一、面神经断裂后大鼠面神经核区神经元凋亡和星形胶质细胞变化的实验研究（论文文献综述）
李立恒[1]（2021）在《富血小板血浆和溴莫尼定在面神经夹挫伤的实验研究和机制探讨》文中进行了进一步梳理目的:通过构建面神经夹挫伤大鼠模型,验证溴莫尼定对面神经损伤的保护作用,并研究富血小板血浆对损伤面神经的治疗效果及作用机制方法:第一部分,观察并验证溴莫尼定对大鼠面神经夹挫伤损伤治疗作用:构建面神经夹挫伤大鼠模型。对大鼠模型进行持续28天的溴莫尼定治疗后,分别观察各组大鼠给药干预后第0、7、14、21、28天的面神经功能恢复情况（行为学评价、神经电生理评价）,并对面神经及核团进行HE染色组织形态学观察,通过PCR检测面神经核团相关因子PAF,GFAP,NT-4,P75NTR,NF-κB,TNF-α,IL-6,α2a-AR,α 2b-AR,α 2c-AR的变化,免疫组化法检测营养生长因子S100、MBP髓鞘蛋白,并对营养生长因子S100及成纤维生长因子FGF的表达水平进行Western Blot检测,以验证溴莫尼定对大鼠面神经夹挫伤损伤的治疗作用及机制;第二部分,研究富血小板血浆对大鼠面神经夹挫伤治疗作用并探讨其机制:首先构建面神经主干夹挫伤大鼠面瘫模型。以溴莫尼定为阳性药,对大鼠模型进行连续28天的自体富血小板血浆治疗,并在术后第0、7、14、21、28天进行面神经恢复功能评估（行为学评价、神经电生理评价）,同时对面神经及核团进行形态学观察（HE染色、甲苯胺蓝、电镜检测）,并通过PCR技术检测面神经组织及脑干组织中营养神经因子基因BDNF及NT-4的表达,采用Western Blot检测营养神经因子蛋白BDNF及S-100表达水平,以研究富血小板血浆的神经损伤修复作用.结果:第一部分:1.大鼠面神经夹挫伤模型的复制术后,无大鼠死亡,造模存活率为100%;2.行为学评价:正常对照组大鼠整个实验过程中触须运动及瞬目反射保持正常,能够正常感知其周边环境的差异改变,眼部无分泌物;模型组及溴莫尼定组在术后第0天其患侧表现为完全性面瘫,面瘫评分达到4分,药物干预的第21、28天后,溴莫尼定组的面瘫评分较模型组显着降低,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）;3.神经电生理学评价:正常对照组整个实验过程中其CMAPs潜伏期及波幅均维持正常水平;与正常对照相比,术后第0天模型组及溴莫尼定组的面神经CMAPs潜伏期显着延长,波幅降低;药物干预第28后,溴莫尼定组其潜伏期显着缩短,波幅明显升高,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）;4.组织形态学结果:正常对照组在整个实验过程中,其面神经组织均均保持良好状态;术后第0天,模型组及溴莫尼定组其神经髓鞘与其周围分界均模糊不清,新生轴突分布不均,轴突横截面积较小且厚度不均,成熟的髓鞘数量减少,且厚度不抑制;溴莫尼定干预28天后,其面神经形态较模型组恢复程度高,新生髓鞘数量及厚度较模型组显着增加,且神经鞘横截面积及数量均显着增多,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）;5.PCR检测结果:溴莫尼定对大鼠面神经损伤后面神经核内GFAP/PAF表达有抑制作用。表达的胶质纤维酸性蛋白/血小板活化因子（GFAP/PAF）基因的mRNA表达发生变化。损伤组mRNA表达明显增加,而溴莫尼定组mRNA表达明显减少。溴莫尼定治疗1周即可使胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达恢复正常,治疗3周使血小板活化因子（PAF）表达恢复正常,溴莫尼定上调大鼠面神经损伤后面神经核内NT-4和P75ntr的表达,NT-4和P75ntr的表达水平也呈现随时间变化的特征,损伤后迅速增加,在第1周达到最大值,然后逐渐下降。与损伤组比较,溴莫尼定组NT-4和P75ntr的mRNA表达显着升高,且至少持续3周。溴莫尼定可以降低面神经损伤后面神经核NF-κB、TNF-α和il-6的表达。溴莫尼定可以显着降低挤压伤后面神经核NF-κB、TNF-α和il-6的表达。NF-κB在伤后第1周明显高于对照组（高达4倍）,溴莫尼定治疗后降低。TNF-α表达在损伤后迅速增加并逐渐减少,但在第3周仍高于对照组,而溴莫尼定则逐渐减少其表达。il-6在损伤后迅速升高,在第1周达到最大值,然后逐渐下降,在第3周恢复到正常水平,而溴莫尼定在第1周即明显抑制i1-6的表达.结果表明,3种亚型的α2-AR均出现在面神经核内。与对照组相比,损伤组α2a-AR mRNA表达水平明显升高。α2b-AR和α2c-AR的表达水平也随着溴莫尼定的作用而升高.6.免疫组化检测结果:术后第0天,模型组及溴莫尼定组其S100蛋白水平较正常对照组显着降低,具有统计学意义（P<0.05）;溴莫尼定干预第28天时,其MBP髓鞘蛋白及S100蛋白的表达显着升高,接近正常对照组,差异显着,且具有统计学意义（P<0.05）;7.Western Blot检测结果:与正常对照组相比,模型组与溴莫尼定组的成纤维细胞生长因子FGF以及S100均较正常对照组显着减少,具有统计学意义（P<0.05）;溴莫尼定干预第28天后,溴莫尼定组S100蛋白、生长因子FGF的表达均较模型组显着升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;第二部分:1.本研究获得的富血小板血浆中的血小板浓度约为全血血小板的4.23倍;2.行为学评价:正常对照组大鼠整个实验过程中触须运动及瞬目反射保持正常,能够正常感知其周边环境的差异改变,眼部无分泌物;模型组、溴莫尼定阳性组以及富血小板血浆给药组在术后的第0天其患侧均呈完全性面瘫,面瘫评分达到4分;在分组干预7、14天后,溴莫尼定阳性组及富血小板血浆给药组其组间面瘫评分无显着差异,差异不具有统计学意义（P<0.05）;而在分组干预21、28天后,溴莫尼定组的面瘫评分较模型组显着降低,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）,第7、14天时,模型组大鼠面瘫评分有不同程度的下降,但无显着差异,不具有统计学意义（P>0.05）;3.神经电生理学:与正常对照相比,模型组、溴莫尼定阳性组以及富血小板血浆给药组其面神经CMAPs潜伏期出现明显延长,且波幅显着降低。分组治疗第28天后,与模型组相比,溴莫尼定阳性组及富血小板血浆治疗组的其CMAPs潜伏期显着缩短,波幅明显升高,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）。4.组织形态学观察:分组治疗28天后,溴莫尼定阳性组及富血小板血浆给药组其面神经可见较多Schwann细胞核及正在形成的再生髓鞘,且神经纤维直径较模型组增加,但各纤维间直径存在较大差异,直径不均,同时髓鞘厚度增加但仍较正常对照组薄,差异具有显着性,具有统计学意义（P<0.05）;PCR检测结果:正常对照组神经及面神经核团的营养神经因子基因BNDF及NT-4表达水平在各个时间段均保持相对稳定,无显着差异,不具有统计学意义（P>0.05）;模型组大鼠的神经核团的营养因子基因BNDF的表达显着高于正常对照组、溴莫尼定阳性组积极富血小板血浆给药组,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）,在第14天时,其神经核团营养神经因子BNDF表达达到峰值;与模型组相比,溴莫尼定阳性组及富血小板血浆给药组大鼠的面神经及面神经核团的营养神经因子基因NT-4表达水平均明显低于模型组;且在分组治疗第14天后,其NT-4表达水平达到峰值,随后逐渐降低;Western Blot检测结果:与正常对照组相比,模型组BNDF及S100蛋白的表达水平显着低于正常对照组,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）。同时与模型组相比较,发现溴莫尼定阳性组及富血小板血浆给药组其BNDF及S100蛋白的表达均模型组显着增加,差异显着,且具有统计学意义（P<0.05）。结论:溴莫尼定通过刺激神经恢复再生,维持新生轴突数量及其髓鞘结构的稳定,上调mbp水平及BDNF、FGF以及S100的表达水平,它抑制GFAP/PAF的激活和炎症介质的产生以及上调神经营养因子的能力有关。促进神经瘢痕及轴突髓鞘化,最终起到保护面神经的作用;富血小板血浆对面神经具有一定的损伤修复作用,可能是通过缩短CMAPs潜伏期,提高其波幅,上调BNDF,NT-4及S100表达,替代脑组织提供营养神经因子蛋白进行的。
任非非[2]（2021）在《基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响》文中研究说明目的:观察AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物合成对抑郁大鼠海马神经元突触可塑性的影响及醒脾解郁方干预效应。方法:实验研究分为四部分。第一部分:140只雄性SD大鼠随机分为空白组（CON）、模型组（MOD）、醒脾解郁方组（XPJYF）、草酸艾司西酞普兰组（EOT）、醒脾解郁方联合草酸艾司西酞普兰组（XPJYF+EOT）。每组根据应激时间各分为3w、6w组。除CON外,其余各组采用慢性束缚应激（CRS）造模,共21d。各组造模的同时给予相应药物干预。造模前及造模第3 w、6 w时进行行为学观察。造模3 w时评价脾虚程度,结合行为学实验,评价模型成功与否。取材后以HE染色和尼氏染色观察海马CA1区神经元病理变化及XPJYF干预效应。第二部分:大鼠分组及干预同研究一。取材后观察海马CA1区神经元突触及线粒体超微结构;分析线粒体及神经元突触体视学指标;高尔基染色观察神经元轴树突分支变化;提取海马突触体,免疫荧光染色观察突触重塑蛋白表达;Western blot检测线粒体合成蛋白含量;检测海马线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ～Ⅳ及线粒体酶活性。第三部分:制备XPJYF低、中、高剂量组含药血清;体外分离、培养原代海马神经元细胞并鉴定;采用CCK8法进行XPJYF细胞毒性实验;建立皮质酮（CORT）诱导海马神经元损伤模型,分为 CON、CORT、CORT+X（H）、（M）、（L）、CORT+E、CORT+E+X（H）、（M）、（L）共9组。以细胞免疫荧光观察SYN、PSD-95表达及海马神经元线粒体成像;Western blot检测线粒体生物合成及突触重塑蛋白表达;ELISA及RT-PCR检测5-HT、DA及其受体情况。第四部分:大鼠分组及干预同研究一。取材后以免疫荧光三标染色观察海马CA1区NeuN/CD31/GFAP表达;RT-PCR检测海马AMPK/SIRT1/PGC-1α通路基因表达;免疫组化及 Western blot 检测 NeuN、GFAP、VEGF、Collagen Ⅳ蛋白表达。结果:1.第一部分1.1宏观表征:造模前大鼠状态良好,反应灵敏,活动自如。造模3 w后,反应降低,神态倦怠,活动减少,毛发干枯或发黄,粪便逐渐变稀,至6 w时表现更明显,各用药组较模型组有改善。1.2体质量变化:模型各组大鼠体重较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,各用药组体重增加（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,西药3 w、联合各组体重增加（P<0.01,P<0.05）,西药6 w组降低（P<0.05）。联合各组体重较西药组增加（P<0.01,P<0.05）。1.3行为学:模型各组糖水偏好率（SPT）较空白组降低（P<0.01）,强迫游泳不动时间（FST）延长（P<0.01）。与模型组比较,西药、联合各3 w及各用药6w组SPT升高,FST缩短（P<0.01,P<0.05）。联合各组SPT较中药、西药组升高（P<0.01,P<0.05）,FST缩短（P<0.01,P<0.05）。与同组别基线比较,各组各时间点SPT降低（P<0.01）,模型各组及中药、西药各6 w组FST延长（P<0.01,P<0.05）。1.4血清淀粉酶、尿D-木糖排泄率比较:造模3 w后血清淀粉酶和尿D-木糖排泄率均降低（P<0.01）,至造模6周时更低（P<0.01）。1.5海马CA1区病理改变:HE染色:空白组海马CA1区神经元数量、分布、形态均无异常,圆形胞核清晰居中。模型3w组神经元数量减少,排列及形态不规则,细胞大小不一,部分呈三角形,细胞核深染、固缩,核仁显示不清;至6w时损伤进一步加重。各用药组有不同程度改善,以中药6 w组和联合组较为明显。尼氏染色:空白组海马CA1区神经元正常分布,胞质内可见丰富的尼氏小体,近胞核处呈“虎斑样”,远端呈细颗粒样,核仁清晰。模型3 w组细胞排列散乱,胞质内尼氏小体减少。至6w时,损伤加重,细胞皱缩明显,部分细胞尼氏体减少,并可见中央性染色质溶解现象。各用药组损伤逐渐恢复,以西药3 w组及中药6 w组明显。2.第二部分2.1神经元超微结构:正常组神经元突起较多,线粒体正常,突触结构完整,突触小泡较多。造模3 w后,线粒体肿胀,嵴断裂,突触小泡数量减少。至造模6 w,损伤加重,突触间隙显示不清,突触小泡减少,聚集分布,线粒体膜破坏,嵴断裂,基质空泡样变。各用药组上述损伤减轻。2.2线粒体体视学:模型各组Vvm较空白组升高（P<0.01）,NM、δ、δm降低（P<0.01）。与模型组比较,各给药组Vvm降低（P<0.01,P<0.05）,各6 w组NM升高（P<0.01）,中药、联合各组及西药6 w组δ、δm升高（P<0.01,P<0.05）。较中药组,西药6 w组δ、联合6 w组Vvm降低（P<0.01）,联合各组δm升高（P<0.01,P<0.05）。2.3突触体视学:模型各组数密度（Nv）、面密度（Sv）、突触小泡面数密度（NS）均较空白组降低（P<0.01）。中药、联合各6 w组Nv、Sv、Ns较模型组升高（P<0.01,P<0.05）。2.4高尔基染色:模型各组Sholl交点数及树突棘较空白组减少（P<0.01）。中药、联合各组Sholl交点数较模型组增多（P<0.01,P<0.05）,中药、西药各6 w组及联合各组树突棘密度升高（P<0.01,P<0.05）,且联合6 w组较中药、西药各6w组升高（P<0.05）。2.5突触体突触重塑蛋白:与空白组比较,模型3 w组GAP-43、PSD-95增加（P<0.01）,6w组降低（P<0.05）,各组SYN、syntaxin 1均降低（P<0.01）。与模型组比较,中药、联合各组及西药3 w组GAP-43、PSD-95增加（P<0.01,P<0.05）,中药、联合各组SYN升高（P<0.01）,中药、西药及联合各6 w组syntaxin 1升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,西药6 w组SYN降低（P<0.05）,联合6 w组GAP-43增加（P<0.01）。2.6线粒体生物合成蛋白:模型各组SIRT1、PGC-1α、AMPK-α1、Tfam、NRF1较空白组均降低（P<0.01）。与模型组比较,西药3 w组SIRT1和AMPK-α1、联合各组SIRT1、PGC-1α、Tfam升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,联合3 w组AMPK-α1、6w组PGC-1α表达升高（P<0.01）。3.第三部分3.1细胞毒性实验:经免疫荧光鉴定,培养的海马神经元符合神经元细胞特征。经CCK8实验,确定醒脾解郁方含药血清浓度为高剂量组10%、中剂量组10%和低剂量组20%,作用时间确定为24h。3.2线粒体生物合成蛋白表达:与CON组比较,CORT组、CORT+E组SIRT1、PGC-1α、NRF1、Tfam 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X 的 H、M 组 SIRT1、NRF1、Tfam 升高（P<0.01）,CORT+E 组 SIRT1 降低（P<0.05）,CORT+X（H）组PGC-1α 升高（P<0.01）。与 CORT+E 组比较,CORT+E+X（H）组 PGC-1α、Tfam 升高（P<0.05）,CORT+E+X（M）组 NRF1、Tfam 升高（P<0.01）。3.3突触重塑蛋白表达:与CON组比较,CORT组、CORT+E组GAP-43、SYN、PSD-95 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X 的 H、M 各组 GAP-43、SYN 升高（P<0.01）,CORT+X（H）组 PSD-95 升高（P<0.01）。与 CORT+E 组比较,CORT+E+XPJYF 的 H、M、L 组 GAP-43、SYN、PSD-95 升高（P<0.01,P<0.05）。3.4 5-HT、DA及其受体mRNA含量:与CON组比较,CORT组、CORT+E组5-HT、DA、5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X（H）组 5-HT、DA 升高（P<0.05）,CORT+E 组 5-HT 降低（P<0.05）,CORT+X 的 H、M组 5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 升高（P<0.01）。与 CORT1+E 组比较,CORT+E+X（H）组 5-HT 升高（P<0.05）,CORT+E+XPJYF 的 H、M、L 组 5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 升高（P<0.01,P<0.05）。4.第四部分4.1线粒体合成基因表达:模型各组SIRT1 mRNA、PGC-1α mRNA较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,各给药组 SIRT1 mRNA、PGC-1αmRNA、AMPK-α1 mRNA 均升高（P<0.01）,中药6w组、西药及联合各组NRF1 mRNA升高（P<0.01）,西药3 w组、中药及联合各组Tfam mRNA表达均升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,联合各组SIRT1 mRNA、PGC-1α mRNA、NRF1 mRNA 均升高（P<0.01）,西药 3 w 组 SIRT1 mRNA升高（P<0.01）。4.2突触微环境蛋白表达:模型各组NeuN、GFAP、VEGF较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,中药及联合各组NeuN、GFAP、VEGF均升高（P<0.01,P<0.05）,西药各组GFAP升高（P<0.01）,西药3 w组VEGF升高（P<0.01）。与中药组比较,西药各组GFAP 降低（P<0.05）,联合各组 GFAP 升高（P<0.01）,联合 3 w 组 VEGF 升高（P<0.05）。结论:1.慢性束缚应激3周时,动物模型符合肝郁脾虚型抑郁症标准,脑内海马CA1区神经元损伤,且随应激时间延长,损伤程度加重。中药醒脾解郁方和西药草酸艾司西酞普兰均可不同程度减轻神经元损伤,改善抑郁样行为,中药的远期保护优势较西药明显,且以两者联合应用作用更为显着;2.抑郁模型大鼠脑内海马CA1区神经元突触超微结构破坏,线粒体损伤,突触重塑功能降低,与AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物合成减少直接相关。中药醒脾解郁方和西药草酸艾司西酞普兰均可动态调控该信号通路,促进海马神经元突触重塑,但二者作用的优势环节不同,西药在调节神经递质方面更具优势,而中药在改善线粒体功能方面更为明显,且中药的远期作用效果优于西药。3.抑郁症海马神经元突触微环境中星形胶质细胞、微血管内皮细胞及微血管基底膜损伤,与神经元突触重塑相关。中药醒脾解郁方可通过调控AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路增加线粒体生物合成,保护突触微环境,促进抑郁症神经重塑,作用较西药草酸艾司西酞普兰更具优势,且中西药联合应用效果显着。
封秀梅[3]（2020）在《针刺促进面神经损伤修复的GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路的自噬机制研究》文中研究说明目的:本研究在针刺治疗周围性面瘫疗效确切的前提下,探讨细胞自噬、GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路在针刺促进面神经损伤修复中的作用,拟揭示针刺治疗该病的自噬机制,以期为临床治疗提供科学依据。方法:实验一:选取雄性SD大鼠60只,随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组、针+3-MA组,每组12只。采用面神经压榨法制备面神经损伤大鼠模型。于术后1天针刺患侧地仓、颊车、翳风、合谷穴,电针10min后留针20min,总治疗时间30min,每日1次,连续治疗5天为1个疗程,疗程之间间隔2天,共治疗2个疗程。采用Simone10分法分别于术后1天、4天、7天、10天和13天进行行为学评分,评估面神经功能损伤及恢复情况,治疗结束后切取患侧面神经组织,运用HE染色法观察其形态学改变,采用免疫组化法、免疫荧光法和RT-PCR技术检测自噬水平。实验二:选取雄性SD大鼠60只,随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组、针+GDNF拮抗剂组,每组12只。模型制备及针刺操作同实验一。采用Simone10分法评估面神经功能恢复情况,治疗结束后切取面神经组织,运用免疫组化法检测GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路的表达水平。结果:1.行为学评分与空白组比较,假手术组行为学评分无统计学差异（均P>0.05）;与假手术组比较,模型组评分显着降低（均P<0.01）。术后第2周,与模型组比较,针刺组评分升高（P<0.05,P<0.01）;与针刺组比较,针+3-MA组和针+GDNF拮抗剂组评分降低（均P<0.05）。2.面神经形态学观察镜下观察到空白组和假手术组面神经形态结构基本正常,无明显病理损伤;模型组面神经形态结构损伤,神经纤维固有的束状结构崩解消失,呈丝网状结构甚至空环状结构;针刺组面神经纤维肿胀变性,但排列较整齐;针+3-MA组面神经形态结构不完整,部分轴突和髓鞘呈点片状丧失。3.自噬水平检测与空白组比较,假手术组Beclin1蛋白、LC3蛋白和LC3mRNA表达水平无统计学差异（均P>0.05）;与假手术组比较,模型组Beclin1蛋白、LC3蛋白和LC3mRNA表达水平显着升高（均P<0.01）,P62蛋白及其mRNA表达水平显着降低（均P<0.01）;与模型组比较,针刺组Beclin1和LC3的蛋白表达水平明显降低（均P<0.01）,P62蛋白及其mRNA表达水平明显升高（均P<0.01）,而LC3mRNA表达水平呈降低趋势（P>0.05）;与针刺组比较,针+3-MA组Beclin1蛋白、LC3蛋白和LC3mRNA表达水平降低（P<0.05,P<0.05,P<0.01）。4.GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路检测与空白组比较,假手术组GDNF、Rai、PI3K和mTOR的蛋白表达水平无统计学差异（均P>0.05）;与假手术组比较,模型组GDNF、Rai、PI3K和mTOR的蛋白表达水平显着降低（均P<0.01）;与模型组比较,针刺组GDNF、Rai、PI3K和mTOR的蛋白表达水平明显升高（均P<0.01）;与针刺组比较,针+GDNF拮抗剂组GDNF、Rai、PI3K和mTOR的蛋白表达水平显着降低（均P<0.01）。结论:1.针刺可改善面神经运动功能和组织形态结构,从而促进面神经损伤的修复。2.针刺可能通过促进GDNF表达,激活PI3K-Akt-mTOR信号通路,下调Beclin1及LC3的表达并上调P62的表达,抑制自噬水平,进而改善面神经运动功能,抑制GDNF的表达后,针刺对面神经运动功能的改善作用不明显。
黄辰[4]（2019）在《不同电针刺激量对面神经压榨伤模型大鼠的组织形态学及效应差异的研究》文中提出目的:基于课题前期研究基础,本研究以面神经干压榨伤大鼠为研究载体,拟从构成电针刺激量的重要参数——强度、频率、时间和疗程入手,设定轻、中、重度三种刺激量,筛选电针治疗周围性面瘫大鼠的有效刺激量,为中医经典理论“中病即止”的现代研究提供科学的实验依据。方法:实验一:选Sprague-Dawley（SD）雄鼠40只,用面神经主干压榨方法制备大鼠周围性面瘫模型,按造模压榨时间和压榨方法的不同,将大鼠随机分为5组,每组8只:空白组,1min A组（正面压榨30s,松开30s,反面压榨30s）,1min B组（单纯压榨1min）,3min组（单纯压榨3min）,5min组（单纯压榨5min）。观察各组大鼠14天内的自愈情况,期间不做任何干预措施,在术后1天、7天、14天采用Simone10分法做行为学检测,再于14天后取受损侧面神经组织,运用HE染色法,观察面神经组织形态学改变、记录面神经分级,比较各组之间的损伤差异,筛选出一种自愈周期长、损伤较严重的面瘫大鼠模型制作方法,为下一步电针疗效的客观评价做准备。实验二:本实验是以刺激量和疗程两因素为主的3*5析因设计,选Sprague-Dawley（SD）雄鼠90只,采用随机数字表法先按照刺激量分为空白组、模型组、电针轻刺激组、电针中刺激组、电针重刺激组;每组再根据疗程（7天、14天、21天）分为3个亚组,共15组,每组6只;采用实验一筛选出造模方法,各组于造模后1天进行电针干预,选患侧合谷、地仓、颊车、翳风4穴,电针各组在固定以下参数:波形（疏密波）、强度（1Hz）、总治疗时间（30min）后再根据相应设定的不同刺激量进行治疗,7天为1疗程,每日一次,连续治疗5天,休息2天;模型组、空白组同法固定束缚,各组分别于相应疗程结束后切取受损侧面神经、面肌组织运用HE染色法,观察其形态学改变,记录行为学评分、面神经分级、计算面肌肌纤维直径,筛选电针治疗本病的有效刺激量。结果:实验一:从行为学评分结果看,造模后1天后,4种不同的压榨时间组评分均低于4分,与空白组相比评分显着下降（P<0.01）;在造模7天、14天后均出现:与空白组相比,1minB组评分下降（P<0.05）、1minA组、3min组、5min组评分显着下降（P<0.01）;4种不同压榨时间组间对比差异无统计学意义（P>0.05）。造模14天后,面神经分级结果示:与空白组相比,1minB组分级较低（P>0.05）,3min组、5min组两组分级较高（P<0.05）,1minA组分级最高（P<0.01）;1minA组和3min组、5min组三组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。实验二:1.从行为学结果看,与空白组相比:模型三个疗程组评分均降低（P<0.05）,与模型组比:电针各组1、2、3疗程较模型组评分均升高（P<0.05）,2疗程后轻刺激组先恢复至空白组无差异（P>0.05）,3疗程后电针三组均恢复至与空白组无差异（P>0.05）;电针三组在三个疗程中均出现:三电针组之间比较无较大差异（P>0.05）;7d组和14d组、14d组与21d组差异无统计学意义,7d组与21d组差异有统计学意义（P<0.05）。2.面神经分级结果看,与空白组相比:模型组、重刺激组三个疗程组均出现神经分级较高（P<0.05）,1疗程后轻刺激组最先恢复至与空白组无差异,3疗程后中刺激组恢复;与模型组比较:三个疗程轻刺激组神经分级均较低（P<0.05）,中刺激组1、2疗程无差异,3疗程与模型组比神经分级降低（P<0.05）,重刺激组3疗程与模型组均无差异;电针三组间比较:1疗程三组间无差异,2疗程后重刺激较轻刺激分级高（P<0.05）,3疗程后重刺激较轻、中刺激分级均较高（P<0.05）;重刺激三疗程组间比较无差异,中、轻刺激组在7d组与14d组、7d组与21d组评分有升高（P<0.05、P<0.05）,而21d组较14d组评分变化不大（P>0.05）。3.面肌纤维直径看,与空白组比:模型组1、2疗程面肌直径降低（P<0.05）,3疗程后恢复;电针三组与模型组比较,1疗程后各组与模型组相比差异不大,2疗程后轻刺激组面肌直径增大（P<0.05）恢复至与空白组无异,中、重刺激组面肌直径较模型组无明显差异（P>0.05）,3疗程后轻、中刺激与模型组无明显差异（P>0.05）,重刺激面肌直径大幅增大（P<0.05）;中刺激三个疗程组组间无差异,其余空白组、模型、轻、重刺激3疗程中随时间增加,面肌直径增大,其中7d组较21d组直径增加（P<0.05）。结论:1.不同压榨时间的神经压榨模型均能成功建立大鼠面瘫模型,其中1min A（正面压榨30s,松开30s,反面压榨30s）压榨方法为相对较优方案。2.电针刺激可加快面神经损伤的修复过程,促进面神经组织形态学恢复正常,但刺激量过度会引起损伤,应遵循“中病即止”的原则。3.电针治疗本病的有效刺激量为:轻刺激（疏密波1Hz、1mA刺激强度）、14天（2疗程）、电针刺激10min、留针20min。
李强[5]（2019）在《糖皮质激素通过下调P38 MAPK信号通路发挥抑制面神经核团凋亡作用的机制研究》文中进行了进一步梳理［背景］面神经具有走形较长的解剖特征,外伤或者一些医源性损伤因素易造成面神经的损伤,并导致部分或者完全性的面神经麻痹,严重影响人们的日常生活。其中面神经损伤最主要的原因是颅脑外伤,其导致的面神经断裂一般采用手术修补的方法,而又有一种较为特殊的外伤所致面瘫,称为迟发性面瘫,临床上目前主要采用糖皮质激素保守治疗,在一定程度上糖皮质激素的治疗取得了一定的疗效。同时有很多的研究表明了糖皮质激素在各种类型的面神经损伤治疗中都有相对良好的治疗作用。糖皮质激素之所以可以发挥其作用主要是因为糖皮质激素通过某种途径或是通路调控了面神经细胞的凋亡,而p38MAPK通路在各种凋亡反应中被激活,是与凋亡密切相关的重要通路。本研究就是通过临床病例与基础研究相结合,从而探索颅脑外伤后面神经损伤的临床特点及糖皮质激素是否通过p38 MAPK通路来调节面神经损伤后神经细胞凋亡。［目的］（1）通过临床病例观察发现延迟性面神经麻痹的临床特征及转归;（2）通过蛋白质组学分析找到可能影响面神经损伤后神经细胞凋亡、分化及再生的通路或基因;（3）用实验方法验证p38 MAPK通路确实参与了面神经损伤后面神经核团细胞的凋亡;（4）验证糖皮质激素是通过抑制p38 MAPK通路调控面神经核团细胞的凋亡。［方法］本研究分为三部分:（1）临床研究部分:从2008年3月至2019年3月期间由于头部外伤收住兰州大学第二医院的1620例患者中找到的迟发性面瘫患者共35名,通过评估其面瘫等级及其在特定时间内的恢复情况,总结颅脑外伤后迟发性面瘫的临床特征及转归;（2）面神经损伤后的面神经核团蛋白质组学分析:构建大鼠面神经挤压模型,对照组为假手术组,从两组中各挑选3只,取脑组织随后将面神经核团的蛋白质进行定性及定量分析,找出差异蛋白,随后进行生物信息学分析,运用R软件制作火山图及热图,随后进行GO和KEGG富集分析及PPI蛋白互作网络,找到可能富集的基因条目及相关通路;（3）研究p38 MAPK通路在面神经损伤细胞凋亡中的作用及糖皮质激素是否作用于该通路。将大鼠随机分为五组:（1）假手术组;（2）挤压模型+生理盐水;（3）挤压模型+糖皮质激素;（4）挤压模型+p38 MAPK通路阻断剂;（5）挤压模型+p38MAPK通路阻断剂+糖皮质激素。通过评估面瘫大鼠面神经恢复情况、面神经损伤处断端横截面电镜组织切片观察各组的面神经功能及形态差异,随后通过q PCR及Western-Blot检测各组大鼠面神经核团细胞中Caspase3、Bcl-2、Bax、p38、p-p38的基因及蛋白表达水平,随后再通过HE染色观察面神经核团病理变化及TUNEL法观察面神经核团细胞凋亡情况。［结果］（1）35名患者中,18名右侧出现面瘫,17名症状在左侧;30名患者受伤后出现不同程度的昏迷,其中2例为深度昏迷;骨折类型包括纵向骨折（17例）、横向骨折（5例）和混合型骨折（3例）;在33名接受保守治疗的患者中,27名患者（81.8%）完全恢复,3名患者（9.1%）恢复到Ⅱ级,3名患者（9.1%）恢复到Ⅲ级或Ⅳ级。2名接受手术治疗的患者分别得恢复至Ⅱ和Ⅲ级。（2）面神经挤压模型相比较假手术组的面神经核团蛋白质组学,有233个上调的基因以及11个下调的基因;GO富集了6种分子功能和12种生物过程;KEGG中富集了18个有意义的信号通路。（3）Bax、Bcl-2及Caspase3的q PCR及Western-Blot结果:面神经损伤后Bax及Caspase3的基因表达上调,同时运用糖皮质激素及阻断剂均下调了Bax及Caspase3的基因和蛋白表达,上调了Bcl-2的基因和蛋白表达。（4）p38和p-p38的Western-Blot结果:C组（挤压模型+糖皮质激素）、D组（挤压模型+阻断剂）及E组（挤压模型+阻断剂+糖皮质激素）较B组（挤压模型+生理盐水）p38和p-p38的蛋白表达水平明显下调。（5）HE染色及TUNEL结果:C组（挤压模型+糖皮质激素）、D组（挤压模型+阻断剂）及E组（挤压模型+阻断剂+糖皮质激素）中的细胞凋亡明显比B组（挤压模型+生理盐水）轻。［结论］（1）头部外伤后,迟发性面瘫的发生率为2.2%,一般发生在受伤后2周;颞骨骨折和耳出血在头部外伤后迟发性面瘫患者中较为常见;头部外伤后迟发性面瘫一般不需要减压手术,保守治疗就可以达到较好的效果。（2）p38 MAPK通道在面神经损伤后面神经细胞凋亡中可能起到主要作用。（3）糖皮质激素是通过降低p38磷酸化进而下调p38 MAPK通路来减少面神经损伤后面神经核团细胞的凋亡,从而促进面神经功能恢复。
吴莉[6]（2016）在《BMSCs与单核细胞联合移植促进面神经修复及MR活体示踪》文中进行了进一步梳理[背景与目的]面神经轴索损伤（facial nerve axotomy, FNA）后若面部表情肌功能无法恢复,严重影响患者生活质量。目前临床上以面神经原位修复为主,虽术后面肌功能临床恢复满意,但仍有部分患者感到神经功能同前有明显差异,因此面神经修复与重建是整形及神经领域的一大难题。面神经轴索损伤后,面神经核内面神经元（facial motoneuron, FMN）会出现凋亡,维持神经元存活状态是损伤后神经功能恢复的基础。轴索损伤后面神经核内有40%的FMN存活依赖有功能的外周免疫系统和／或神经营养因子的参与。因此探讨轴索损伤后神经元凋亡发生的机制、采取方法改变面神经核内神经免疫炎症微环境,阻止FMN的凋亡是目前研究的热点之一。骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）移植后可在中枢神经系统微环境下转化为类神经元样细胞或神经干细胞,替代凋亡或坏死的神经元,还可分泌多种有利于神经元生长存活的神经营养因子,因此可以治疗神经系统疾病或损伤。然而大量研究表明移植的BMSCs由于局部损伤性炎症微环境、缺氧或血流不足等因素,活率较低。面神经轴索损伤后,断端损伤信号沿近端轴突进入FMN,导致面神经核内神经免疫-炎症微环境失去生理性平衡变为促炎状态,该促炎微环境趋化外周T淋巴细胞及自体干细胞向面神经核内募集。其中T淋巴细胞亚群中CD4+ CD25+调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）在维持面神经核内免疫炎性微环境平衡中起主要作用,且对神经元凋亡具有保护作用。自体干细胞可分化为神经细胞替代或营养损伤FMN,但损伤初期面神经核内的促炎微环境不利于干细胞存活,趋化的自体干细胞也不足以弥补损失的FMN。研究认为BMSCs具有免疫抑制作用,可以抑制T淋巴细胞细胞增殖,调节机体内免疫反应,减轻免疫反应的程度,提高体外混合淋巴细胞培养中Treg细胞比例。基于以上理论基础,本课题组提出假设,寻找SD大鼠BMSCs与脾脏单核细胞最佳共培养比例,进行脑干立体定位面神经核层面共培养细胞移植,一方面可提高面神经核内具有神经保护做用的Treg细胞比例,同时改善面神经核内神经-免疫炎症微环境,提供有利于移植BMSCs趋化、存活、分泌神经营养因子的微环境,挽救微依赖环境存在的面神经核内40%的FMN,从而为临床进行面神经损伤的修复与重建提供基础性研究依据。研究干细胞移植后在体内分布、迁移、分化及归巢等现象,有助于了解干细胞的修复机制,因此本研究采用MR分子成像标记物超顺磁性氧化铁纳米颗粒（superparamagnetic iron oxide, SPIO）与绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）共同标记BMSCs,同时采用组织学与活体MR示踪方法显示BMSCs的归巢现象。[方法]1.体外将从SD大鼠胫腓骨骨髓分离培养鉴定后的BMSCs及转染GFP的BMSC （GFP-BMSC）标记不同浓度的SPIO后,检测BMSC/GFP-BMSCs的增殖活性、细胞周期,明确不同浓度SPIO对细胞的活性的影响；试管内MR成像,了解不同浓度SPIO标记细胞体外MR成像信号强度变化；将标记后的BMSC/ GFP-BMSC进行成骨、成脂、成类神经元样细胞诱导分化,明确SPIO对BMSCs分化的影响。2.将BMSCs与单核细胞按不同比例共培养后检测BMSCs对T细胞增殖的抑制作用及对Treg细胞（Regulatory T cell,）比例影响,抑制最明显及Treg比例最高组设为共培养1组；采用蛋白芯片筛选共培养细胞及单独培养细胞裂解液及上清液内差异蛋白；检测单核细胞对BMSCs向面神经元分化的影响,将向神经元分化最好的一组设为共培养2组；3.建立右侧面神经损伤模型,4天后将最佳配比共培养细胞及单独培养4天的细胞行脑干立体定位面神经核层面细胞移植。4.根据移植细胞成分不同,将动物分为6组（阴性对照组,阳性对照组,单独单核淋细胞组,共培养1组,单独BMSCs组,共培养2组）移植后当天及第3d、7d、14d、21d、28d MR扫描活体示踪及面神经核层面组织学示踪BMSCs归巢情况；各时间点检测面神经核内神经-免疫炎症微环境相关细胞因子（蛋白芯片筛选出的差异蛋白）趋化因子,神经营养因子表达量变化及信号通路变化,比较免疫炎症微环境相关因子变化与面神经核内神经元凋亡数量的相关性。[结果]1.成功从SD大鼠胫腓骨分离BMSCs细胞,第三代培养4天后检测CD29,CD90阳性,CD34阴性；成功将BMSC/GFP-BMSCs标记不同浓度的SPIO （25μg/ml, 50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml, 0μg/ml, A-E组）；检测BMSC/GFP-BMSCs的增殖活性D浓度组最低,细胞周期A～E组无差异,试管内MR成像A-D组信号均减低,D组最低,C、D浓度组无统计学差异。MR成像SWI较T2*WI敏感；成功将标记后的BMSCs/GFP-BMSCs诱导成骨、成脂、成类神经元样细胞分化,结果显示75μg/ml的SPIO信号减低明显且对BMSCs分化无影响。2.将单核细胞与BMSCs按不同比例（单独单核细胞,单独单核细胞与PHA,1：1,1：10,1：30,1：50,单独BMSCs,1：1,10：1,30：1,50：1,即A～K组）共培养后,单核细胞与BMSCs比例为1：30时（共培养1组）,CD4+T/CD8+T比值及Treg细胞比例最高；比例为30：1时（共培养2组）,BMSCs向类神经元细胞诱导分化最好。蛋白芯片筛选结果显示,共培养1、2组较单独培养细胞细胞裂解液上调的蛋白为：VEGF、BDNF、CXCR4、CD34,上清液上调蛋白为VEGF、TGF-β、 IL-4、EL-10,下调的蛋白为IL-2,INF-γ; PCR检测Tub 3, Nestin, NSE, Syt 1 mRNA表达量,诱导前较诱导后明显升高。3.成功建立单侧面神经高位损伤模型125只,建立阴性对照组（耳后切口找到面神经,不切断）模型25只,建模后第4天进行脑干立体定位面神经核层面细胞移植均成功,均未出现死亡或其他并发症。4.150只SD大鼠,移植当天MR扫描均显示,移植处SWI小点状低信号。移植后3d,7d,14d,21d,28d MR显示小点状低信号逐渐向面神经核区域移动,其中共培养2组移动最快,其次为共培养1组,与此同时病理切片显示GFP阳性细胞向面神经核归巢;各组各时间点Tunel染色及Weston blot检测Caspase-3及Bcl-2表达量变化显示,3-21d细胞凋亡量增加,21d后开始下降,共培养2组细胞凋亡数量最少；Weston blot及Q-PCR检测面神经核内各移植组各因子均在3-14d表达量增加,一般14d或21d达高峰,21d后开始下降：抗炎细胞因子IL-4,IL-10,TGF-β1及JAK/STAT6信号通路,趋化因子SDF-1/CXCR 4轴,BDNF及trkB/ERK信号通路,共培养2组表达量均最高,其次为共培养1组,再次为单独BMSCs组,阳性对照组表达量最低；促炎细胞因子INF-γ,IL-2及IL-6共培养2组表达量最低,共培养1组稍高,阳性对照组表达量最高。[结论]1.GFP与75μg/mL的SPIO双标不影响BMSCs的增殖及分化能力；SWI序列较T2*WI更敏感的显示75μg/mLSPIO标记的GFP-BMSCs引起的MR信号强度变化。2. BMSCs在体外可以抑制PHA引起的淋巴细胞增殖,提高CD4+T/CD8+T比值及CD4+CD25+T （Treg）细胞比例,使Thl/Th2向Th2抗炎方向“漂移”,促进TGF-γ、IL-4,IL-10分泌,减少IL-2、INF-γ分泌,从而改变BMSCs生存微环境,最佳单核细胞与BMSCs细胞数比例为1：30。3. BMSCs与单核细胞共培养,可促进BMSCs向类神经元方向分化,向面神经核趋化,提高BMSCs分泌BDNF. VEGF,最佳单核细胞与BMSC细胞数比例为30：1。4.茎乳孔处高位切断面神经可建立稳定可重复的单侧面神经损伤模型。5.脑干立体定位面神经核层面细胞移植方法可靠,采用建模后第4天移植,细胞量为1×106/5μL PBS.6.面神经轴索损伤致面神经核内抗炎／促炎微环境发生“漂移”,神经-免疫炎症微环境发生变化使FMN凋亡增加。7. BMSCs及单核细胞联合移植,改善面神经核内神经-免疫炎症微环境,IL-4通过JAK/STST6信号通路抑制炎症发生,促进移植BMSCs趋化、分化、分泌BDNF, BDNF通过trkB/erk信号通路抗神经元凋亡。
李宗芳,张振光,龚霞蓉,田伟,戴敏方,刘流[7]（2014）在《大鼠面神经高位损伤后面神经核区磁共振波谱成像》文中进行了进一步梳理目的探讨质子磁共振波谱成像（1H-MRS）对大鼠面神经高位损伤后面神经元细胞凋亡检测的价值。方法 20只正常SD大鼠（对照组）和20只面神经高位损伤SD大鼠（实验组）分别行1H-MRS并测量面神经核区N-乙酰天门冬氨酸（NAA）、肌酸（Cr）和胆碱（Cho）的峰下面积,比较两组间NAA、Cho、NAA/Cr及Cho/Cr的差异。1H-MRS检查后取对照组2只与实验组4只行面神经核苏木素-伊红（HE）、甲胺苯蓝（TB）和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记（TUNEL）染色。结果与对照组相比,实验组NAA（t=3.159,P<0.05）及NAA/Cr（t=3.782,P<0.05）明显降低,同时实验组面神经核区HE、TB和TUNEL染色显示有大量凋亡细胞。结论 1H-MRS可以作为一种无创性评价面神经损伤后面神经核区神经元细胞凋亡的方法。
魏海刚,李蜀光,陈玉婷,蔡超雄,许彪[8]（2014）在《面神经损伤模型中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶相关蛋白表达与损伤相关性》文中研究说明背景:半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶在细胞凋亡中发挥着关键作用,但不同形式面神经损伤对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和8和cyto-c蛋白表达的影响及其相互关系,目前尚不清楚。目的:构建大鼠面神经压榨伤及低位切断伤模型,观察面运动神经元的形态学改变和死亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和8及cyto-c的表达变化并分析其相关性。方法:制作大鼠右侧面神经的压榨伤和低位切断伤模型,左侧为正常对照侧。用甲苯胺蓝染色及透射电镜观测面运动神经元形态学变化及其死亡情况,免疫组织化学法检测切断伤及压榨伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和8及cyto-c的表达变化。结果与结论:面神经切断伤及压榨伤均可引起面运动神经元死亡,死亡形式以凋亡为主。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、8,cyto-c蛋白表达阳性神经元分布于正常面神经核各亚核,切断伤组损伤侧细胞染色重于压榨伤组。损伤后3 d时各蛋白表达开始增强,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、8表达于伤后14 d而cyto-c则于伤后7 d时达到高峰。相关性分析结果显示:损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、8和cyto-c蛋白表达变化与面神经损伤形式、损伤时间有关,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8、cyto-c表达与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达相关。提示:半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8,cyto-c可能参与了激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的过程。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶级联反应在面运动神经元凋亡过程中有重要作用。
刘华蔚[9]（2014）在《面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究》文中指出第一部分、壳聚糖导管预防周围神经瘢痕的实验研究实验一壳聚糖导管预防兔面神经周瘢痕的实验研究目的：周围神经解剖性损伤后，神经周瘢痕的形成会压迫神经，阻碍轴突的再生，影响神经功能的恢复。应用可生物降解的壳聚糖导管作为物理屏障，观察其对兔面神经周瘢痕及神经内血运的影响。方法：新西兰大白兔36只，行腮腺大部切除，面神经解剖性损伤造模。随机分为覆盖组、包裹组、自体对照组。于术后4、12周采用Petersen分级评估面神经与周围组织粘连情况，采用组织学染色方法检测面神经周瘢痕及神经内血管密度，并采用触须运动、透射电镜、神经电生理等方法对面神经功能进行评估。结果：术后4周时petersen评分无明显差异（P>0.05），12周时瘢痕粘连较明显，覆盖组与包裹组解剖时较自体对照组容易（P<0.01）；术后4周覆盖组有髓神经纤维直径、髓鞘厚度、神经纤维数量均优于包裹组及对照组，具有统计学意义（p<0.05）；术后4、12周对照组胶原厚度大于覆盖组与包裹组，差异有统计学意义（P<0.01）；术后12周覆盖组与自体对照组两者纤维直径较接近，排列均整齐，髓鞘壁较厚，两组间无明显差异（P>0.05），包裹组纤维直径、髓鞘壁厚度、神经内血管密度均较小，与前两者存在显着性差异，具有统计学意义（p<0.05）。结论：壳聚糖导管作为物理屏障覆盖于面神经表面可有效减少神经周瘢痕的形成、减轻瘢痕对面神经功能的影响。实验二、壳聚糖导管复合透明质酸预防大鼠坐骨神经瘢痕的实验研究目的：观察将壳聚糖导管与透明质酸联合应用对大鼠坐骨神经1cm钳夹性损伤后神经功能的影响。方法：选用清洁级健康成年SD大鼠60只，坐骨神经钳夹损伤造模，随机分为覆盖组、覆盖+透明质酸组、钳夹组、钳夹+透明质酸组，每组15只。于术后4、8、12周对坐骨神经与周围组织粘连、神经周瘢痕增生情况进行观察，并对神经功能进行坐骨神经功能指数、组织学和神经电生理检测。结果：术后4周时坐骨神经功能指数、petersen评分、神经纤维计数、髓鞘厚度、有髓神经纤维平均直径各组间均无明显差异；术后8周、12周时，钳夹+透明质酸组其坐骨神经功能指数、petersen评分、神经纤维计数、髓鞘厚度、有髓神经纤维平均直径等各项指标均优于对照组。术后4、8、12周时神经外膜胶原厚度检测各组均明显低于对照组，差异有统计学意义（p<0.01），12周时HA组神经外膜胶原厚度要厚于壳聚糖组及壳聚糖+HA组，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：壳聚糖导管复合透明质酸可以促进鼠坐骨神经钳夹损伤的恢复，减少其神经周瘢痕的产生。实验三、壳聚糖导管植入对腮腺术后面神经功能恢复的临床效果观察目的：观察并比较壳聚糖导管应用于腮腺手术后对术后患者面神经功能恢复的影响。方法：75例腮腺肿瘤患者接受腮腺浅叶摘除术或腮腺全切手术，分为两组，一组应用壳聚糖导管覆盖面神经总干及各分支，一组为常规手术作为对照。在手术后7天、1月、3月、6月和9月分别进行超声检查和血常规检查并按HB标准观察面神经功能。结果：随访时间9月-50月，平均21.7月，75名患者中50名行腮腺浅叶摘除，25名行腮腺全切术，手术后不同时间的血常规检及超声查显示无论是应用壳聚糖组还对照组，患者均无异常，表明壳聚糖导管植入体内后不会引起不良反应。术后7天即刻面瘫发生率壳聚糖组（29/32，90.6%），对照组（39/43,90.7%）；永久性面瘫发生率面瘫发生率壳聚糖组（0/32，0%），对照组（2/43,4.7%）均无统计学差异（P>0.05）。术后7天对两组患者面神经功能行HB评分，结果两组患者面神经麻痹严重程度无显着性差异（P>0.05）。对患者面神经恢复速度进行检测，发现壳聚糖组神经恢复速度快于对照组，差异有显着性意义（P<0.01）。结论：壳聚糖导管具有良好的生物相容性，植入体内无不良反应，在腮腺手术后应用壳聚糖导管覆盖面神经对其功能恢复有一定促进作用。第二部分GDNF基因慢病毒载体的构建、病毒的包装及MSCs细胞的转染目的：构建携带EGFP和GDNF的慢病毒载体，利用其转染MSCs并对其进行鉴定，获得可稳定过表达GDNF的MSCs。方法：通过PCR扩增，BamHI和AscI双酶酶切目的基因片段， T4DNA连接酶连接,将目的基因GDNF插入慢病毒载体pLenti6.3MCSIRES2-EGFP,构建重组慢病毒。在lipofectamine2000介导下将构建成功的慢病毒转染人胚肾细胞系（293T），包装生产慢病毒,并测定病毒滴度。将包装好的慢病毒感染BMSCs,并对转染的细胞行病毒转染复数（MOI值）测定，筛选最佳感染复数。Western、RT-PCR分别检测转然后GDNF蛋白和mRNA的表达情况，流式细胞仪观察转染效率。结果：成功构建携带EGFP和GDNF的慢病毒，慢病毒转染MSCs后96小时强荧光表达，当MOI值为25时细胞荧光表达强且活性较好。Western和RT-PCR检测证实GDNF在MSCs中成功表达，流式细胞仪观察转染效率为94.2%。结论：成功将携带EGFP和GDNF的慢病毒转染MSCs，获得过表达GDNF基因的MSCs，为后期实验提供基础。第三部分、脱细胞神经复合GDNF转染的间充质干细胞修复兔面神经缺损的实验研究实验一、周围神经脱细胞方法的筛选目的：采用不同的方法对兔面神经进行脱细胞处理，对脱细胞神经组织学及体内植入进行检测，为面神经脱细胞方法的选择提供实验依据。方法：分别采用冻融法、化学法及冻融+酶消化法处理兔面神经，对处理的神经进行HE染色、扫描电镜观察和透射电镜观察其组织学结构；并将不同方法处理的神经进行兔背部皮下植入，于2、4周处死动物，行大体观察及组织学观察。结果：组织学观察见化学法（Hudson法）、冻融+酶消化法处理的神经其髓鞘清除较彻底，只有部分区域可见极少量髓鞘残留，冻融法处理的神经内可见髓鞘皱缩、变形但有较多残留。皮下埋植实验观察见单纯冻融法处理的神经内淋巴细胞浸润稍多，主要分布在神经束周边的基底膜间隙中，Hudson法、冻融+酶消化法处理的神经未见明显的炎性细胞浸润。结论：冻融+酶消化法处理方法简单、神经支架结构保存完整，神经内髓鞘等抗原成分去除较彻底，是一种良好的去细胞方法，为后期实验提供基础。实验二、脱细胞神经复合GDNF转染的MSCs修复兔面神经缺损目的：以脱细胞面神经为支架，复合GDNF转染的MSCs修复兔面神经多分支缺损，观察其对面神经再生及对面神经元存活的作用。方法：新西兰大白兔60只，面神经解剖性损伤造模。完全随机分为：脱细胞同种异体神经移植组（ANA），脱细胞异体神经+间充质干细胞组（AN-MSCs），脱细胞异体神经+GDNF转染的间充质干细胞（AN-G-MSCs），自体神经移植组（Control）。于术后4、12、24周时取材，对动物行大体观察并采用触须运动、神经电生理等方法对面神经功能进行评估，分别对移植神经的近端及远端行甲苯暗蓝染色、透射电镜观察其再生轴突的变化。结果：对面神经总干处神经轴突形态计量学分析发现，术后4周时脱细胞神经移植组其神经轴突计数、髓鞘厚度、髓鞘直径均明显低于其他三组，差异有统计学意义（P<0.05）；术后12、24周时检测发现各组间无明显差异（P>0.05）。面神经移植物远端术后12周时面神经各分支检测脱细胞神经移植与MSCs组神经轴突计数、髓鞘厚度、髓鞘直径均明显低于GDNF组与自体神经移植组，差异有统计学意义（P<0.05）。术后24周时脱细胞神经移植各项指标均低于其他三组.结论：将脱细胞神经与GDNF转染的MSCs联合应用可成功修复兔面神经多分支缺损，其修复效果优于单纯应用脱细胞神经，且可以一定程度上保护面神经元的存活。实验三同种异体神经移植修复面神经缺损的长期随访观察目的：临床应用脱细胞神经移植修复面神经缺损，并进行长期的随访，观察其修复效果及安全性。方法：2004年7月至2013年7月，因外伤或腮腺恶性肿瘤侵袭术中切除导致的面神经缺损44例，最终共有35例神经缺损修复患者完成随访观察，其中自体神经移植20例，脱细胞神经移植15例。术后最短随访时间为9个月，随访时分别进行局部超声检查和血常规检查，并按HB标准观察面神经功能。结果：随访时间9月-9年，面神经缺损长度10mm-50mm，其中术中一期缺损修复26例，二期手术移植9例，二期手术距损伤时间2天-3个月。术后随访时的血常规检及超声查均未发现无异常，表明脱细胞神经植入体内后未引起明显的不良反应。最终自体神经移植组与脱细胞神经移植组有意义的功能恢复分别为85%（17/20）和80%（12/15），无统计学差异（P>0.05）；术后HB分级比较发现脱细胞神经移植神经功能恢复情况稍弱于自体神经移植，但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：采用脱细胞神经在临床上修复面神经缺损并进行长期的随访观察，结果发现脱细胞神经可以修复面神经缺损，长期随访未发现明显的不良反应，其修复与自体神经移植接近。脱细胞神经移植可成为临床面神经缺损修复的一种选择。
熊佩[10]（2013）在《黄芩苷对帕金森病大鼠多脑区铁积聚及黑质DMT1、FP1的影响》文中研究表明目的帕金森病（Parkinson`s disease, PD）是一种常见的中枢神经系统退行性疾病。越来越多的研究提示过渡金属铁与帕金森病发生密切相关[1]。脑铁的异常增加会启动大量自由基生成和促进氧化损伤引起细胞死亡，可能是神经变性性疾病神经元死亡的原因之一[2]。但铁积聚与帕金森病演进性发展的关系还远未阐明。课题组前期的研究表明，黄芩苷可明显抑制鱼藤酮PD大鼠黑质（Substatialnigra，SN）铁的积聚，降低SN内二价金属离子转运体1（divalent metal transporter1, DMT1）的表达，同时升高膜铁转运蛋白1（ferroportin1, FP1）的表达，体现了黄芩苷的多巴胺能神经元的保护作用。同时，在细胞水平上也证明黄芩苷可通过与铁螯合，调节DMT1和FP1的表达抑制细胞内铁的积聚。本课题用黄芩苷对鱼藤酮PD模型大鼠进行治疗给药，应用免疫组织化学法（IHC）、高频电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-AES）、高效液相色谱法（HPLC）和蛋白质印迹法（Western Blot）等观察不同脑区以及多脏器铁代谢的变化；检测纹状体DA及其代谢产物和脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量，测定黑质中酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）、DMT1、FP1的表达。研究PD大鼠中脑黑质DA神经损伤、铁积聚、铁转运蛋白表达之间的关系，认识鱼藤酮PD大鼠不同脑区铁的分布、积聚和多脏器铁代谢的特点，黄芩苷对铁积聚和多脏器铁代谢的影响。探讨脑内铁病理性沉积与PD的关系以及黄芩苷保护DA能神经、抑制铁积聚的机理。方法实验用雄性Wistar大鼠，除随机选取11只为正常组动物外，其余大鼠均颈背部皮下注射鱼藤酮(2mg kg-1d-1)油乳液4-6周制备PD模型，按照本室所建立的神经行为学记分标准记分，取2分模型用于本实验。随机分为3组：①模型组；②黄芩苷组；③去铁胺组。⑴斜板实验观察PD大鼠肌强直及耐力变化；⑵免疫组织化学方法观察PD大鼠纹状体、中脑黑质TH的改变以及海马、黑质中DCX（Doublecortin）表达的变化；⑶铁染色组织化学法检测PD大鼠纹状体、海马、黑质、小脑铁含量的变化；⑷尼氏染色法检测PD大鼠海马尼氏小体的表达；⑸高频电感耦合等离子法测定PD大鼠黑质、肝、肾、心脏、小脑中铁含量的改变；⑹酶标法测定PD大鼠小脑、心脏、肾脏、肝脏中MDA的含量；⑺高效液相色谱法测定纹状体内DA及其代谢产物HVA,DOPAC含量。结果1黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠黑质多巴胺能神经的保护作用（1）大鼠造模成功时，表现为体重明显减轻（P<0.01），拒捕行为减弱，竖毛，毛色变脏变黄，弓背，主动活动减少，动作迟缓，并有震颤或步态不稳等状态。模型组造模成功后2w内，除竖毛外上述表现加重，给药组大鼠神经行为学症状有所改善。（2）斜板实验中：模型大鼠斜板下滑次数在模型建成时、建成5w、8周时均较正常组显着增加（P<0.01）；与模型建成5w相比，黄芩苷、去铁胺治疗5w大鼠斜板下滑次数均明显减少（P<0.01）；与模型8w相比，黄芩苷、去铁胺治疗8w大鼠斜板下滑次数仍呈现显着性差异（P<0.01）。（3）模型大鼠纹状体、黑质DA能神经元均显着脱失（P<0.01）；黄芩苷、去铁胺治疗8w均可显着减少黑质DA能神经元（TH阳性细胞）脱失（P<0.01），体现了黄芩苷、去铁胺对黑质DA神经细胞有保护作用；而黄芩苷、去铁胺组纹状体TH染色无明显变化（P>0.05）；（4）各组大鼠纹状体DA及其代谢物HVA,DOPAC含量均无显着性变化；（5）模型大鼠海马尼氏小体染色积分光密度值（IOD）较正常组显着减少（P＜0.01），黄芩苷和去铁胺给药治疗8w后，海马尼氏小体染色IOD较模型组显着增加（P＜0.01或P＜0.05）（6）模型大鼠海马区DCX （Doublecortin）染色IOD较正常组明显减少（P＜0.01），而黑质部位DCX染色IOD较正常组显着性增加（P＜0.01）。黄芩苷和去铁胺给药治疗8w后，黄芩苷组海马区IOD均显着性增加（P＜0.01）,去铁胺组无明显变化；黄芩苷组、去铁胺组黑质DCX染色IOD均显着性降低（P＜0.01）2黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠不同脑区铁积聚以及多脏器铁代谢的影响（1）模型大鼠纹状体苍白球、黑质致密部、海马齿状回颗粒细胞层、小脑齿状—间位核及小脑面神经核中铁染色积分光密度值较正常组明显增多（P＜0.01）；黄芩苷、去铁胺给药治疗8w组大鼠上述脑区铁染色积分光密度值均显着减少（P＜0.01）。（2）模型大鼠肝脏铁含量较正常组大鼠有显着性增加（P<0.01），肾脏铁含量显着减少（P<0.05）；黄芩苷组、去铁胺组治疗8w组大鼠肝脏铁含量显着降低（P<0.01或P<0.05）。而肾脏中铁含量无显着性变化。（3）模型组大鼠肝脏脂质过氧化水平显着增加（P<0.05），心脏、肾脏、小脑MDA含量均无明显变化；黄芩苷组和去铁胺给药治疗8w组大鼠上述脏器组织脂质过氧化水平无明显变化。3黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠中脑黑质铁积聚及转运相关蛋白表达的影响（1）电感耦合等离子发射光谱法检测模型大鼠中脑黑质铁含量较正常组大鼠有显着性增加（P<0.01），黄芩苷组和去铁胺组治疗8w组大鼠黑质铁含量显着降低（P<0.01）。（2）模型大鼠黑质DMT1蛋白表达较正常组显着性增加（P＜0.01），FP1蛋白表达较正常组显着减少（P＜0.01）；给药治疗8w后，黄芩苷组、去铁胺组DMT1蛋白表达显着下调（P＜0.01），去铁胺组FP1蛋白明显上调（P＜0.05），黄芩苷组无显着性变化。结论（1）鱼藤酮PD大鼠脑内纹状体苍白球，黑质致密部，海马齿状回颗粒细胞层，小脑齿状-间位核，小脑面神经核区域均存在铁的异常积聚，此一发现未见报道。PD大鼠肝铁升高，肾脏铁降低，可能存在多脏器铁代谢紊乱。人们已经明确认识到帕金森病患者的运动障碍是以锥体外系功能障碍为主的复杂症候群。铁的异常积聚可能不止存在对纹状体-黑质-多巴胺能系统的损伤，还可能存在对多脑区的影响，从而引发脑内多核团的退行性病变，提示抑制铁积聚在治疗PD中可能是药物作用的重要环节。（2）电感耦合等离子光谱法亦证明鱼藤酮PD大鼠中脑黑质铁含量显着升高，印证了铁染色的结果。同步发现DMT1表达增加、FP1表达降低，证明铁转运蛋白DMT1和FP1参与了黑质铁积聚的发生与发展，并进一步促进了DA能神经细胞损伤和帕金森病的发展。（3）黄芩苷能调节DMT1的表达，抑制不同脑区铁的异常积聚，降低肝脏铁含量调节多脏器铁代谢，减少细胞死亡，这可能是其保护DA神经的机制之一。与黄芩苷相比，去铁胺也表现出明显的DA能神经元保护作用，并且可同时调节DMT1、FP1的表达，减少中脑黑质铁的积聚。（4）黄芩苷、去铁胺可抑制鱼藤酮PD大鼠脑内纹状体苍白球，黑质致密部，海马齿状回颗粒细胞层，小脑齿状-间位核，小脑面神经核区域铁的异常积聚，还可降低肝脏铁含量调节多脏器铁代谢。此结果提示：黄芩苷、去铁胺的作用与螯合体内的铁有关。（5）鱼藤酮PD模型纹状体、黑质DA能神经元显着缺失，黄芩苷、去铁胺保护DA神经的作用机制可能主要与抑制多脑区铁积聚、从而抑制了铁转运蛋白DMT1、FP1表达改变有关。
二、面神经断裂后大鼠面神经核区神经元凋亡和星形胶质细胞变化的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、面神经断裂后大鼠面神经核区神经元凋亡和星形胶质细胞变化的实验研究（论文提纲范文）
（1）富血小板血浆和溴莫尼定在面神经夹挫伤的实验研究和机制探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 溴莫尼定对大鼠面神经夹挫伤动物模型疗效观察及作用机制的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 第二部分 富血小板血浆在面神经夹挫伤中的保护作用研宄 |
| 1 实验材料与设备 |
| 2 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文附文一 |
| 英文附文二 |
（2）基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 抑郁症现代医学研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 抑郁症中医药研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 1. 抑郁症病理机制中的线粒体损伤 |
| 2. 线粒体能量代谢障碍与突触可塑性损伤 |
| 3. 线粒体生物合成异常与抑郁症神经元突触重塑 |
| 4. 从“脾”论治抑郁症或成为中医治疗的新途径 |
| 参考文献 |
| 实验一 醒脾解郁方对肝郁脾虚抑郁大鼠行为学及海马神经元损伤的保护作用研究 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α介导的线粒体生物合成研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路探讨醒脾解郁方含药血清对皮质酮诱导海马神经元损伤突触重塑的影响 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路探讨突触微环境对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响及醒脾解郁方干预效应 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 结语 |
| 一、研究总结 |
| 二、初步结论 |
| 三、存在不足 |
| 四、创新点 |
| 五、展望 |
| 第四部分 附录 |
| 附录1: 致谢 |
| 附录2 攻读学位期间发表的学术论文及参与课题情况 |
| 附录3 个人简历 |
（3）针刺促进面神经损伤修复的GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路的自噬机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略表 |
| 引言 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究目的 |
| 3 研究内容 |
| 4 技术路线 |
| 实验研究 |
| 实验一 针刺对面神经损伤大鼠自噬水平的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 模型评判标准 |
| 2.4 干预方法 |
| 2.5 取材 |
| 2.6 检测指标 |
| 2.7 检测方法 |
| 2.8 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 一般状态观察 |
| 3.2 行为学评分结果 |
| 3.3 面神经组织病理结果 |
| 3.4 Beclin1 蛋白表达 |
| 3.5 LC3 蛋白及其mRNA表达 |
| 3.6 P62蛋白及其mRNA表达 |
| 4 实验小结 |
| 4.1 针刺对大鼠行为学评分的影响 |
| 4.2 针刺对大鼠面神经形态结构的影响 |
| 4.3 针刺对Beclin1、LC3和LC3mRNA表达的影响 |
| 4.4 针刺对P62和P62mRNA表达的影响 |
| 实验二 针刺对面神经损伤大鼠GDNF及 PI3K-Akt-mTOR信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 模型评判标准 |
| 2.4 干预方法 |
| 2.5 取材 |
| 2.6 检测指标 |
| 2.7 检测方法 |
| 2.8 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 行为学评分结果 |
| 3.2 GDNF蛋白的表达 |
| 3.3 Rai蛋白的表达 |
| 3.4 PI3K蛋白的水平 |
| 3.5 mTOR蛋白的表达 |
| 4 实验小结 |
| 4.1 针刺对大鼠行为学评分的影响 |
| 4.2 针刺对GDNF和 Rai蛋白表达的影响 |
| 4.3 针刺对PI3K-Akt-mTOR信号通路的影响 |
| 讨论 |
| 1 祖国医学对周围性面瘫的认识 |
| 1.1 对病名的认识 |
| 1.2 对病因病机的认识 |
| 1.3 对相关经脉和筋经的认识 |
| 1.4 对治疗的认识 |
| 2 现代医学对周围性面瘫的认识 |
| 2.1 对面神经解剖结构的认识 |
| 2.2 对损伤节段及临床表现的认识 |
| 2.3 对发病机制的认识 |
| 2.4 现代医学治疗 |
| 3 针灸治疗周围性面瘫的研究 |
| 3.1 针灸治疗周围性面瘫的临床评价 |
| 3.2 针灸治疗周围性面瘫的机制分析 |
| 4 自噬与周围神经损伤 |
| 4.1 自噬 |
| 4.2 自噬与周围神经损伤 |
| 4.3 调控自噬的信号通路 |
| 5 针刺调控自噬的实验研究 |
| 5.1 疾病研究特点 |
| 5.2 针刺对自噬水平的调节作用 |
| 5.3 自噬检测手段 |
| 5.4 自噬抑制剂和激活剂的使用 |
| 6 本研究实验方案的确立 |
| 6.1 动物模型的选择 |
| 6.2 干预措施的选择 |
| 6.3 检测指标的选择 |
| 7 本研究实验结果的分析 |
| 7.1 针刺对面神经功能和形态的影响 |
| 7.2 周围神经损伤修复与自噬水平的关系 |
| 7.3 针刺对自噬的调节作用 |
| 7.4 针刺对GDNF及 PI3K-Akt-mTOR信号通路的调节作用 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录一 附图 |
| 附录二 综述 自噬抑制剂3-MA在神经系统疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件一 在读期间公开发表的论着及取得的科研成果 |
（4）不同电针刺激量对面神经压榨伤模型大鼠的组织形态学及效应差异的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略表 |
| 引言 |
| 1.研究背景 |
| 1.1.周围性面瘫是临床常见病,影响患者生活质量 |
| 1.2.针灸治疗该病疗效确切,但刺激过量易继发损伤反应 |
| 1.3.“中病即止”中医传统理论的现代研究及机制探讨亟待加强 |
| 2.研究目的 |
| 3.研究内容 |
| 3.1.第一部分:面神经压榨伤模型时间的确立 |
| 3.2.第二部分:筛选电针促进面神经损伤修复的有效刺激量 |
| 实验研究 |
| 实验一 面神经损伤模型压榨时间的实验研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1.实验动物 |
| 1.2.主要试剂 |
| 1.3.主要仪器 |
| 1.4.耗材 |
| 2.实验方法 |
| 2.1.动物分组 |
| 2.2.模型的选择与制备 |
| 2.3.模型成功评判标准 |
| 2.4.取材 |
| 2.5.观察指标 |
| 2.5.1.一般状态观察 |
| 2.5.2.行为学评分 |
| 2.5.3.组织形态学观测 |
| 2.6.分析方法 |
| 2.7.技术路线图 |
| 3.实验结果 |
| 3.1.大鼠大体状态 |
| 3.2.行为学评分 |
| 3.3.面神经组织病理 |
| 3.3.1.面神经组织分级 |
| 3.3.2.面神经大体形态 |
| 3.4.实验小结 |
| 实验二 不同电针刺激量对面神经损伤修复的效应差异研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1.实验动物 |
| 1.2.主要试剂 |
| 1.3.主要仪器 |
| 1.4.耗材 |
| 2.实验方法 |
| 2.1.动物分组 |
| 2.2.模型的建立及模型成功标准 |
| 2.3.电针干预方案 |
| 2.3.1.穴位选取与定位 |
| 2.3.2.处理方法 |
| 2.3.3.电针组操作要求 |
| 2.4.取材 |
| 2.5.观测指标 |
| 2.5.1.一般状态观察 |
| 2.5.2.行为学评分 |
| 2.5.3.组织形态学观测 |
| 2.6.分析方法 |
| 2.7.技术路线图 |
| 3.实验结果 |
| 3.1.一般状态观察 |
| 3.1.1.各组术后状态观察 |
| 3.1.2.各组异常状态观察 |
| 3.2.行为学结果 |
| 3.2.1.固定疗程,不同刺激量间行为学比较 |
| 3.2.2.固定刺激量,不同疗程各组行为学比较 |
| 3.3.面神经分级 |
| 3.3.1.固定疗程,不同刺激量间神经分级 |
| 3.3.2.固定刺激量,不同疗程各组面神经分级 |
| 3.4.面肌纤维直径 |
| 3.4.1.固定疗程,看不同刺激量各组的成对比较 |
| 3.4.2.固定刺激量,不同疗程各组面肌直径变化 |
| 3.5.实验小结 |
| 3.5.1.电针对大鼠行为学影响 |
| 3.5.2.电针对大鼠面神经分级影响 |
| 3.5.3.电针对大鼠面肌直径影响 |
| 讨论 |
| 1.现代医学对周围性面瘫的认识 |
| 1.1.面神经解剖及生理功能 |
| 1.2.不同损害部位的临床表现 |
| 1.3.对病因病机的认识 |
| 1.4.对治疗的认识 |
| 2.祖国医学对周围性面瘫的认识 |
| 2.1.对病名的认识 |
| 2.2.对病因病机的认识 |
| 2.3.面瘫与经脉、经筋的关系 |
| 2.4.针灸治疗本病的古代研究 |
| 2.4.1.穴位选择 |
| 2.4.2.针灸方法 |
| 2.5.针灸治疗本病的现代研究 |
| 3.针灸促进面神经损伤修复的机制研究 |
| 3.1.促进神经功能结构的恢复 |
| 3.2.抑制神经元凋亡 |
| 3.3.促进相关细胞因子分泌 |
| 3.4.促进神经营养因子分泌 |
| 3.5.促进面部血液循环 |
| 3.6.调节面神经基因表达 |
| 3.7.抗病毒感染 |
| 4.电针相关参数对周围性面瘫的研究 |
| 4.1.不同波形的研究 |
| 4.2.不同频率的相关研究 |
| 4.3.电针综合参数的相关研究 |
| 5.关于本实验研究方案的确立 |
| 5.1.本实验设计的思路 |
| 5.2.动物模型的选择 |
| 5.2.1.面瘫造模方法现状 |
| 5.2.2.面神经压榨法优点 |
| 5.2.3.面神经压榨法存在的问题 |
| 5.2.4.小结 |
| 5.3.干预措施的选择 |
| 5.3.1.穴位的选择 |
| 5.3.2.针刺时间相关因素的选择 |
| 5.3.3.电针刺激量的选择 |
| 5.4.析因设计特点 |
| 5.5.检测指标的选择 |
| 5.5.1.一般状态观察 |
| 5.5.2.行为学 |
| 5.5.3.面神经分级 |
| 5.5.4.面肌纤维直径 |
| 6.关于本实验研究结果的讨论 |
| 6.1.模型自愈性与电针效应的关系 |
| 6.2.模型压榨时间与损伤程度的关系 |
| 6.3.不同电针刺激量对行为学的影响 |
| 6.4.不同电针刺激量对面神经的影响 |
| 6.5.不同电针刺激量对面肌形态学的影响 |
| 6.6.研究结果中与“中病即止”相关的探讨 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录一 附图 |
| 1.大鼠大体形态观察及造模过程 |
| 2.造模后大鼠面部表现 |
| 3.电针治疗过程 |
| 4.电针治疗后各组面神经HE染色结果 |
| 5.电针治疗后各组面肌HE染色结果 |
| 附录二 综述 面瘫模型大鼠神经功能评价方法研究概述 |
| 参考文献 |
| 附件一 在读期间公开发表的论着及取得的科研成果 |
（5）糖皮质激素通过下调P38 MAPK信号通路发挥抑制面神经核团凋亡作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一章 颅脑外伤伴面神经损伤的病例分析 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 病例信息 |
| 1.2.2 House-Brackmann等级评价系统 |
| 1.2.3 前后评估标准 |
| 1.2.4 迟发性面瘫治疗 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 迟发性面瘫发生率 |
| 1.3.2 颅脑外伤后迟发性面瘫的临床特征 |
| 1.3.3 颅脑外伤后迟发性面瘫的转归 |
| 1.4 小结 |
| 1.5 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 面神经挤压损伤模型的建立及蛋白质组学分析 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 实验材料与步骤 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 仪器 |
| 2.2.3 动物与分组 |
| 2.2.4 面神经损伤造模 |
| 2.2.5 大鼠面神经损伤评分 |
| 2.2.6 组织获取 |
| 2.2.7 总蛋白提取 |
| 2.2.8 蛋白质检 |
| 2.2.9 馏分分离 |
| 2.2.10 液质检测 |
| 2.3 数据分析方法 |
| 2.3.1 数据质控 |
| 2.3.2 蛋白定量分析 |
| 2.3.3 蛋白差异分析 |
| 2.3.4 火山图与热图 |
| 2.3.5 Gene Ontology富集 |
| 2.3.6 KEGG富集 |
| 2.3.7 蛋白互作网络 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 手术中面神经暴露 |
| 2.4.2 触须运动及鼻尖位置 |
| 2.4.3 鉴定到的蛋白数和肽链数 |
| 2.4.4 差异蛋白分析 |
| 2.4.5 GO富集结果 |
| 2.4.6 KEGG富集结果 |
| 2.4.7 差异蛋白互作网络 |
| 2.5 小结 |
| 2.6 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 糖皮质激素通过p38 MAPK通路抑制面神经核团凋亡 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 试剂的制备 |
| 3.2.4 动物与分组 |
| 3.2.5 大鼠面神经挤压模型的建立 |
| 3.2.6 大鼠侧脑室置入给药管 |
| 3.2.7 大鼠面神经功能评价 |
| 3.2.8 透射电镜检查观察面神经损伤处超微结构观察 |
| 3.2.9 玻片清洗及标本获取 |
| 3.2.10 Real Time PCR大鼠面神经核团中表达量变化 |
| 3.2.11 Western-Blot实验检测目的蛋白 |
| 3.2.12 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡 |
| 3.2.13 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 大鼠面瘫情况 |
| 3.3.2 面神经形态学 |
| 3.3.3 应用qPCR法检测核团Caspase3、Bax、Bcl-2mRNA水平的结果 |
| 3.3.4 应用Western-Blot法检测核团Caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平的结果 |
| 3.3.5 应用qPCR法检测核团p38 水平的结果 |
| 3.3.6 应用Western-Blot法检测核团p38及p-p38 蛋白表达水平的结果 |
| 3.3.7 Tunel法测面神经核团内细胞凋亡情况 |
| 3.4 小结 |
| 3.5 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 面神经损伤的临床及基础研究进展 |
| 4.1 面神经的解剖 |
| 4.2 面神经损伤后的临床表现 |
| 4.3 面瘫的评估 |
| 4.4 面神经损伤后的病理生理变化 |
| 4.5 面神经损伤的手术治疗 |
| 4.6 面神经损伤的药物治疗 |
| 4.7 面神经的神经干细胞及神经营养性治疗 |
| 4.8 其他 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（6）BMSCs与单核细胞联合移植促进面神经修复及MR活体示踪（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 BMSCs纳米铁颗粒标记及诱导 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 实验材料 |
| 第三节 实验方法 |
| 第四节 实验结果 |
| 第五节 讨论 |
| 第六节 结论 |
| 第七节 参考文献 |
| 第二部分 BMSCs与单核细胞体外共培养的实验研究 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 实验材料 |
| 第三节 实验方法 |
| 第四节 实验结果 |
| 第五节 讨论 |
| 第六节 结论 |
| 第七节 参考文献 |
| 第三部分 面神经损伤模型的建立及立体定位移植 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 实验材料 |
| 第三节 实验方法 |
| 第四节 实验结果 |
| 第五节 讨论 |
| 第六节 结论 |
| 第七节 参考文献 |
| 第四部分 BMSCs与单核细胞联合移植修复面神经及MR活体示踪 |
| 第一节 前言 |
| 第二节 实验材料 |
| 第三节 实验方法 |
| 第四节 实验结果 |
| 第五节 讨论 |
| 第六节 结论 |
| 第七节 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表文章 |
| 攻读博士期间主持科研 |
| 攻读博士期间副主编书籍 |
| 攻读博士期间获得奖励 |
| 致谢 |
（7）大鼠面神经高位损伤后面神经核区磁共振波谱成像（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 大鼠面神经高位损伤模型的建立 |
| 1.3 面神经麻痹评价 |
| 1.4 MRI及1H-MRS扫描 |
| 1.5 对照组与实验组组大鼠面神经核的苏木素-伊红 (HE) 、甲胺苯蓝 (TB) 和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记 (TUNEL) 染色 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 面神经损伤大鼠模型的行为学观察 |
| 2.2 1H-MRS检测结果 |
| 2.3 2组大鼠面神经核的HE、TB和TUNEL染色 |
| 3 讨论 |
| 3.1 面神经高位损伤后面神经元的凋亡 |
| 3.2 MR扫描仪在大鼠1H-MRS研究方面的应用 |
| 3.3 NAA峰值的变化及意义 |
| 3.4 Cho峰值的变化及意义 |
（8）面神经损伤模型中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶相关蛋白表达与损伤相关性（论文提纲范文）
| 文章亮点: |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 设计: |
| 时间及地点 |
| 材料: |
| 实验动物及分组: |
| 实验方法: |
| 动物模型建立: |
| 切片和染色 |
| 神经元胞体计数: |
| 免疫组织化学染色: |
| 结果判断与分析 |
| 主要观察指标 |
| 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 实验动物数量分析 |
| 2.2 各组大鼠造模后大体观察结果 |
| 2.3 各组大鼠面运动神经元光镜观察结果 |
| 2.4 各组大鼠面运动神经元透射电镜观察结果 |
| 2.5 各组大鼠面运动神经元死亡相关基因caspase 3、caspase 8、cyto-c的表达 |
| 2.6大鼠面神经损伤后面神经核团阳性单位值 (Pu) 右左侧比值 (R/L) 的动态观察 |
| 2.7 大鼠面神经损伤后caspase 3, caspase 8和cyto-c蛋白表达的相关性分析 |
| 3 讨论Discussion |
| 3.1 面神经损伤后其运动神经元的形态学改变 |
| 3.2 面神经损伤后caspase 3, caspase 8和cyto-c蛋白的表达变化 |
| 作者贡献: |
| 利益冲突 |
| 伦理要求: |
| 学术术语 |
| 作者声明 |
（9）面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 壳聚糖导管预防周围神经瘢痕的实验研究 |
| 实验一 壳聚糖导管预防兔面神经周瘢痕的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验二 壳聚糖导管复合透明质酸预防大鼠坐骨神经瘢痕的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验三、壳聚糖导管植入对腮腺术后面神经功能恢复的临床效果观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 第一部分 小结 |
| 第二部分 GDNF 基因慢病毒载体的构建、病毒的包装及细胞转染 |
| 实验一 GDNF 基因慢病毒载体的构建及慢病毒的包装 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验二、兔骨髓间充质干细胞的培养及诱导鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验三、携带 EGFP 和 GDNF 的慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 第二部分 小结 |
| 第三部分 脱细胞神经复合 GDNF 转染的间充质干细胞修复兔面神经缺损的实验研究 |
| 实验一 周围神经脱细胞方法的改良 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验二、脱细胞神经复合 GDNF 转染的 MSCs 修复兔面神经缺损 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 附图 |
| 实验三 同种异体神经移植修复面神经缺损的长期随访观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 典型病例介绍 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 附图 |
| 第三部分小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述一 周围神经瘢痕的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 脱细胞神经移植研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩略语词表 |
| 个人简介 |
| 博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（10）黄芩苷对帕金森病大鼠多脑区铁积聚及黑质DMT1、FP1的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 第一部分 黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠多巴胺能神经的影响 |
| 1.材料 |
| 2. 方法 |
| 第二部分 黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠多脑区铁积聚及各脏器铁含量的影响 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 第三部分 黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠黑质转铁蛋白DMT1 和FP1 表达的影响 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 结果 |
| 1.黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠黑质多巴胺能神经的影响 |
| 1.1 黄芩苷对神经行为学变化的影响 |
| 1.2 黄芩苷对纹状体、黑质TH表达的影响 |
| 1.3 黄芩苷对纹状体DA及其代谢物含量的影响 |
| 1.4 黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠尼氏小体表达的影响 |
| 1.5 黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠DCX表达的影响 |
| 2.黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠多部位铁积聚的影响 |
| 2.1 黄芩苷鱼藤酮PD大鼠不同脑区铁积聚的影响 |
| 2.2 黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠各脏器铁变化的影响 |
| 2.2.1 铁元素溶液的标准曲线 |
| 2.2.2 黄芩苷对各脏器铁含量的影响 |
| 2.3 黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠多脏器MDA含量影响 |
| 3.黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠黑质铁转运相关蛋白表达的影响 |
| 3.1 黄芩苷对中脑黑质铁含量的影响 |
| 3.2 黄芩苷对中脑黑质DMT1、FP1 表达的影响 |
| 讨论 |
| 1.黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠黑质DA能神经的保护作用 |
| 1.1 黄芩苷对鱼藤酮PD大鼠神经行为学变化的影响 |
| 1.2 黄芩苷对纹状体、黑质TH细胞脱失的影响 |
| 1.3 黄芩苷对PD大鼠海马尼氏小体及海马、黑质DCX表达的影响 |
| 1.4 黄芩苷对PD大鼠体内氧化应激水平的影响 |
| 1.5 黄芩苷对PD大鼠纹状体DA及其代谢产物含量的影响 |
| 2.鱼藤酮PD大鼠脑及全身性铁代谢变化及黄芩苷对其的影响 |
| 2.1 鱼藤酮PD大鼠多脑区铁水平及全身性铁代谢的变化 |
| 2.2 黄芩苷对PD大鼠多脑区铁积聚及多脏器铁代谢紊乱的影响 |
| 3.鱼藤酮PD大鼠黑质铁转运蛋白DMT1、FP1 的变化及黄芩苷对其的影响 |
| 3.1 鱼藤酮PD大鼠中脑黑质铁含量及DMT1、FP1 表达的变化 |
| 3.2 黄芩苷对PD大鼠中脑黑质铁含量及铁转运蛋白DMT1、FP1 表达的影响 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 1 英文缩略词 |
| 附录 2 技术路线 |
| 附录 3 实验彩图 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、面神经断裂后大鼠面神经核区神经元凋亡和星形胶质细胞变化的实验研究（论文参考文献）
- [1]富血小板血浆和溴莫尼定在面神经夹挫伤的实验研究和机制探讨[D]. 李立恒. 山东大学, 2021(11)
- [2]基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响[D]. 任非非. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]针刺促进面神经损伤修复的GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路的自噬机制研究[D]. 封秀梅. 成都中医药大学, 2020(02)
- [4]不同电针刺激量对面神经压榨伤模型大鼠的组织形态学及效应差异的研究[D]. 黄辰. 成都中医药大学, 2019(04)
- [5]糖皮质激素通过下调P38 MAPK信号通路发挥抑制面神经核团凋亡作用的机制研究[D]. 李强. 兰州大学, 2019(08)
- [6]BMSCs与单核细胞联合移植促进面神经修复及MR活体示踪[D]. 吴莉. 昆明医科大学, 2016(02)
- [7]大鼠面神经高位损伤后面神经核区磁共振波谱成像[J]. 李宗芳,张振光,龚霞蓉,田伟,戴敏方,刘流. 重庆医学, 2014(28)
- [8]面神经损伤模型中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶相关蛋白表达与损伤相关性[J]. 魏海刚,李蜀光,陈玉婷,蔡超雄,许彪. 中国组织工程研究, 2014(27)
- [9]面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究[D]. 刘华蔚. 中国人民解放军医学院, 2014(03)
- [10]黄芩苷对帕金森病大鼠多脑区铁积聚及黑质DMT1、FP1的影响[D]. 熊佩. 首都医科大学, 2013(05)