一、中华大蟾蜍尾退化过程中尾蛋白酶活性的变化（论文文献综述）
王一同[1]（2021）在《华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究》文中指出研究背景恶性腹水是晚期结肠癌患者的常见并发症,是临床治疗的难点。西医目前主要采用腹腔穿刺置管引流、全身化疗或联合腹腔灌注化疗等方法,但恶性腹水患者多为肿瘤晚期,经过多程放、化疗治疗,体质较差,再次化疗的敏感性及耐受性降低,且恶性腹水多为血性,无法大量置管引流,使腹胀、喘憋等症状持续存在,严重影响生活质量。因此需探索更为温和、有效的治疗方法。中药腹腔灌注,可避免口服汤药引起的胃肠不适,副反应小,近年来广泛应用于恶性腹水的临床治疗。本团队致力于华蟾素注射液腔内灌注治疗研究多年,发现华蟾素注射液对恶性浆膜腔积液有一定的疗效,庄等研究发现,华蟾素注射液腔内灌注治疗恶性浆膜腔积液,有效率为66.42%;杨等研究发现,华蟾素注射液腔内灌注对于恶性胸水有效率为60.00%;袁等研究发现,华蟾素注射液对于消化系统肿瘤来源恶性腹水有效率为75.4%,疗效更好,但前期研究对于不同癌种患者分层后病例数较少,未进行具体分层讨论。恶性腹水的生成与血管新生密切相关。本团队前期基础研究发现华蟾素注射液能够降低恶性腹水中的红细胞数量,使腹水颜色变浅,推测华蟾素注射液可能通过抑制肿瘤血管新生干预恶性腹水的生成。血管生成拟态（Vasculogenic Mimicry,VM）是近年来提出的全新肿瘤血管新生模式,可能与传统内皮细胞参与的肿瘤血管新生共同促进恶性腹水的生成。既往多数研究关注在华蟾素对内皮细胞参与的肿瘤血管新生的影响,鲜有研究探究华蟾素对VM形成的影响。研究目的临床部分:明确华蟾素注射液腹腔灌注治疗对于结肠癌这一单一病种来源的恶性腹水的疗效及该治疗方法对应的优效人群特征,以期为华蟾素注射液腹腔灌注治疗结肠癌恶性腹水提供更为个体化的临床指导。实验部分:由临床现象探索内在机制。以VM为新切入点,通过体内、体外实验观察华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞VM形成的影响及作用机制,从而更为全面地从肿瘤血管新生角度阐述华蟾素注射液腹腔灌注抑制结肠癌恶性腹水的作用机制。研究方法临床部分:采用单臂回顾性研究方法,收集2010年1月1日～2020年12月31日于北京中医药大学东方医院肿瘤科行华蟾素注射液腹腔灌注治疗的结肠癌恶性腹水的患者临床资料,从腹水量控制率、腹水质改善率、KPS评分改善情况及患者生存期方面进行疗效评价,同时评价安全性。进一步对比不同因素（如肿瘤原发病特点、转移情况、整体及局部中医辨证分型、合并全身治疗等）对疗效的影响,从中筛选优效病例,总结优效人群特征。实验部分:（1）采用结肠癌HCT116细胞腹腔+脾脏原位接种法建立BALB/C裸鼠结肠癌血性腹水模型;观察造模前后及华蟾素注射液干预前后裸鼠一般体征、体重、腹围、腹水量、腹水红细胞数量及腹腔转移瘤瘤重等。（2）采用CoCl2化学诱导建立结肠癌HCT116细胞体外缺氧模型;采用CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验检测缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。（3）采用Matrigel基质胶细胞三维培养建立结肠癌HCT116细胞体外VM模型;通过PAS-CD31组织化学与免疫组化双染法显示结肠癌HCT116细胞体内VM的形成;显微镜下计数VM形成数目,观察缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞体内、体外VM形成的影响。（4）采用RT-qPCR、Western-blot实验检测缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌 HCT116 细胞 VM 形成相关靶点 HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9、VE-cadherin mRNA及蛋白表达的影响。研究结果临床部分:（1）腹水量疗效评价:研究共纳入135例患者。灌注后腹围较灌注前显着减小（P<0.01）;完全缓解2例,部分缓解25例,稳定56例,合计有效83例,无效52例,总有效率61.5%。（2）腹水质疗效评价:灌注后腹水红细胞数、腹水肿瘤标记物、腹水乳酸脱氢酶水平较灌注前显着下降（P<0.01）;腹水红细胞较治疗前下降≥25%者94例,总有效率74.0%;腹水肿瘤标记物较灌注前下降≥25%者70例,总有效率55.1%,其中CEA、CA199、CA724水平下降显着,铁蛋白水平较灌注前差异无统计学意义（P>0.05）;腹水乳酸脱氢酶较治疗前下降≥25%者50例,总有效率39.4%。（3）KPS评分疗效评价:灌注后KPS评分较灌注前显着提高（P<0.01）;较治疗前提高者41例,较治疗前稳定者82例,较治疗前减少者12例。（4）生存情况疗效评价:纳入患者截至末次随访,仍存活者2例,腹水生存期为1～31个月,平均腹水生存期5.66±4.59个月,中位腹水生存期4.00个月;腹水1年生存率为9.6%,2年生存率为3.7%,未见大于3年生存者。（5）安全性评价:出现不良反应者27例,占比20.0%,主要不良反应为腹痛（10例）、发热（11例）、恶心呕吐（3例）、腹泻（3例）,多可耐受或对症治疗后可较快缓解,为1级轻度不良反应。未见由药物引起的骨髓抑制、肝、肾功能异常及心电图改变,未见腹腔感染、肠梗阻、消化道出血等严重并发症,安全性良好。（6）短期疗效优效人群特征分析:对于男性、有饮酒史、左半结肠、灌注前血液NLR≤2.81、初诊即诊断恶性腹水、血性腹水、全身辨证含瘀毒证,全身辨证非肝肾阴虚证、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗患者的腹水量控制方面疗效更好,其中结肠癌位置、腹水性质、合并全身中医治疗是影响腹水量控制率的独立预后因素;对于有饮酒史、无肝转移、有腹腔淋巴结转移、无胆红素升高、血性腹水、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗患者的腹水颜色改善方面疗效更好,其中肝转移、胆红素升高、腹水性质、局部辨证为影响腹水颜色改善率的独立预后因素。（7）长期疗效优效人群特征分析:有家族史、左半结肠、无肝转移、无脑转移、转移部位≤2个、灌注前无血中乳酸脱氢酶升高、初诊即诊断恶性腹水、全身辨证非肝肾阴虚证、无不良反应及腹水量得到控制的患者腹水生存期更长,但与外部研究结果对比生存期未见明显延长。实验部分:（1）结肠癌HCT116细胞腹腔+脾脏原位接种可建立较为稳定的BALB/C裸鼠结肠癌血性腹水模型;Matrigel基质胶细胞三维培养可建立结肠癌HCT116细胞体外VM模型。（2）华蟾素注射液腹腔注射可抑制结肠癌血性腹水的生成、降低腹水中红细胞数目,抑制结肠癌腹腔转移瘤的生成。（3）缺氧微环境可促进结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭,增强体外VM的形成能力。（4）华蟾素注射液可逆转缺氧对HCT116细胞造成的不良影响,抑制其增殖、迁移、侵袭及体内、体外VM的形成。（5）缺氧微环境可上调HCT116细胞HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9、VE-cadherin mRNA及蛋白的表达,华蟾素注射液干预后可抑制HIF-1α、VEGF、MMP2、VE-cadherinmRNA及蛋白表达,对MMP9 mRNA及蛋白未见显着影响。研究结论临床部分:（1）华蟾素注射液腹腔灌注可有效抑制结肠癌恶性腹水的产生,延缓病情进展,降低腹水中的红细胞数量,提高KPS评分,改善患者生活质量,安全性良好;（2）左半结肠癌、无肝转移、无胆红素升高、血性腹水、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗的患者是华蟾素注射液腹腔灌注治疗的优效人群,通过人群特征初步筛选后用药可提高临床疗效。实验研究:华蟾素注射液腹腔灌注抑制结肠癌血性腹水的机制,可能与其逆转肿瘤缺氧微环境,下调HIF-1α、VEGF、MMP2、VE-cadherin mRNA及蛋白的表达从而抑制结肠癌细胞体内、体外VM的形成,同时抑制结肠癌细胞增殖、迁移及腹腔侵袭有关。
夏凤艳[2]（2020）在《蟾酥炎性疼痛抑制因子的鉴定、活性及作用机制》文中进行了进一步梳理炎性疼痛是由于各种刺激因素引起肥大细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和神经末梢等释放炎症因子,引起局部组织炎症反应。当前治疗炎性疼痛的药物常常因出现耐药性和副作用而大大影响使用效果。据以往研究表明,作为两栖动物的中华大蟾蜍,其皮肤分泌物—蟾酥中含有多种活性物质,具有抗炎、镇痛、抗癌等多种药理活性。但其中关乎该抗炎镇痛功能的具体因子鲜为人知,因此开展本研究。本研究以中华大蟾蜍为研究对象,首先对蟾蜍的皮肤腺体（耳后腺）进行透射电镜（TEM）及扫描电镜（SEM）的观察,获取其腺体内部的超微结构,并推测其分泌方式为全浆分泌;之后用腺体转录组测序和分泌蛋白蛋白组测序和功能注释的方法对蟾酥多肽的主要功能进行了预测,鉴定出炎性疼痛抑制因子—神经肽B（Bg-NPB）。为了验证该功能预测的可靠性,本研究对蟾酥中鉴定的肿瘤细胞抑制活性进行了检测,结果显示蟾酥水提物可以有效地抑制癌细胞的增殖;同时检测了蟾酥水提物对血管生成的影响,发现其以剂量依赖性地抑制人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖,并且通过抑制VEGF165-VEGFR2-RAS信号通路发挥抗血管生成作用,进一步达到肿瘤抑制的作用。因此上述结果验证了包括镇痛因子—神经肽B（Bg-NPB）在内的蟾酥多肽功能预测鉴定的可靠性。进而对该因子的炎性疼痛调控活性进行研究:采用体外重组表达的方法,通过构建重组质粒（Bg-NPB-p ET-32a）,利用IPTG诱导进行原核表达,筛选最佳诱导条件（0.8 m M IPTG诱导2 h）,制备其活性多肽。通过构建炎性疼痛老鼠模型以及痛觉离子通道的细胞株研究Bg-NPB多肽的炎性疼痛调控活性:小鼠扭体实验以及大鼠舔足实验结果均表明Bg-NPB多肽具有抗炎性疼痛活性,并且镇痛效果呈现浓度依赖性;相关痛觉离子通道实验结果表明,Bg-NPB多肽对大多数离子通道的百分阻断率均低于10%,推测该多肽对痛觉信号的抑制可能不是通过这些离子通道途径起作用。最后对该因子的炎性疼痛调控机制进行研究,利用酵母双杂交技术构建重组质粒（Bg-NPB-p GBKT7）,在小鼠外周神经中钓取Bg-NPB新的受体蛋白,并通过测定相应处理后大鼠脊髓L4-L6段中相关痛觉蛋白表达量的变化,研究信号通路中相关痛觉蛋白表达含量的变化,从以上两方面总结Bg-NPB抗炎镇痛作用的分子机制。本研究最终为开发天然药物源的新型镇痛药物做贡献。
张睿[3]（2020）在《(R)-左旋沙丁胺醇经鼻给药在大鼠帕金森疾病模型的治疗作用》文中研究说明帕金森病疾病PD为中枢神经性系统疾病。其发病机制及原因较多,主要为其多巴胺能神经元受损,从而造成多巴胺分泌减少。其临床症状主要表现为运动功能减退严重,如行走困难并伴有四肢僵直及肌肉震颤,且有反应迟缓、站立不稳等。其病理学特征主要为一种黑质中路易小体的形成。帕金森病的病因尚不清楚,其致病因素复杂,与环境,有毒物质接触,遗传因素,外部创伤及线粒体功能障碍等有关。到目前为止,帕金森的治疗手段较少,主要以口服左旋多巴药物为主。然而,这种疗法长期使用效果将大幅降低,副作用也较大。2017年Mittal等研究人员发现β2受体激动剂可调节α-突出核蛋白,进而抑制路易小体的产生。基于此发现,本团队初步探究了沙丁胺醇优映体左旋沙丁胺醇鼻滴剂用于治疗帕金森疾病的可能性。主要内容及结果如下:1.建立左旋沙丁胺醇鼻滴剂有关物质及含量高效液相色谱方法,并验证其相关指标:专属性、定量限及检测限、耐用性、线性、回收率等。随后配制左旋沙丁胺醇滴鼻剂并对其进行有关物质及含量的考察。结果均表明两种方法可以准确测量左旋沙丁胺醇鼻滴剂的有关物质及含量,且新配制的三批左旋沙丁胺醇滴鼻剂处方的有关物质及含量检测结果均符合制定的标准。2.使用了新型质谱成像技术DESI-MS研究了经鼻腔和静脉给药的大鼠脑中（R）-沙丁胺醇的空间分布图。鼻腔给药左旋沙丁胺醇的脑部递送效率明显高于静脉注射组。此外,实验表明,DESI-MS是比较和分析不同给药途径给药效果的有效工具。3.本研究所用鱼藤酮诱导的大鼠帕金森模型较为可行,造模组与不造模组有明显的行为学差异,且造模成功的大鼠运动障碍症状基本模拟了帕金森临床特征。运用网格、悬挂、跨步、旷场及斜板实验考察大鼠行为学运动能力。左旋沙丁胺醇表现出对造模成功大鼠的治疗作用,使其运动能力得到改善。此外,鼻腔给药左旋沙丁胺醇的给药途径要优于雾化给药。4.采用免疫组化法分析GFAP、TH及α-Synuclein表达,从病理学角度判断左旋沙丁胺醇对帕金森的潜在治疗作用。并且除了证实沙丁胺醇可以影响α-突触核蛋白（α-Synuclein）的表达来治疗帕金森疾病以外,还发现了其对GFAP和TH的抑制和促进作用。5.通过细胞毒性、蟾蜍粘膜毒性及心率实验,发现左旋沙丁胺醇在3个实验方面皆没有毒性,右旋沙丁胺醇在细胞毒性实验结果表明其具有一定的毒性,但在蟾蜍粘膜实验方面则没有表现出毒性。综上所述,左旋沙丁胺醇鼻腔给药相比于静脉注射及雾化给药,具有更好的脑部靶向效率,以及更好的治疗效果。行为学及病理学结果说明左旋沙丁胺醇鼻滴剂对鱼藤酮诱导的大鼠帕金森模型具有治疗作用。细胞、粘膜及心率毒性实验表明,左旋沙丁胺醇鼻滴剂的毒性及刺激性较低。
张羽[4]（2020）在《典型有毒污染物对克氏原螯虾的毒性效应与作用机制研究》文中进行了进一步梳理随着我国城镇化进程加速以及工业化的快速推进,工业废水排放和突发性水污染对水生态环境和人类健康等方面影响日益严重。在众多种类的水环境有毒污染物中,重金属类、天然毒素类以及抗炎药物类污染物最为普遍;而在上述三类有毒污染物中,镉（Cd）、LR型微囊藻毒素（Microcystin-LR,MC-LR）和双氯芬酸（DCF）三种典型污染物的污染状况则尤为突出。由于水体内有毒污染物所引发的环境问题日益严峻,其所导致的生态毒理效应己成为全球关注的重大环境热点问题之一。然而,目前针对有毒污染物的毒性机制研究还存在诸多不足。基于以上现状,针对有毒污染物对水生动物的毒性作用机制研究已成为目前环境毒理学领域亟待深入研究的科研课题。本文系统地研究Cd、MC-LR及DCF三种染污物对克氏原螯虾（Procambarus clarkii）的抗氧化防御系统、肝胰腺基因转录特征、肠道菌群及主要靶器官的组织病理变化等方面的影响,为有毒污染物的水环境生态风险评估提供理论依据。通过研究克氏原螯虾的肝胰腺、鳃和肠道等主要靶器官对有毒污染物的氧化应激反应发现,在Cd暴露实验中,克氏原螯虾肝胰腺内的丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽硫转移酶（GST）三种抗氧化酶活性均出现不同程度提高,并在暴露于不同浓度Cd达到72 h时均达到显着水平。另外,MC-LR和DCF暴露实验表明,锰超氧化物歧化酶基因（Mn SOD）、过氧化氢酶基因（CAT）、谷胱甘肽硫转移酶基因（GST）、谷胱甘肽过氧化物酶基因（GPx）、金属硫蛋白基因（MT）和热休克蛋白70基因（HSP70）在不同器官内的表达呈现出不同的变化趋势,即MC-LR和DCF在肝胰腺、鳃和肠道内均会引起不同程度的氧化应激与抗氧化防御。同时,不同的抗氧化应激相关基因的表达水平也发生不同程度的变化来对氧化应激作用做出反应。通过对肝胰腺组织病理分析发现,当克氏原螯虾暴露于有毒污染物时,其肝胰腺组织均出现了包括腔体膨胀和空泡结构等病理变化。与此同时,转录组测序分析发现,2、5和10 mg/L Cd暴露组分别产生1061、747和1086个差异表达基因（DEGs）。在5和10 mg/L Cd暴露组内,DEGs分别显着富集到5个和10个GO条目。另外,10 mg/L Cd引起抗原加工提呈等通路发生显着富集。在MC-LR暴露实验中,10和40μg/L MC-LR暴露组分别产生了372和781个DEGs。在10和40μg/L MC-LR暴露组中,DEGs分别显着富集到1个和33个GO条目。此外,40μg/L MC-LR还引起半乳糖代谢通路的显着富集。在DCF暴露实验中,1和10 mg/L DCF暴露组分别有642和586个基因发生异常表达。10 mg/L DCF暴露组中的DEGs显着富集到12个GO条目。上述三种有毒污染物还引起了克氏原螯虾肝胰腺内氧化还原及免疫相关基因的差异表达,进而对氧化还原平衡、解毒、代谢以及免疫等功能产生影响。通过对肠道组织进行组织病理分析发现,5和10 mg/L Cd均会引起肠道组织出上皮细胞排列异常、固有层扩大及微绒毛空泡等病理变化;与此同时,1和10mg/L DCF也会导致类似的病理变化;相比之下,MC-LR暴露后的肠道则出现了嗜酸性颗粒细胞（EGCs）,并在40μg/L MC-LR暴露条件下出现了肌层疏松及淋巴细胞向固有层浸润的现象。利用16S r RNA高通量测序技术对克氏原螯虾肠道菌群进行鉴定,并探究肠道群落多样性和群落结构对Cd、MC-LR和DCF的响应变化规律。结果发现,Cd、MC-LR和DCF均会对肠道菌群的多样性及组成产生影响,并改变克氏原螯虾肠道细菌在不同分类水平的丰度,进而破坏肠道菌群平衡,损害肠道微生物群落的功能和稳定性。
黄涛[5]（2020）在《农药类等典型有机污染物体内外毒性相关性及乙草胺毒性机制研究》文中认为随着现代工业产业的不断进步,促使世界各类化合物的生产数量日益剧增,目前在美国化学文摘社登记的化学品就超过一亿种。然而,这些化合物在促进各行业发展的同时,可通过多种途径释放到环境中,对各生态系统造成严重的污染。它们也可以通过生物富集作用和食物链进入生物体内,对动物和人类的健康构成严重的威害。农药类化合物作为经常在环境中检测到的典型有机污染物,是环境污染问题的主要来源之一。人类可通过多种途径接触到农药类污染物,这些物质可以通过生物富集作用进入人体内,也可通过食品中农药的残留,直接对人类健康构成威胁。因此,急需对这些污染物进行毒性评估以确定其对生物和人类的潜在不良影响。在众多农药类化合物中,除草剂虽然对动物表现出较低的毒性效应,但对细胞毒性的研究相对较少,其潜在风险可能被严重低估。研究农药类等有机污染物体内生物毒性与体外细胞毒性的关系,探讨其毒性效应及作用机制,可为有效的防治环境污染、降低其对人类健康风险性。研究成果不仅可以减少采用传统毒理学试验中动物的使用数量,对替代试验方法的验证起到重要的支撑作用,也可为生态风险评价提供理论基础和科学依据,不但具有实际应用价值,还有理论意义。有机污染物安全评价的传统方法是进行动物试验（即体内毒性试验）,该方法需要消耗大量的动物,并且试验过程残忍粗鲁,无论是从道德还是科学的角度,该方法都受到了广泛的批评,因此急需寻找替代试验。在众多替代试验方法中,细胞毒性试验（即体外试验）因具有一系列优点脱颖而出。为了验证毒理学研究中是否可以采用体外毒性数据预测化合物体内毒性,本研究对大量的体内-体外毒性数据进行统计分析,深入地探讨了细胞毒性和不同生物的体内毒性的相关性,并对体内-体外毒性相关性的影响因素进行了探讨。与此同时,探讨了农药类等有机污染物对体外细胞毒性作用模式与对小鼠的毒性作用模式的关系,深入探讨了体内-体外毒性作用的关系。在此基础上,本研究采用了体外细胞培养技术,对全球范围内使用量较高的典型农药乙草胺进行了细胞毒性评价,探究了乙草胺对细胞的潜在毒性作用机制。采用斑马鱼胚胎作为毒理学动物模型,探讨了乙草胺对斑马鱼的体内毒性机制,对乙草胺体内-体外毒性相关性进行了科学验证。本论文获得的主要研究结果如下:（1）本文建立了细胞毒性与人、鼠和鱼类毒性的体内-体外毒性相关性模型。并从生物摄取平衡、毒性代谢动力学和毒性作用模式三个理论,探讨了体内和体外毒性相关性关系和影响因素。从生物摄取平衡理论来看,化合物在细胞和鱼类的体内临界残余（CBR）主要与生物富集（BCF）有关,细胞和鱼类的生物富集过程比较相似,这可以解释为什么鱼类和细胞毒性之间存在显着的相关性（R2=0.70）;BCF和疏水性具有密切关系,这也解释了为什么疏水性化合物相比反应型化合物对人和鱼的毒性比对细胞的毒性更大。然而,化合物在鼠类的CBR值不仅和BCF有关,还与鼠类对化合物的吸收、分布、代谢和排泄速率有关,因此代谢动力学理论可以很好地解释为什么鼠类动物和细胞毒性之间关系很差（R2=0.44）。将代表疏水性、离子化、酸性和吸收的描述符引入相关方程可以显着改善细胞毒性与人类和鱼类毒性（R2由0.7提至0.8）的相关性,但与鼠类急性毒性（R2=0.49）的相关性提高不显着。这些描述符反映了细胞和生物体之间毒代动力学的差异。（2）本研究收集了大量有机污染物对小鼠成纤维细胞（3T3细胞）及小鼠体内毒性的毒性数据,并对数据进行了回归分析,结果表明,3T3细胞毒性和小鼠毒性相关性并不强（R2=0.41）。为了提高这种弱相关关系,本研究将分子描述符（例如电离、pKa）加入到方程中后,回归系数提升到R2=0.56,表明化合物的理化性质及动力学参数都可以影响这种相关性关系。为了探究是否能够利用3T3细胞毒性数据来辨别化合物对小鼠的作用模式（MOAs）,首先利用毒性比率方法将研究化合物对小鼠的毒性作用模式进行了辨别,随后利用3T3细胞毒性数据,采用序列分析、二项分析和递归分析三种方法预测了化合物对小鼠的MOA,结果显示这些方法都可以提供强有力的的预测能力,MOAs正确辨别率高达86%。几乎所有对3T3细胞表现为基线毒性的化合物同样对小鼠也为基线化合物。预测过程中,一些化合物的MOAs辨别出现错误,这可能是由于小鼠和3T3细胞毒性试验存在试验误差性造成的,此外,一些反应型化合物对小鼠具有不同于3T3细胞的MOAs,也可能导致预测错误。（3）本研究以HepG2细胞和斑马鱼胚胎作为毒理学模型,对乙草胺的毒性效应进行了评价。对HepG2细胞进行暴露时长为12-48小时、浓度为0-800μM乙草胺毒性试验的结果表明,乙草胺对HepG2细胞的增殖具有浓度和时间依赖性的抑制作用。其中,浓度为400μM的乙草胺诱导细胞内的活性氧（ROS）的生成超过了700%;暴露于浓度为400μM的乙草胺后,细胞的抗氧化指标,包括超氧化物歧化酶和谷胱甘肽的活性和水平显着降低,丙二醛的水平显着升高。同时,乙草胺还通过凋亡信号通路诱导了HepG2细胞损伤,同时细胞内钙离子浓度显着升高(400μM乙草胺引起Ca2+浓度增加400%)。此外,乙草胺还可以造成HepG2细胞发生周期紊乱,使细胞G0/G1周期停滞。线粒体膜电位降低（400μM乙草胺引起线粒体跨膜电位降低约77%）、线粒体能量衰竭（400μM乙草胺引起ATP水平降低约65%）表明乙草胺可以造成细胞内线粒体功能障碍,这可能是乙草胺体外毒性效应的毒性机制。为了验证乙草胺对细胞和鱼类是否具有同样的作用机制,本研究测定了暴露处理后斑马鱼胚胎线粒体呼吸速率,结果表明,125μM乙草胺显着降低了斑马鱼胚胎的基础呼吸速率、ATP合成量和最高呼吸速率,揭示了乙草胺的毒性机制与线粒体功能障碍有关。
李紫薇[6]（2020）在《苯醚甲环唑与镉复合作用对蚯蚓的毒性效应》文中提出苯醚甲环唑（Difenoconazole）,属三唑类内吸型杀菌剂,通过抑制细胞麦角甾醇的合成破坏细胞膜结构与功能,最终导致病原菌死亡,从而达到杀菌的目的。目前应用于水稻、小麦、玉米等46种（类）作物的真菌病害防治方面,是我国使用最广泛的三唑类杀菌剂。由于三唑类化合物具有亲脂性、低生物降解性和在环境中易转移等特点,使其能够长期存在于土壤和水环境中,对土壤及水中的生物具有一定的毒害作用。镉（Cadmium,Cd）是一种高毒重金属,《全国土壤污染状况调查公报》中首次指出,我国土壤的镉点位超标率高达7.0%,位居污染物超标率榜首。镉生物活性大且难以转化降解,易通过食物链积累,会对动植物代谢及组织器官,免疫、神经、生殖系统产生影响。本研究以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）为研究对象,采用人工土壤法研究苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓的毒性效应。试验选取了 0、0.5、1.0、2.5、5.0 mg-k g-1的苯醚甲环唑进行单一试验,选取5 mg.kg-1镉与上述浓度苯醚甲环唑进行复合试验,于染毒后的7、14、21、28天取样测定指标。通过研究蚯蚓的超氧化物歧化酶（S OD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、谷胱甘肽硫转移酶（GST）的活性和丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）含量的变化情况,分析苯醚甲环唑与镉复合作用对蚯蚓的毒性效应,以期为土壤复合污染的早期预警以及生态风险评估判断提供基础。主要的试验结果如下:（1）苯醚甲环唑单一染毒时,不同处理浓度均对蚯蚓产生了毒性效应,使其体内抗氧化酶系的活性产生了变化。随着染毒时间的延长,蚯蚓体内SOD、CAT、POD活性均呈现出先上升后下降的趋势,而GST的活性也呈现出抑制-激活-恢复的趋势,说明抗氧化酶系与GST共同作用消除蚯蚓体内过量ROS,而MDA及ROS含量在后期逐渐恢复至对照水平。（2）苯醚甲环唑与镉复合染毒时,蚯蚓体内抗氧化酶系、GST活性、ROS和MDA含量的变化趋势与苯醚甲环唑单一染毒时相似,但SOD、GST活性较单一染毒时低且抑制程度更高,ROS、MDA含量较单一染毒时明显增加,说明苯醚甲环唑与镉复合污染的交互作用类型表现为协同作用,复合污染加强了对蚯蚓的毒性作用。
陈鸿[7]（2019）在《中华鳖（Pelodiscus sinensis）附睾精子长期储存的机理研究》文中认为脊椎动物生殖方式从体外受精向体内受精的进化转变在生物进化中具有划时代的意义。在一定程度上体内受精将交配和受精这两个过程暂时分离,此时精子需要存活更长的时间等待排卵后的受精。事实上,几乎所有具备体内受精现象的脊椎动物其精子与卵子结合之前都需要在雄性生殖道和交配后在雌性生殖道中储存一段时期。作为动物生殖过程中的一种特殊繁殖策略,精子储存（Sperm storage）不仅可以增加精子的寿命、促进交配方式的进化,同时它可以有效延长生殖期、提高受精成功率。从生态多样性角度来说精子储存也是一种进化策略,它使雄性与雌性在竞争过程中共同进化。虽然在许多的动物中发现了精子储存现象,但储存时间差异很大,并且各种动物中精子储存的作用和意义也有所不同。另一方面,大部分具有精子长期储存的动物是濒危野生动物,受到法律保护,不能随意用于实验目的。因此长期以来关于精子储存的分子机理仍不清楚。爬行纲龟鳖目的中华鳖是具有典型冬眠现象的变温动物,是我国水产养殖业中规模最大的爬行类动物。在进化过程中,中华鳖形成了精子长期储存（Sperm long-term storage）的繁殖策略。中华鳖睾丸内精子发生具有季节性,精子发生开始于春季一直持续到秋季,10月末（南京晚秋）睾丸内的精子一次性排入到附睾中。随后精子在附睾中长期储存,度过冬眠期直到次年的交配季节（6月～8月）。中华鳖精子在附睾中至少可以储存6个月,而交配后精子在雌性输卵管中储存1年以上。因此中华鳖是进行精子储存机理研究的理想动物模型。本研究中将中华鳖精子在附睾中储存分为3个时期:早期（1月）、中期（4月）和晚期（7月）,利用透射电子显微镜对不同储存期的精子进行超微结构观察,揭示精子本身形态结构的变化与其长期储存的密切关系;随后,对睾丸内精子细胞变态发育过程中关键基因进行RNA-Seq分析,研究胞质小叶中脂滴生成的分子机理,从而解析精子前期睾丸内自身能量的储备与后期附睾中长期储存的联系;在此基础上深入研究不同储存期精子胞质小叶中脂滴自噬和脂酶水解水平的变化规律,从细胞和分子水平上阐明精子长期储存的调控机制;进一步发现附睾上皮可通过外泌体（exosomes）途径参与精子的长期储存;对附睾中储存早期的精子（1月）进行体外低温（4℃）保存研究,探讨细胞凋亡与精子体外长期保存的关系。本试验研究结果从睾丸内精子自身能量的储备、附睾内精子本身和附睾微环境等方面阐明中华鳖精子在附睾中长期储存的分子调控机理。主要研究结果如下:试验Ⅰ 中华鳖精子在附睾储存过程中的形态学变化 应用光镜和透射电镜技术观察中华鳖附睾内不同储存时期精子的超微结构变化。中华鳖精子发生具有明显的季节性,10月份精子发生进入晚期,睾丸曲细精管管腔内出现大量的精子。随后,睾丸中的精子一次性释放到附睾中并长期储存直到次年的交配季节。附睾中储存的精子可分为3个不同的时期:储存早期、储存中期和储存晚期。光镜结果表明,在不同储存时期附睾管腔内均可观察到大量的精子。油红O染色发现,管腔内精子上分布大量的红色颗粒（脂滴）。将附睾内精子分离后观察发现,中华鳖的精子包含一个体积巨大的胞质小叶。该胞质小叶位于精子整个中段及头部后段,小叶内分布大量的脂滴。透射电镜结果显示:精子在附睾中储存的早期（1月）,胞质小叶内分布大量脂滴,且脂滴的体积最大。随着精子在附睾中的长期储存,胞质小叶内脂滴的数量和体积显着的降低。在储存晚期（7月）,胞质小叶体积显着性减少,精子逐渐成熟呈蚯蚓状。上述结果提示,中华鳖精子胞质小叶中的脂滴是潜在的能量来源,为其在附睾中长期储存提供能量保障。试验Ⅱ 自噬促进中华鳖精子脂滴的生成 中华鳖睾丸精子发生过程具有典型的季节性特征,可分为3个主要时期:精子发生静息期（12月～4月）、圆形精子细胞期（5月～7月）和长形精子细胞期（8月～10月）。利用透射电镜和油红O染色技术对中华鳖精子发生过程进行观察,探究精子细胞内脂滴的生成规律。结果显示:在长形精子细胞期（精子细胞变态发育期）,精子细胞胞质内有大量脂滴生成。免疫组化和免疫荧光发现,自噬特异性蛋白LC3在10月份睾丸生精上皮中表达量显着高于7月份和4月份。WB结果表明,精子发生的晚期阶段自噬活性（LC3、p62）显着性增强。进一步利用RNA-Seq测序技术分析表明,精子发生过程中主要通过PI3K-AKT信号通路激活自噬途径。为探究精子发生过程中自噬对脂滴生成的影响,本试验中将自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）直接注射入精子发生晚期睾丸内。结果表明,3-MA可明显降低睾丸内甘油三酯和脂肪酸（FAs）的含量。与对照组相比,试验组长形精子细胞内脂滴的含量（数量和直径大小）显着性下降。以上结果提示,中华鳖睾丸精子细胞变态发育过程中自噬途径可降解多余胞质产生FAs;生成的FAs被用于精子胞质小叶内脂滴的生成,从而为其在随后附睾中的长期储存储备能源物质。试验Ⅲ 脂滴自噬有利于中华鳖精子在附睾中的长期储存 应用透射电子显微镜（TEM）和免疫组织化学（IHC）技术对中华鳖附睾中不同储存时期的精子进行检测。TEM结果表明:在精子储存的早期（1月）,胞质小叶（CD）内脂滴周围分布囊泡样的膜性结构（前自噬小体,IM）,有时可见IM将脂滴的小部分逐渐包裹或隔离。到精子储存的晚期（7月）,脂滴的数量显着的减少,而CD内出现大量双层膜结构的自噬小体,其内包裹着待降解的物质。IHC和WB结果表明:储存晚期精子的自噬活性显着高于储存早期。用蔗糖密度梯度分离CD内脂滴后检测到自噬特异性标记物LC3的表达。体外试验发现,中华鳖附睾中的精子可在低温条件下（4℃）存活40多天。且在精子体外保存的前30 d,存活率高达50%以上。进一步用免疫荧光和TEM技术观察发现精子在低温保存过程中,自噬参与到胞质小叶内脂滴的降解过程。当用特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制自噬后,可显着性的阻碍脂滴的降解。此外,脂肪甘油三酯脂酶（ATGL）也参与到CD内脂滴的降解。上述结果表明:脂滴自噬和酯酶水解途径最大限度的降解CD内的脂滴,从而维持中华鳖附睾内精子的长期储存。试验Ⅳ 外泌体介导中华鳖附睾精子的长期储存 雄性脊椎动物睾丸生成的精子并不具备运动和受精能力,精子需要穿过附睾才可获得受精能力。附睾既是精子成熟的场所,也是精子储存的部位。近期研究发现,由细胞分泌的纳米级囊泡外泌体（exosome）在附睾精子成熟和储存过程中发挥重要作用。本试验中利用免疫组化技术检测外泌体标记蛋白CD63在中华鳖附睾上皮中的表达水平。结果表明,整个附睾管腔（头部、体部和尾部）上皮均有CD63阳性反应,且管腔内精子周围分布大量阳性颗粒。有时可见,附睾上皮正将外泌体（CD63 阳性颗粒）分泌到管腔的过程。在精子储存的不同阶段:早期（1月）、中期（4月）和晚期（7月）CD63蛋白表达水平变化不明显。透射电镜（TEM）进一步观察中华鳖附睾上皮外泌体的分泌途径和管腔内的吸收途径。结果显示:附睾上皮可以通过顶浆分泌和多囊泡体（MVB）两种途径释放直径为50～300 nm的外泌体到管腔内。而进一步观察到,管腔内精子可通过内吞途径和膜融合的方式吸收外泌体。上述研究表明:中华鳖附睾上皮可通过外泌体途径介导精子在附睾中的长期储存。试验Ⅴ 体外低温长期保存过程中中华鳖精子的凋亡机制 前期研究表明,中华鳖的精子可在附睾中至少储存6个月。本试验将附睾中的精子体外低温（4℃）保存,以观察体外精子的存活期限及结构变化特点。结果表明:中华鳖1月份附睾内的精子体外低温条件下可存活长达40多天。利用西班牙计算机辅助精液分析系统（CASA）对体外保存的精子进行运动性检测,结果显示:精子体外保存第20d,曲线运动速率（VCL）和平均运动速率（VAP）显着下降;第30 d,精子鞭毛鞭打频率（BCF）逐渐下降,大部分精子在原位置停留。流式细胞仪进一步发现精子体外保存第40 d,大约70%以上的精子发生死亡,而到第45 d几乎不存在活的精子。TUNEL染色和TEM结果发现精子体外保存至第20 d后出现凋亡样变化,第30 d凋亡的精子显着增加,精子细胞核破碎成细颗粒状。精子中段洋葱样线粒体明显肿胀,线粒体膜部分破裂。进一步发现在精子体外保存过程中活性氧（ROS）含量不断增加,线粒体膜电位（MMP）逐渐下降。而胞质小叶中促凋亡蛋白:细胞色素C（Cytc）和Cleaved Caspase 9/3随着精子体外保存时间的延长而显着增加。以上结果表明:中华鳖附睾精子可在体外低温长期保存,保存过程中由ROS引起线粒体损伤继而使精子发生凋亡。
宋仙平[8]（2018）在《乙草胺对雄性小鼠系统毒性及生殖毒性的研究》文中指出乙草胺（acetochlor）是我国使用最多的3种除草剂之一,属于酰胺类除草剂。其化学性质稳定,在自然条件下不易挥发和光解,易残留,市场消耗大、使用范围广,美国环保局（USEPA）及欧盟环保署（EUEPA）已将其列为2-B类致癌物及可疑的内分泌干扰物。我国农业部注册生产乙草胺的企业有32家之多,乙草胺职业性接触人群较多,而国内外尚无乙草胺工作场所的浓度限值标准。乙草胺残留引起的生态环境问题及其对人类健康的影响越来越受大众关注,其毒性作用及致毒机理也是国内外学者的研究热点。目前对乙草胺的研究多集中在环境行为方式的评估、环境残留和以及其分解过程上,毒性研究也大多集中于非哺乳类动物,对哺乳类动物特别是小鼠的毒性作用研究较少,对小鼠雄性生殖系统影响的报道更是少见。本研究用C57BL/6小鼠和GC-1精原细胞株从体内、体外二个层面对不同剂量乙草胺致雄性小鼠的系统毒性及生殖毒性进行分析,用GC-1精原细胞进行毒性验证及研究其毒作用发生的可能分子机制,系统地探讨乙草胺对雄性小鼠的毒性作用特别是生殖系统毒性,为乙草胺相关标准的制定及乙草胺职业接触人群的防护提供新的理论基础。研究目的:建立动物乙草胺亚急性染毒模型和GC-1小鼠精原细胞乙草胺染毒模型,分析乙草胺对小鼠系统及生殖系统毒性的影响,探讨乙草胺诱导氧化应激、内分泌作用失调与生殖细胞退行性病变和细胞凋亡之间的关系。研究方法:体内实验:SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分对照组以及250 mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg三个染毒组,每组10只。各染毒组分别每日给予250 mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg乙草胺灌胃,Control组以玉米油灌胃,每日1次,连续给药30天,制成亚急性染毒模型。每周监测并记录小鼠体重。第30天染毒结束后,将小鼠处死,取血检验小鼠血生化及睾酮水平,各脏器进行脏器系数分析,睾丸组织做氧化应激相关指标测定和病理切片的制作,附睾中取小鼠精子检查精子畸形率。体外实验:CCK-8细胞计数试剂盒检测不同浓度乙草胺作用12h后的GC-1精原细胞活力,LDH释放实验检测乙草胺对细胞的毒性作用,SOD、GSH、MDA检测细胞氧化应激反应的程度,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平,观察乙草胺对GC-1精原细胞的损伤情况。Western blot技术检测JNK/SAPK、p38、p44/42（ERK1/2）、p53、Bax、Bcl-2、caspase 3及caspase 9等相关蛋白的表达,以提示乙草胺致细胞凋亡的可能机制。研究结果:1.乙草胺对C57BL/6小鼠的系统毒性给药组小鼠随着乙草胺给药剂量的增加、给药时间的延长,出现活动减少、毛发光泽度消失、进食量明显减少等表现。体重总体上呈增加趋势,但随着给药浓度的升高体重增加量减少。心、肝、脾、肾、附睾的脏器系数随着染毒浓度的增加而升高。与对照组相比,三个染毒组的BUN和CREA水平显着降低（P<0.001）;500mg/kg和1000 mg/kg组的CHO水平显着升高（P<0.001）;ALT,AST,TG浓度只有1000mg/kg组明显升高（P<0.001）;TP,ALB,GLU的水平与对照组比无明显改变。2.乙草胺对小鼠生殖系统的影响乙草胺各染毒组小鼠血清中睾酮水平显着上升;睾丸组织中SOD水平逐渐下降,MDA呈上升趋势,而GSH水平总体呈降低改变;睾丸组织病理上呈进行性退化病变,可见精子数量减少,生精小管排列紊乱、层次减少和明显空泡化等改变;小鼠精子畸形率升高。3.乙草胺对GC-1精原细胞的影响经乙草胺处理后的GC-1精原细胞细胞活力降低,IC50为4.80×10-4M;细胞毒性总体呈上升趋势（P<0.05）,10-3M组的细胞毒性约为对照组的4倍;SOD、GSH水平呈梯度降低趋势（P<0.05）,MDA水平随着乙草胺染毒浓度的升高而显着增加;各染毒组细胞凋亡率呈梯度上升趋势（P<0.01）。4.乙草胺可能通过ERK-p53-Bcl-2级联反应介导凋亡通路影响精原细胞Western blotting检测乙草胺处理的GC-1精原细胞中相关通路蛋白:乙草胺染毒可显着降低GC-1精原细胞p44/42（ERK1/2）的表达,增加促凋亡蛋白Bax蛋白的表达,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,并激活下游凋亡级联反应,caspase3、caspase9蛋白表达增多。此外,p53蛋白的表达呈剂量反应性升高,而各组中JNK/SAPK和p38的表达没有明显改变。综上所述,乙草胺可能通过氧化应激调节ERK-p53-Bcl-2级联反应介导凋亡通路影响精原细胞生存。研究结论:1.乙草胺对C57BL/6小鼠具有系统毒性。2.乙草胺对C57BL/6小鼠、ICR小鼠具有生殖系统毒性。3.乙草胺对GC-1精原细胞有明显的细胞毒性作用,乙草胺可能通过氧化应激调节ERK-p53-Bcl-2级联反应介导凋亡通路影响精原细胞生存。
徐阳[9]（2016）在《哈蟆油化学成分的研究》文中研究表明哈蟆油（Oviductus Ranae）为蛙科动物中国林蛙（Rana temporaria chensinensis David）雌蛙输卵管的干制品,为长白山地区传统的道地药材,具有养阴润肺、补肾益精、健脾养胃之功效。现代药理学研究表明,具有良好的镇咳平喘、抗疲劳、抗衰老和增强免疫力等方面疗效。本文主要对哈蟆油化学成分、质量控制和药效成分药代动力学进行系统研究,对药材的评价控制和药效成分开发提供研究依据。1主要药效成分的分离利用柱层析色谱配合制备液相方法,对哈蟆油主要药效部位甾体类成分进行分离,结合光谱技术进行鉴定,共分离鉴定7种甾体类和5种脂肪酸酯类化合物,其中7-去氢胆固醇、胆甾-4,6-二烯-3-醇、豆甾醇、菜油甾醇、9-十八碳烯酸乙酯,9-十八碳烯酸甲酯,5,8,11,14-二十碳四烯酸甲酯,十八碳酸甲酯,十六碳酸甲酯,9种化合物均为首次从哈蟆油中分离得到。通过高速逆流色谱法,分别分离、制备了哈蟆油中胆固醇、7-羟基胆固醇和7-酮基胆固醇,其纯度分别为95.9%,96.5%和97.2%。2质量鉴别的研究2.1 TLC哈蟆油药材鉴别方法本文建立一种哈蟆油薄层色谱（TLC）鉴别方法,比较原有的哈蟆油薄层鉴别方法,增加了胆固醇、7-羟基胆固醇、7-酮基胆固醇和LD-2作为对照物质,以254nm紫外灯光下和喷以10%硫酸乙醇溶液检视,结果斑点清晰,分离度良好,具有良好的专属性,与原有方法相比更具优越性。此方法具有快速、准确、成本低廉等优势,可作为哈蟆油鉴别的参考方法,弥补药典中无薄层色谱鉴别项。2.2哈蟆油指纹图谱的建立通过HPLC-UV法对14批不同产地的哈蟆油样品进行分析,建立哈蟆油指纹图谱,与原有方法相比更具优越性,共有峰由原来的12个提升至33个,并指认了5种哈蟆油主要药效成分的色谱峰,分别为1-甲基海因、胆固醇、7-酮基胆固醇、7-去氢胆固醇和豆甾醇,优越性明显。此方法对哈蟆油药材的鉴别具有重大意义,可以更为完整的评价哈蟆油的质量,更具专属性和准确性。同时对哈蟆油的质量控制提供了理论依据。2.3一测多评法测定哈蟆油中甾体类成分本实验以胆固醇为内参物,对哈蟆油中7-羟基胆固醇、7-酮基胆固醇、胆甾4-烯-3酮、豆甾醇、7-去氢胆固醇与胆固醇之间相对保留时间和相对校正因子进行测定,建立了哈蟆油主要甾体类成分“一测多评”的测定方法。依照此法对哈蟆油中6种甾体类成分进行测定,并与外标法进行比较,结果表明两种测定方法结果无显着性差异,结合方法学试验证明此方法准确、可行,可用于哈蟆油中7-羟基胆固醇、7-酮基胆固醇、胆甾4-烯-3酮、豆甾醇、7-去氢胆固醇和胆固醇的含量测定,可省去除胆固醇外其它标准品的使用,简化实验、节约实验成本。此方法具有准确、高效、简便的优势,可应用于哈蟆油质量控制。3药代动力学研究3.1 1-甲基海因胃肠稳定性的研究本文建立一种快速、稳定、简便的测定方法,可以对1-甲基海因在人工胃液和人工肠液中的稳定性进行测定。通过比较3μg/ml、10μg/ml、15μg/ml高、中、低浓度样品在人工胃液和人工肠液中24h稳定性的测定,表明1-甲基海因只有极少量会降解,24h降解量不大于3%,具有相对较好的稳定性,推测其口服给药后,在胃液和肠液的p H下保持稳定,不会因降解受到影响,对其药代动力学的研究提供了依据。3.2 1-甲基海因血药浓度的研究首次对1-甲基海因的药代动力学实验进行研究,建立一种对1-甲基海因血药浓度测定的方法,专属性、精密度、稳定性、准确度、回收率结果均符合要求。通过测定灌胃给药,剂量分别为20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg和尾静脉注射给药,剂量为3mg/kg的血药浓度,利用DAS 2.0软件对药代动力学参数进行计算、分析。研究发现口服1-甲基海因在体内吸收较快,20mg/kg、50mg/kg和100mg/kg的Tmax分别为2.0±0.55h、1.5±0.63h和1.292±0.459h,且消除也较快,T1/2约0.64h、0.75h和0.797h。并对其生物利用度进行计算,测定结果为18.84±2.21%。本文首次对1-甲基海因大鼠体内的血药关系进行研究,对1-甲基海因的临床使用和对药物研发奠定基础。3.3 1-甲基海因血浆蛋白结合率的研究首次对1-甲基海因血浆蛋白结合率进行研究,建立一种对1-甲基海因血浆蛋白结合率测定的方法,专属性、精密度、稳定性、准确度、回收率结果均符合要求。对0.2μg/ml、5μg/ml和50μg/ml药物浓度下的血浆蛋白结合率进行测定,其蛋白结合率约为24.36±0.93%、23.93±0.68%、.25.29±0.84%,属于较低蛋白结合率的物质,与半衰期较短的结果相符。比较0.2μg/ml、5μg/ml和50μg/ml浓度下血浆蛋白率结果,确定在测定范围内1-甲基海因血浆蛋白结合率不具有浓度依赖性。3.4 1-甲基海因药物组织分布的研究首次对1-甲基海因药物组织分布进行研究,建立一种高效、快捷、准确的测定方法,专属性、精密度、稳定性、准确度、回收率结果均符合要求。灌胃给药,剂量为50mg/kg,测定给药后0.5h、1h、2h、4h、6h、12h时药物在心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠脏器中的含量。结果1-甲基海因能够快速的分布于大鼠的各脏器中,约1h时各器官具有较高的浓度,达到顶峰;约3h时,各脏器药物浓度基本减少1/2以上;约6h时,各脏器药物浓度只剩下少微量,大部分已经被消除;12h时,各脏器中已经检测不到药物,已经完全消除,说明1-甲基海因在各组织中不易造成蓄积现象。3.5 1-甲基海因体内排泄的研究首次对1-甲基海因的排泄量进行研究,建立一种高效、快捷、准确的测定方法,专属性、精密度、稳定性、准确度、回收率结果均符合要求。通过实验结果可知,灌胃给予1-甲基海因,剂量为50mg/kg,96h内通过尿液和粪便总的排泄量约占总剂量的约为19.22%,其中尿液排出约15.58±4.48%,粪便排出约3.37±0.71%,说明药物主要通过尿液的方式排出。原药排出的总量只占给药剂量的少部分,说明1-甲基海因在复杂的体内环境,可能存在生物转化,发生结构的变化。
查艳[10]（2016）在《桑螟孵化酶基因特性分析与基于昆虫HE结构的进化研究》文中进行了进一步梳理桑螟属鳞翅目螟蛾科,是桑树的主要害虫之一。本文以桑螟（Diaphania pyloalis）为研究对象,通过RACE技术克隆获得桑螟孵化酶基因（Diaphania pyloalis hatching enzyme,DpyHE）全长cDNA序列。DpyHEcDNA序列全长983bp,其中包含21bp的5’UTR、44bp的3’UTR和一段918bp的完整开放阅读框,编码305个氨基酸,其中N端有16个氨基酸为信号肽序列,C端成熟酶区由222个氨基酸组成。同源性分析显示DpyHE与鳞翅目其他昆虫孵化酶蛋白功能区序列相似性分别为70.9%至76%,与柞蚕同源性最高。DpyHE氨基酸序列Pro90至Ser240之间具有一个锌依赖性金属蛋白酶结构域。用同源建模的方法以虾红素蛋白酶Astacin为模板预测DpyHE蛋白的三维结构,结果显示DpyHE与Astacin三维结构相似,表明桑螟孵化酶具有与虾红素蛋白酶相似的蛋白酶功能区和活性中心。另外,我们将DpyHE的成熟酶序列、去信号肽序列、ORF序列对应的基因序列克隆到原核表达系统中进行蛋白表达,Western Blot验证其获得表达,这为进一步进行桑螟孵化酶活性分析提供基础。最近基于鱼类孵化酶基因及其内含子缺失角度探讨了进化分析,获得了有意义的结果。本课题组已发现小菜蛾孵化酶基因仅为单外显子,这与家蚕孵化酶基因的多外显子基因结构存在差异。因此本文调查了代表性昆虫的孵化酶同源序列的基因结构与其保守区对应的内含子,分析昆虫纲孵化酶基因内含子缺失的状态及相互间的亲缘关系。我们选择基因组数据已发表并具有完整孵化酶成熟酶同源序列的6种鳞翅目昆虫和2种双翅目昆虫进行调查,结果显示5种鳞翅目昆虫孵化酶成熟酶同源序列为6-外显子-5-内含子结构,2种双翅目昆虫均为3-外显子-2-内含子结构,而鳞翅目小菜蛾为单外显子,这可能与硬骨鱼孵化酶基因HCE类似,存在内含子丢失的现象。为进一步扩大调查样本,我们调查18种基因组已发表的昆虫孵化酶同源序列保守区,发现其各自对应基因组所包含内含子数分为0和1两类别;所调查昆虫物种进化途径中可能存在内含子缺失现象;推测存在内含子缺失的节点与根据分子进化系统分析获得的物种分类分支点相一致。上述初步结果表明昆虫孵化酶基因结构的内含子缺失可作为一个候选基因来研究昆虫进化关系。
二、中华大蟾蜍尾退化过程中尾蛋白酶活性的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中华大蟾蜍尾退化过程中尾蛋白酶活性的变化（论文提纲范文）
（1）华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 恶性腹水的中西医研究进展 |
| 1. 恶性腹水的西医研究进展 |
| 1.1 恶性腹水的形成机制 |
| 1.2 恶性腹水的西医诊断 |
| 1.3 恶性腹水的西医治疗 |
| 2. 恶性腹水的中医研究进展 |
| 2.1 恶性腹水的中医病因病机 |
| 2.2 恶性腹水的中医辨证 |
| 2.3 恶性腹水的中医治疗 |
| 3. 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 血管生成拟态(VM)在结肠癌中的研究进展 |
| 1. 结肠癌VM的发现及生物学特性 |
| 2. VM的形成机制 |
| 2.1 肿瘤缺氧微环境与VM |
| 2.2 肿瘤干细胞与VM |
| 2.3 上皮间质转化与VM |
| 2.4 促血管生成相关因子与VM |
| 2.5 VM形成相关信号通路 |
| 3. VM与结肠癌不良预后的相关性 |
| 4. VM与结肠癌的治疗 |
| 5. 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三 华蟾素注射液干预肿瘤血管生成作用的研究进展 |
| 1. 肿瘤血管生成的病理机制 |
| 2. 华蟾素注射液的主要化学成分及其抗肿瘤作用 |
| 3. 华蟾素注射液干预肿瘤血管生成的机制 |
| 3.1 VEGF/VEGFR通路抑制作用 |
| 3.2 MMPs/TIMPs通路抑制作用 |
| 3.3 肿瘤血管内皮细胞诱导凋亡作用 |
| 3.4 其他潜在靶点 |
| 4. 结语 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 临床研究 华蟾素注射液腹腔灌注治疗结肠癌恶性腹水的疗效评价及优效人群分析 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1 研究方法 |
| 1.2 研究对象 |
| 1.3 病例筛选方法 |
| 1.4 治疗方法 |
| 1.5 提取指标 |
| 1.6 疗效评价 |
| 1.7 安全性评价 |
| 1.8 统计方法 |
| 1.9 技术路线图 |
| 2. 研究结果 |
| 2.1 总体资料分析 |
| 2.2 疗效评价 |
| 2.3 安全性评价 |
| 2.4 优效人群特征筛选 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 结肠癌恶性腹水的治疗现状 |
| 3.2 优效人群研究的必要性 |
| 3.3 华蟾素注射液治疗结肠癌恶性腹水的潜在机制 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 基于血管生成拟态(VM)研究华蟾素注射液抑制结肠癌血性腹水的机制 |
| 实验一: 华蟾素注射液抑制裸鼠结肠癌血性腹水生成的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验二: 华蟾素注射液体外抑制结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验三: 华蟾素注射液体内、体外抑制结肠癌细胞VM形成的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验四: 华蟾素注射液抑制结肠癌VM形成的机制研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1. 研究结论 |
| 2. 研究创新性 |
| 3. 不足与展望 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）蟾酥炎性疼痛抑制因子的鉴定、活性及作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 文献综述 |
| 1.1 两栖动物皮肤分泌物的研究进展 |
| 1.2 蟾酥分泌的器官及方式 |
| 1.3 蟾酥多肽的主要成分 |
| 1.4 蟾酥多肽的药理活性活性 |
| 1.4.1 抗菌活性 |
| 1.4.2 抗肿瘤活性 |
| 1.4.3 抑制血管生成活性 |
| 1.4.4 其它活性 |
| 1.5 目的及意义 |
| 1.6 科学问题提出 |
| 2 蟾酥分泌腺体(耳后腺)的形态特征 |
| 2.1 试验材料和仪器 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.1.1 试验动物 |
| 2.1.1.2 试验药品 |
| 2.1.2 设备及耗材 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 试剂配制 |
| 2.2.2 耳后腺的超微结构观察 |
| 2.2.2.1 扫描电镜的观察 |
| 2.2.2.2 透射电镜的观察 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 耳后腺扫描电镜结果 |
| 2.3.2 耳后腺透射电镜结果 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 3 基于大数据分析的蟾酥功能预测及验证 |
| 3.1 试验材料和仪器 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.1.1 试验动物及细胞 |
| 3.1.1.2 试验药品 |
| 3.1.2 设备及耗材 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 耳后腺转录组测序 |
| 3.2.1.1 提取样品总RNA |
| 3.2.1.2 测序质量数据评估 |
| 3.2.1.3 测序碱基质量分析 |
| 3.2.1.4 碱基分布检查 |
| 3.2.1.5 测序数据质量预处理 |
| 3.2.1.6 READS污染检测 |
| 3.2.1.7 DE NOVO拼接 |
| 3.2.1.8 UNIGENE注释 |
| 3.2.1.9 UNIGENE表达丰度 |
| 3.2.1.10 SSR分析 |
| 3.2.2 蟾酥水提物的肿瘤细胞抑制活性 |
| 3.2.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2.2 蟾酥水提物的制备 |
| 3.2.2.3 蟾酥水提物的HPLC分析 |
| 3.2.2.4 蟾酥水提物的肿瘤细胞抑制活性检测 |
| 3.2.2.5 蟾酥水提物中的蛋白分析 |
| 3.2.3 新鲜蟾酥(FTV)水提物对血管生成的影响 |
| 3.2.4 统计分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 耳后腺转录组测序 |
| 3.3.1.1 READS污染检测 |
| 3.3.1.2 DE NOVO拼接 |
| 3.3.1.3 UNIGENE注释 |
| 3.3.2 生物学信息分析蟾酥多肽主要功能 |
| 3.3.3 蟾酥水提物的肿瘤细胞抑制活性检测 |
| 3.3.4 新鲜蟾酥(FTV)水提物对血管生成的影响 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 4 炎性疼痛抑制因子(Bg-NPB)的基因克隆和重组表达 |
| 4.1 试验材料和仪器 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.1.1 试验动物 |
| 4.1.1.2 试验药品 |
| 4.1.2 设备及耗材 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 主要试剂配制 |
| 4.2.2 Bg-NPB的基因克隆 |
| 4.2.3 Bg-NPB基因的重组 |
| 4.2.4 Bg-NPB基因的诱导表达 |
| 4.2.5 Bg-NPB多肽的纯化 |
| 4.2.6 SDS-PAGE电泳 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 Bg-NPB的 c DNA序列分析 |
| 4.3.2 Bg-NPB-p ET-32a表达质粒的构建 |
| 4.3.3 Bg-NPB融合基因的表达 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 5 Bg-NPB多肽的炎性疼痛抑制活性 |
| 5.1 小鼠扭体法检测Bg-NPB多肽活性 |
| 5.1.1 试验材料和仪器 |
| 5.1.1.1 试验材料 |
| 5.1.1.2 设备及耗材 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.1.2.1 主要试剂配制 |
| 5.1.2.2 小鼠镇痛实验 |
| 5.1.3 统计分析 |
| 5.2 大鼠舔足法检测Bg-NPB多肽活性 |
| 5.2.1 试验材料和仪器 |
| 5.2.1.1 试验材料 |
| 5.2.1.2 设备及耗材 |
| 5.2.2 试验方法 |
| 5.2.2.1 主要试剂配制 |
| 5.2.2.2 动物的处理 |
| 5.2.3 统计分析 |
| 5.3 Bg-NPB多肽对痛觉离子通道的影响 |
| 5.3.1 试验材料和仪器 |
| 5.3.1.1 试验材料 |
| 5.3.1.2 设备及耗材 |
| 5.3.2 试验方法 |
| 5.3.2.1 主要试剂的配制 |
| 5.3.2.2 细胞培养 |
| 5.3.2.3 细胞转染 |
| 5.3.2.4 爬片准备 |
| 5.3.2.5 膜片钳试验 |
| 5.3.3 统计分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 小鼠扭体法检测Bg-NPB多肽活性 |
| 5.4.1.1 扭体潜伏时间 |
| 5.4.1.2 扭体次数 |
| 5.4.2 大鼠舔足法检测Bg-NPB多肽活性 |
| 5.4.2.1 舔足潜伏时间 |
| 5.4.2.2 15min内舔足次数 |
| 5.4.2.3 30min内舔足次数 |
| 5.4.3 Bg-NPB多肽对痛觉离子通道的影响 |
| 5.5 小结与讨论 |
| 6 Bg-NPB抑制炎性疼痛的分子机制 |
| 6.1 试验材料和仪器 |
| 6.1.1 试验材料 |
| 6.1.1.1 试验动物 |
| 6.1.1.2 试验药品 |
| 6.1.2 设备及耗材 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 主要试剂配制 |
| 6.2.2 酵母双杂交钓取Bg-NPB受体蛋白 |
| 6.2.2.1 Bg-NPB-p GBKT7 重组质粒的构建 |
| 6.2.3 痛觉信号通路 |
| 6.2.3.1 动物组织的蛋白提取 |
| 6.2.3.2 蛋白含量的测定(BCA法) |
| 6.2.4 统计分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 Bg-NPB-p GBKT7 重组质粒的构建 |
| 6.3.2 痛觉蛋白含量的测定 |
| 6.4 小结与讨论 |
| 7 讨论与结论 |
| 8 展望 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（3）(R)-左旋沙丁胺醇经鼻给药在大鼠帕金森疾病模型的治疗作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 帕金森疾病 |
| 1.1.1 帕金森疾病概述 |
| 1.1.2 发病机制及治疗方法 |
| 1.2 动物模型 |
| 1.2.1 毒素模型 |
| 1.2.2 基因模型 |
| 1.2.3 其他模型 |
| 1.3 鼻腔给药 |
| 1.3.1 鼻腔给药脑靶向研究现状 |
| 1.3.2 鼻腔给药药物递送途径与机制 |
| 1.3.3 影响鼻腔给药的因素 |
| 1.3.4 鼻内给药的前景 |
| 1.4 沙丁胺醇 |
| 1.4.1 沙丁胺醇概述及左右旋疗效差异 |
| 1.4.2 沙丁胺醇与帕金森疾病 |
| 1.5 研究意义与内容 |
| 1.5.1 研究意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第二章 左旋硫酸沙丁胺醇滴鼻剂溶液质量研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验仪器与材料 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 有关物质检测方法开发 |
| 2.3.2 含量测定检测方法的研究与验证 |
| 2.3.3 制备三批样品并考察 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 有关物质检测 |
| 2.4.2 含量测定检测方法的研究与验证 |
| 2.4.3 三批样品考察结果 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 基于DESI-MS研究(R)-沙丁胺醇经鼻和静脉给药后在SD大鼠脑内空间分布 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验仪器与试剂 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 动物 |
| 3.3 方法 |
| 3.3.1 组织取样和制备 |
| 3.3.2 数据采集与处理 |
| 3.3.3 成像扫描 |
| 3.3.4 (R)-沙丁胺醇在大鼠脑内的空间分布 |
| 3.3.5 大鼠脑内(R)-沙丁胺醇子离子的空间分布图 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 成像步骤 |
| 3.4.2 沙丁胺醇在大鼠脑内的空间分布 |
| 3.4.3 大鼠脑内(R)-沙丁胺醇裂解分子的空间分布图 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 (R)-沙丁胺醇对鱼藤酮诱导的帕金森SD大鼠的行为学改善作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验仪器与试剂 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 动物 |
| 4.3 方法 |
| 4.3.1 实验动物分组 |
| 4.3.2 溶液配制 |
| 4.3.3 左旋沙丁胺醇给药剂量 |
| 4.3.4 模型建立 |
| 4.3.5 行为学药效评价 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 网格实验 |
| 4.4.2 悬挂实验 |
| 4.4.3 跨步实验 |
| 4.4.4 旷场实验 |
| 4.4.5 斜板实验 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 (R)-沙丁胺醇对鱼藤酮诱导的帕金森SD大鼠的病理学改善作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验仪器与试剂 |
| 5.2.1 实验试剂 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.3 方法 |
| 5.3.1 实验动物分组 |
| 5.3.2 取材 |
| 5.3.3 免疫组化主要配制及配制 |
| 5.3.4 实验操作 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 GFAP |
| 5.4.2 TH |
| 5.4.3 α-突触核蛋白 |
| 5.4.4 显着性分析 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 左旋沙丁胺醇毒理实验 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验仪器与试剂 |
| 6.2.1 实验仪器 |
| 6.2.2 实验试剂 |
| 6.3 方法 |
| 6.3.1 CCK8法细胞毒性实验 |
| 6.3.2 蟾蜍粘膜毒性实验 |
| 6.3.3 鼻腔给药左旋沙丁胺醇对SD大鼠心率影响 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 细胞毒理实验 |
| 6.4.2 左旋及右旋沙丁胺醇对蟾蜍上腭纤毛输送能力的影响 |
| 6.4.3 鼻腔给药左旋沙丁胺醇对SD大鼠心率影响 |
| 6.5 小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（4）典型有毒污染物对克氏原螯虾的毒性效应与作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景 |
| 1.2 典型有毒污染物及其毒性 |
| 1.2.1 镉及其毒性 |
| 1.2.2 微囊藻毒素及其毒性 |
| 1.2.3 双氯芬酸及其毒性 |
| 1.3 典型有毒污染物暴露对甲壳类水生动物毒性研究现状 |
| 1.3.1 Cd暴露对甲壳类水生动物毒性研究现状 |
| 1.3.2 MC-LR暴露对甲壳类水生动物毒性研究现状 |
| 1.3.3 DCF暴露对甲壳类水生动物毒性研究现状 |
| 1.4 克氏原螯虾在毒理学中的应用 |
| 1.4.1 克氏原螯虾作为靶生物的优势 |
| 1.4.2 克氏原螯虾在毒理学中的研究现状 |
| 1.5 研究目的、意义与主要内容 |
| 1.5.1 课题来源 |
| 1.5.2 研究的目的与意义 |
| 1.5.3 本课题研究内容 |
| 1.5.4 本课题技术路线 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验试剂与仪器 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.2.1 Cd暴露实验 |
| 2.2.2 MC-LR暴露实验 |
| 2.2.3 DCF暴露实验 |
| 2.3 氧化应激指标的测定 |
| 2.3.1 蛋白含量的测定 |
| 2.3.2 丙二醛(MDA)含量的测定 |
| 2.3.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 |
| 2.3.4 过氧化氢酶(CAT)活性的测定 |
| 2.3.5 谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性的测定 |
| 2.4 组织病理切片 |
| 2.4.1 样本包埋与固定 |
| 2.4.2 HE染色 |
| 2.4.3 图像采集 |
| 2.5 实时荧光定量PCR检测 |
| 2.5.1 反转录 |
| 2.5.2 荧光定量PCR检测 |
| 2.6 高通量测序及分析 |
| 2.6.1 转录组测序及分析 |
| 2.6.2 Illumina测序及分析 |
| 第3章 污染物对克氏原螯虾的氧化胁迫作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 Cd对克氏原螯虾的氧化胁迫作用 |
| 3.2.1 Cd对肝胰腺内MDA含量的影响 |
| 3.2.2 Cd对肝胰腺内抗氧化酶活性的影响 |
| 3.3 MC-LR对克氏原螯虾的氧化胁迫作用 |
| 3.3.1 MC-LR对抗氧化基因表达的影响 |
| 3.3.2 MC-LR对其他应激相关基因表达的影响 |
| 3.4 DCF对克氏原螯虾的氧化胁迫作用 |
| 3.4.1 DCF对抗氧化基因表达的影响 |
| 3.4.2 DCF对其他应激相关基因表达的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 污染物暴露作用下克氏原螯虾肝胰腺病理及分子调控机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 Cd暴露作用下克氏原螯虾肝胰腺病理及分子调控特征 |
| 4.2.1 Cd对肝胰腺组织病理的影响 |
| 4.2.2 Cd暴露实验中转录组测序质量评估 |
| 4.2.3 Cd暴露实验中肝胰腺基因功能注释 |
| 4.2.4 Cd暴露实验中差异表达基因的分析 |
| 4.2.5 Cd暴露实验中转录组数据的q RT-PCR验证 |
| 4.3 MC-LR暴露作用下克氏原螯虾肝胰腺病理及分子调控特征 |
| 4.3.1 MC-LR对肝胰腺病理的影响 |
| 4.3.2 MC-LR暴露实验转录组测序质量评估 |
| 4.3.3 MC-LR暴露实验中肝胰腺基因功能注释 |
| 4.3.4 MC-LR暴露实验差异表达基因的分析 |
| 4.3.5 MC-LR暴露实验中转录组数据的q RT-PCR验证 |
| 4.4 DCF暴露作用下克氏原螯虾肝胰腺病理及分子调控特征 |
| 4.4.1 DCF对肝胰腺病理的影响 |
| 4.4.2 DCF暴露实验中转录组测序质量评估 |
| 4.4.3 DCF暴露实验中肝胰腺基因的功能注释 |
| 4.4.4 DCF暴露实验中差异表达基因的分析 |
| 4.4.5 DCF暴露实验中转录组数据的q RT-PCR验证 |
| 4.5 克氏原螯虾肝胰腺病理及分子调控机制解析 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 污染物暴露作用下克氏原螯虾肠道病理及菌群响应机制 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 Cd对肠道病理与菌群的作用研究 |
| 5.2.1 Cd对肠道病理的影响 |
| 5.2.2 Cd对肠道微生物群落多样性的影响 |
| 5.2.3 Cd对肠道微生物群落结构的影响 |
| 5.3 MC-LR对肠道病理及菌群的作用研究 |
| 5.3.1 MC-LR对肠道病理的影响 |
| 5.3.2 MC-LR对肠道微生物群落多样性的影响 |
| 5.3.3 MC-LR对肠道微生物群落结构的影响 |
| 5.4 DCF对肠道病理及菌群的作用研究 |
| 5.4.1 DCF对肠道病理的影响 |
| 5.4.2 DCF对肠道微生物群落多样性的影响 |
| 5.4.3 DCF对肠道微生物群落结构的影响 |
| 5.5 克氏原螯虾肠道病理及菌群响应机制解析 |
| 5.6 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）农药类等典型有机污染物体内外毒性相关性及乙草胺毒性机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 有机污染物毒理学研究进展 |
| 1.1.1 毒理学中常用的评价方法 |
| 1.1.2 有机污染物的毒性作用模式 |
| 1.2 体内体外毒性相关性研究进展 |
| 1.2.1 相关性研究进展 |
| 1.2.2 相关组织机构和数据库 |
| 1.3 有机污染物对细胞的毒性作用 |
| 1.3.1 神经毒性作用 |
| 1.3.2 基因毒性作用 |
| 1.3.3 生殖毒性作用 |
| 1.4 细胞凋亡的分子机制 |
| 1.4.1 细胞凋亡与细胞坏死 |
| 1.4.2 细胞凋亡与细胞自噬 |
| 1.4.3 细胞凋亡与细胞周期 |
| 1.5 农药类有机污染物毒理学研究进展 |
| 1.5.1 除草剂的毒理学效应 |
| 1.5.2 杀虫剂的毒理学效应 |
| 1.5.3 杀菌剂的毒理学效应 |
| 1.5.4 其他农药的毒理学效应 |
| 1.5.5 农药毒性分级 |
| 1.6 目前研究存在的问题 |
| 1.7 研究目标、研究内容及技术路线 |
| 1.7.1 研究目标 |
| 1.7.2 研究内容 |
| 1.7.3 技术路线 |
| 第二章 体内体外毒性相关性及影响因素研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 哺乳类动物细胞毒性数据 |
| 2.2.2 哺乳类动物急性毒性数据 |
| 2.2.3 鱼类急性毒性数据 |
| 2.2.4 人类急性毒性数据 |
| 2.2.5 分子描述符 |
| 2.2.6 毒性作用模式的分类 |
| 2.2.7 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 所有研究化合物的体内体外毒性相关性 |
| 2.3.2 分类化合物体内体外毒性相关性 |
| 2.3.3 化合物的理化性质对体内体外毒性相关性的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 体内体外毒性相关性的理论背景 |
| 2.4.2 生物摄取平衡和相关性关系 |
| 2.4.3 生物摄取动力学与相关性 |
| 2.4.4 作用模式与体内体外相关性 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 利用细胞毒性辨别化合物对小鼠的毒性作用模式 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 3T3细胞毒性数据 |
| 3.2.2 小鼠的急性毒性数据 |
| 3.2.3 剩余毒性 |
| 3.2.4 分子描述符 |
| 3.2.5 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 建立化合物对小鼠静脉注射途径毒性的数据集 |
| 3.3.2 小鼠急性毒性与3T3细胞毒性之间的相关性 |
| 3.3.3 利用毒性比率辨别化合物对小鼠的毒性作用模式 |
| 3.3.4 采用细胞毒性数据预测化合物对小鼠的毒性作用模式 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 不同暴露途径下的小鼠急性毒性相关性 |
| 3.4.2 体内体外毒性相关性探讨 |
| 3.4.3 利用3T3细胞毒性数据预测化合物对小鼠的毒性作用模式 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 典型有机污染物乙草胺的毒性机理 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 化学药品和耗材 |
| 4.2.2 细胞培养 |
| 4.2.3 药物处理及分组 |
| 4.2.4 细胞活性试验 |
| 4.2.5 细胞膜完整性试验 |
| 4.2.6 细胞内ROS含量检测 |
| 4.2.7 氧化应激参数的检测 |
| 4.2.8 细胞内钙离子浓度的检测 |
| 4.2.9 线粒体膜电位检测 |
| 4.2.10 检测细胞凋亡 |
| 4.2.11 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 4.2.12 细胞内ATP含量 |
| 4.2.13 斑马鱼胚胎线粒体耗氧速率 |
| 4.2.14 统计分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 乙草胺对细胞活力和细胞毒性的影响 |
| 4.3.2 乙草胺对细胞内ROS生成和抗氧化参数的影响 |
| 4.3.3 乙草胺对细胞周期进程的影响 |
| 4.3.4 乙草胺诱导HepG2细胞发生凋亡 |
| 4.3.5 乙草胺对HepG2细胞线粒体功能的影响 |
| 4.3.6 细胞内Ca~(2+)参与了细胞凋亡过程 |
| 4.3.7 乙草胺对斑马鱼胚胎线粒体呼吸速率的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 乙草胺对HepG2细胞的毒性作用 |
| 4.4.2 乙草胺造成细胞内发生氧化应激 |
| 4.4.3 乙草胺造成细胞周期功能紊乱 |
| 4.4.4 乙草胺诱导细胞发生细胞凋亡 |
| 4.4.5 钙离子信号参与了乙草胺诱导HepG2细胞凋亡过程 |
| 4.4.6 乙草胺造成HepG2细胞线粒体功能紊乱 |
| 4.4.7 乙草胺改变斑马鱼胚胎线粒体呼吸耗氧速率 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 结论与创新点 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 后记 |
| 在学期间公开发表论文及着作情况 |
（6）苯醚甲环唑与镉复合作用对蚯蚓的毒性效应（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 我国土壤污染现状 |
| 1.2 三唑类杀菌剂的使用 |
| 1.3 苯醚甲环唑研究现状 |
| 1.3.1 苯醚甲环唑概况及性质 |
| 1.3.2 苯醚甲环唑的残留降解 |
| 1.3.3 苯醚甲环唑的毒性效应 |
| 1.4 重金属镉研究现状 |
| 1.4.1 镉的性质 |
| 1.4.2 镉污染的来源 |
| 1.4.3 镉污染的现状及治理 |
| 1.4.4 镉的毒性效应 |
| 1.5 土壤环境复合污染 |
| 1.5.1 复合污染的定义和类型 |
| 1.5.2 复合污染的作用机理 |
| 1.5.3 农药与镉的复合污染研究现状 |
| 1.6 蚯蚓的生态毒理学 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 1.8 本研究的内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 供试动物 |
| 2.2 供试试剂 |
| 2.3 供试仪器 |
| 2.4 试验方案 |
| 2.4.1 土壤配置 |
| 2.4.2 染毒处理 |
| 2.5 各指标测定方法 |
| 2.5.1 酶液的制备 |
| 2.5.2 可溶性蛋白含量测定 |
| 2.5.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 |
| 2.5.4 过氧化物酶(POD)活性测定 |
| 2.5.5 过氧化氢酶(CAT)活性测定 |
| 2.5.6 谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性测定 |
| 2.5.7 丙二醛(MDA)含量测定 |
| 2.5.8 活性氧(ROS)含量测定 |
| 2.6 数据统计分析方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓SOD活性的影响 |
| 3.2 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓CAT活性的影响 |
| 3.3 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓POD活性的影响 |
| 3.4 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓GST活性的影响 |
| 3.5 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓MDA含量的影响 |
| 3.6 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓ROS含量的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓抗氧化酶系的影响 |
| 4.2 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓GST活性的影响 |
| 4.3 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓MDA含量的影响 |
| 4.4 苯醚甲环唑单一及与镉复合作用对蚯蚓ROS含量的影响 |
| 5 结论 |
| 6 创新点与不足之处 |
| 6.1 创新点 |
| 6.2 不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（7）中华鳖（Pelodiscus sinensis）附睾精子长期储存的机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 雄性脊椎动物精子储存研究进展 |
| 1 精子储存的特征及生殖生理学意义 |
| 1.1 鱼类、两栖类精子储存特征 |
| 1.2 爬行类精子储存特征 |
| 1.3 鸟类精子储存特征 |
| 1.4 哺乳类精子储存特征 |
| 2 爬行动物精子长期储存的繁殖策略 |
| 2.1 爬行动物的繁殖周期 |
| 2.2 中华鳖精子的长期储存 |
| 3 精子长期储存的分子机理 |
| 3.1 附睾微环境与精子储存 |
| 3.2 精子本身的物质储备 |
| 3.3 自噬对精子储存的调节作用 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第二章 中华鳖精子在附睾储存过程中的形态学变化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 组织样品的采集及处理 |
| 1.4 光镜样品的制备与观察 |
| 1.5 油红O染色 |
| 1.6 制备透射电镜样品 |
| 1.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 中华鳖附睾内不同时期的精子 |
| 2.2 附睾精子的胞质小叶 |
| 2.3 透射电镜观察不同储存期精子的超微结构 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 自噬促进中华鳖精子脂滴的生成 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 样品采集 |
| 1.5 睾丸组织H&E染色 |
| 1.6 油红O染色 |
| 1.7 电镜样品的制备 |
| 1.8 免疫组织化学染色 |
| 1.9 免疫荧光染色 |
| 1.10 荧光双标 |
| 1.11 测序数据的分析及差异基因的注释 |
| 1.12 RT-qPCR验证RNA-Seq测序数据的准确性 |
| 1.13 睾丸组织内关键蛋白的表达 |
| 1.14 生精晚期睾丸体内注射3-甲基腺嘌呤 |
| 1.15 睾丸内甘油三酯和脂肪酸含量的测定 |
| 1.16 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 中华鳖睾丸生精上皮季节性发生过程中脂滴的变化 |
| 2.2 透射电镜观察精子细胞变态发育过程中脂滴的生成 |
| 2.3 自噬特异性蛋白LC3表达于中华鳖睾丸生精上皮 |
| 2.4 中华鳖睾丸精子发生过程中自噬途径被激活 |
| 2.5 中华鳖睾丸精子发生过程中通过PI3K信号通路激活自噬 |
| 2.6 中华鳖睾丸精子发生过程中脂滴生成 |
| 2.7 中华鳖睾丸内注射自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 脂滴自噬有利于中华鳖精子在附睾中的长期储存 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 动物处理及样品采集 |
| 1.5 光镜样品的制备 |
| 1.6 精子收集后的处理 |
| 1.7 体外药物抑制试验 |
| 1.8 透射电镜样品的制备 |
| 1.9 免疫组织化学 |
| 1.10 免疫荧光染色 |
| 1.11 荧光双标 |
| 1.12 精子胞质小叶中脂滴的分离 |
| 1.13 不同储存时期精子中自噬相关蛋白的表达 |
| 1.14 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 1.15 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 透射电镜观察不同储存期附睾内精子胞质小叶的变化 |
| 2.2 自噬参与胞质小叶内脂滴的降解 |
| 2.3 中华鳖附睾内的精子可在体外低温长期保存 |
| 2.4 自噬参与体外精子低温长期保存 |
| 2.5 3-甲基腺嘌呤抑制自噬 |
| 2.6 溶酶体酸性脂肪酶和脂肪甘油三酯水解酶 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 外泌体介导中华鳖附睾精子的长期储存 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 样品采集 |
| 1.5 附睾组织切片H&E染色 |
| 1.6 免疫组化染色 |
| 1.7 透射电镜样品的制备 |
| 2 结果 |
| 2.1 中华鳖附睾组织H&E染色观察 |
| 2.2 免疫组化检测中华鳖附睾组织CD63的表达水平 |
| 2.3 透射电镜观察中华鳖附睾中的外泌体 |
| 2.4 中华鳖附睾外泌体与管腔内精子的互作 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 体外低温长期保存过程中中华鳖精子的凋亡机制 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 动物处理及样品的采集 |
| 1.5 精子运动参数的观察、记录 |
| 1.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 1.7 体外精子透射电镜样品的制备 |
| 1.8 蔗糖密度梯度法分离精子胞质小叶 |
| 1.9 WB检测凋亡关键蛋白的表达水平 |
| 1.10 精子低温保存过程中活性氧的检测 |
| 1.11 精子低温保存过程中线粒体膜电位的检测 |
| 1.12 精子低温保存过程中超氧化物歧化酶和丙二醛的检测 |
| 1.13 TUNEL检测体外保存过程中凋亡的精子 |
| 1.14 数据的统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 精子运动参数的统计 |
| 2.2 精子磷脂酰丝氨酸外翻分析 |
| 2.3 中华鳖精子体外保存过程中氧化损伤与抗氧化能力的检测 |
| 2.4 透射电镜观察精子的凋亡样变化 |
| 2.5 WB检测精子中凋亡相关蛋白的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 论文发表情况 |
| 致谢 |
（8）乙草胺对雄性小鼠系统毒性及生殖毒性的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 论文发表情况 |
| 致谢 |
（9）哈蟆油化学成分的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词对照表 |
| 第1篇 前言 |
| 第2篇 文献综述 |
| 第1章 哈蟆油的成分研究 |
| 第2章 哈蟆油药理学研究现状 |
| 第3章 高速逆流色谱法 |
| 第4章 一测多评 |
| 第5章 1-甲基海因研究进展 |
| 第3篇 实验研究与结果 |
| 第1章 有效成分分离 |
| 第1节 哈蟆油化学成分研究 |
| 第2节 高速逆流法（HSCCC）分离哈蟆油中胆甾醇、7-羟基胆甾醇和 7-酮基胆甾醇 |
| 第2章 质量控制的研究 |
| 第1节 哈蟆油药材薄层色谱鉴别方法研究 |
| 第2节 一测多评法测定哈蟆油中六种甾类成分的含量 |
| 第3节 哈蟆油HPLC指纹图谱的研究 |
| 第3章 1-甲基海因在大鼠体内药代动力学、组织分布、血浆蛋白结合率和排泄率的研究 |
| 第1节 1-甲基海因口服稳定性研究 |
| 第2节 1-甲基海因血药动力学的研究 |
| 第3节 1-甲基海因血浆蛋白结合率研究 |
| 第4节 1-甲基海因组织分布的研究 |
| 第5节 1-甲基海因排泄的研究 |
| 第4篇 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介及攻读博士期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（10）桑螟孵化酶基因特性分析与基于昆虫HE结构的进化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 本课题的研究目的与意义 |
| 1.2 桑螟生物防治的研究进展 |
| 1.3 动物孵化酶研究进展 |
| 1.4 基于真核生物基因内含子缺失进化分析的研究进展 |
| 1.5 基于动物孵化酶基因内含子缺失进化分析的研究进展 |
| 1.6 本文主要研究内容 |
| 第2章 桑螟孵化酶基因(Dpy HE)的克隆与生物信息学分析 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.2 常用试剂盒缓冲液的配制 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 |
| 2.1.4 生物信息学软件 |
| 2.1.5 获取各物种孵化酶样蛋白序列 |
| 2.1.6 引物设计 |
| 2.1.7 桑螟总RNA的提取 |
| 2.1.8 Dpy HE第一链c DNA的合成 |
| 2.1.9 PCR克隆Dpy HE部分片段 |
| 2.1.10 Dpy HE基因 3’端序列扩增 |
| 2.1.11 Dpy HE基因 5’端序列扩增 |
| 2.1.12 琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.1.13 回收DNA目的片段 |
| 2.1.14 目的片段与p MD18-T载体连接 |
| 2.1.15 感受态细胞的制备 |
| 2.1.16 转化 |
| 2.1.17 挑取单克隆 |
| 2.1.18 碱裂解法小量抽取质粒DNA |
| 2.1.19 重组质粒的酶切鉴定 |
| 2.1.20 甘油菌的制备与测序 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 Dpy HE部分c DNA序列的克隆 |
| 2.2.2 Dpy HEc DNA的克隆与序列分析 |
| 2.2.3 Dpy HE的系统进化分析 |
| 2.2.4 Dpy HE的密码子偏好性分析 |
| 2.2.5 Dpy HE蛋白的三维结构分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 桑螟孵化酶基因（Dpy HE）的原核表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料与试剂 |
| 3.1.2 常用试剂和缓冲液的配制 |
| 3.1.3 成熟酶对应核苷酸序列、去信号肽对应核苷酸序列与ORF对应核苷酸序列的克隆 |
| 3.1.4 原核表达重组载体的构建 |
| 3.1.5 Dpy HE蛋白的原核表达 |
| 3.1.6 Bradford法测定蛋白浓度 |
| 3.1.7 SDS-PAGE电泳 |
| 3.1.8 Western Blot |
| 3.2 实验结果与分析 |
| 3.2.1 成熟酶对应核苷酸序列、去信号肽对应核苷酸序列与ORF对应核苷酸序列的克隆 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建 |
| 3.2.3 重组蛋白的原核表达与Western Blot |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 基于昆虫孵化酶基因及其内含子缺失的进化初步分析 |
| 4.1 方法 |
| 4.1.1 各物种孵化酶之间同源序列比对及构建系统进化树 |
| 4.1.2 获取孵化酶基因结构及其内含子信息 |
| 4.1.3 Notung软件的使用 |
| 4.2 实验结果与分析 |
| 4.2.1 可获得基因结构的昆虫孵化酶功能区序列比对及其内含子缺失分析 |
| 4.2.2 昆虫孵化酶同源序列保守区对应的内含子信息及其进化分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 昆虫孵化酶基因同源序列比对及其基因结构分析 |
| 4.3.2 昆虫孵化酶同源序列保守区对应基因组上内含子信息分析 |
| 4.3.3 昆虫孵化酶基因内含子丢失的原因及其可能的途径 |
| 4.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 详细摘要 |
四、中华大蟾蜍尾退化过程中尾蛋白酶活性的变化（论文参考文献）
- [1]华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究[D]. 王一同. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]蟾酥炎性疼痛抑制因子的鉴定、活性及作用机制[D]. 夏凤艳. 浙江农林大学, 2020
- [3](R)-左旋沙丁胺醇经鼻给药在大鼠帕金森疾病模型的治疗作用[D]. 张睿. 广东工业大学, 2020(03)
- [4]典型有毒污染物对克氏原螯虾的毒性效应与作用机制研究[D]. 张羽. 哈尔滨工业大学, 2020
- [5]农药类等典型有机污染物体内外毒性相关性及乙草胺毒性机制研究[D]. 黄涛. 东北师范大学, 2020(01)
- [6]苯醚甲环唑与镉复合作用对蚯蚓的毒性效应[D]. 李紫薇. 山东农业大学, 2020(11)
- [7]中华鳖（Pelodiscus sinensis）附睾精子长期储存的机理研究[D]. 陈鸿. 南京农业大学, 2019(08)
- [8]乙草胺对雄性小鼠系统毒性及生殖毒性的研究[D]. 宋仙平. 南京医科大学, 2018(05)
- [9]哈蟆油化学成分的研究[D]. 徐阳. 吉林大学, 2016(08)
- [10]桑螟孵化酶基因特性分析与基于昆虫HE结构的进化研究[D]. 查艳. 江苏科技大学, 2016(03)