx基因表达水平下降了98.7%,与对照组相比差异极显着（P<0.01）。体外干扰试验表明,Zfy基因shRNA重组质粒pLL3.7ya-yc对Zfy基因表达无干扰效果。3.将筛选出的Zfx基因shRNA重组表达载体进行犬体内RNAi试验。雄犬睾丸注射重组质粒表达载体pLL3.7-xa,间隔10d注射一次,连续注射3次。对公犬进行最后一次注射4d后与饲养的母犬交配。1)第一次动物体内干扰实验,采取同期发情与人工授精方案,结果如下:实验组受胎率为25%（2/8）,共产子6只,雌性比例为83.33%（5/6）;对照组受胎率为62.5%（5/8）,共产子23只,雌性比例为56.52%（13/23）。实验组后代雌性性别比例与对照组差异极显着（P<0.01）。实验结果后代性别比例出现了反向偏移,雌性比例明显升高。为了确定结果的准确性,我们再一次进行了动物体内干扰实验。2)第二次动物体内干扰实验,由于第一次动物实验受胎率下降,因此在第二年对6只母犬采取自然交配的方法进行试验。结果如下:实验组受胎率为66.67%（4/6）,共计产子16只,雌性率为75%（12/16）。实验结果后代性别仍然出现了反向偏移,雌性后代率差异极显着（P<0.01）。但是受胎率与对照组无显着差异。
娜日娜,李峰,孙德欣,石剑华[2]（2005）在《人工诱导发情技术在肉狗养殖业的应用》文中进行了进一步梳理人工诱导发情属自然发情,具有比激素催情方法怀胎率高、仔狗健壮、成活率高的特点,是值得推广的技术。
孙山[3]（2001）在《肉狗人工诱导发情技术》文中认为 成龄母狗发情周期无规律性。受季节、环境、饲料结构、体质等诸多因素影响,母狗一般年产一胎半至二胎。掌握好人工诱导发情技术,可使大多数母狗年产二胎至二胎半,二年可产四至五窝仔。人工诱导发情属自然发情,比激素催情上胎率高、仔狗健壮、成活率高。技术要点如下:
二、肉狗人工诱导发情技术（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肉狗人工诱导发情技术（论文提纲范文）
（1）犬Zfx/Zfy基因干扰载体构建及性控效果的观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 论文中常用缩写词英汉对照表 |
| 第一篇 文献综述 |
| 1.性别控制的方法 |
| 1.1 受精前性别控制 |
| 1.2 胚胎水平的性别控制 |
| 1.3 改变受（授）精的条件 |
| 2.性别控制相关基因 |
| 2.1 AMH基因 |
| 2.2 SRY基因 |
| 2.3 SOX基因 |
| 2.4 锌指(Zinc Finger, ZF)基因 |
| 2.5 原癌基因 |
| 3.RNA干扰的原理研究进展 |
| 3.1 RNAi的作用机制 |
| 3.2 RNAi的优势 |
| 3.3 RNAi在药物开发中的应用 |
| 3.4 RNAi在基因治疗中的应用 |
| 3.5 RNAi在动物繁殖研究中的应用 |
| 4.犬养殖业的现状与展望 |
| 4.1 我国犬业的发展概况 |
| 4.2 工作犬的应用现状 |
| 4.3 性别控制技术在军用犬繁育中应用的展望 |
| 5 总结与展望 |
| 第二篇 试验研究 |
| 试验一 犬的Zfx、Zfy基因shRNA表达载体的构建 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 方法 |
| 2. 结果与分析 |
| 2.1 siRNA序列的选择 |
| 2.2 双链寡聚核苷酸的合成 |
| 2.3 重组表达载体的测序鉴定 |
| 3. 讨论与结论 |
| 试验二 犬Zfx/Zfy基因shRNA重组载体细胞水平RNA干扰实验 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 主要PCR引物 |
| 2. 主要实验方法 |
| 2.1 重组表达质粒的制备与纯化 |
| 2.2 细胞培养液的配置 |
| 2.3 睾丸组织细胞的分离与培养 |
| 2.4 细胞换液与重组表达质粒转染生精细胞 |
| 2.5 测定生精细胞Zfx、Zfy基因mRNA表达水平 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 重组表达载体转染生精细胞 |
| 3.2 PCR结果分析 |
| 3.3 转染后犬Zfx、Zfy基因mRNA表达水平 |
| 4.讨论与结论 |
| 试验三 犬Zfx基因shRNA重组载体的体内RNA干扰实验 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 重组表达质粒的大量制备与纯化 |
| 1.5 犬体内Zfx基因RNAi实验 |
| 1.6 数据统计 |
| 2. 结果与分析 |
| 2.1 精子分析结果 |
| 2.2 产仔后代性别统计 |
| 2.3 注射重组表达载体后母犬受孕情况统计 |
| 2.4 Zfy基因mRNA表达水平 |
| 3.讨论与结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在学期间主要参与的研究项目 |
| 在学期间发表的文章 |
| 导师评阅表 |
四、肉狗人工诱导发情技术（论文参考文献）
- [1]犬Zfx/Zfy基因干扰载体构建及性控效果的观察[D]. 纪俊明. 石河子大学, 2015(04)
- [2]人工诱导发情技术在肉狗养殖业的应用[J]. 娜日娜,李峰,孙德欣,石剑华. 中国畜禽种业, 2005(07)
- [3]肉狗人工诱导发情技术[J]. 孙山. 农村养殖技术, 2001(01)