一、干扰素调节因子家族（论文文献综述）
程玲玲[1]（2021）在《Toll样受体及干扰素调节因子对IBDV感染应答研究》文中指出鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（IBD virus,IBDV）引起的一种免疫抑制性疾病,自发现以来,一直是造成家禽养殖业经济损失的重要原因之一。天然免疫应答是机体抵抗病毒侵染的第一道防线,主要通过模式识别受体（Pattern recognition receptor,PRR）对病毒病原相关分子模式（Pathogen-related molecular patterns,PAMP）进行识别,诱发一系列的信号级联反应,从而产生多种细胞因子如干扰素（Interferon,IFN）、白介素（Interleukin,IL）和肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF）等介导机体的抗病毒效应。Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）是模式识别受体之一,病原感染后TLR活化诱导IFN的产生;干扰素调节因子（Interferon regulatory factor,IRF）是调节IFN表达的一类转录因子,其首要功能是诱导IFN的产生。目前有关哺乳动物TLRs和IRFs的研究较多,而鸡TLRs和IRFs对病原体感染的表达变化未见系统报导。因此,本论文以鸡胚和雏鸡为研究对象,对TLRs及其下游信号通路中的IRFs展开研究,并在建立鸡-IBDV感染模型的基础上,从分子角度研究IBDV引起的宿主TLRs及IRFs表达量的变化,进一步加深对鸡TLRs和IRFs免疫调节网络的认识。同时探究不同剪切鸡IRF4基因在DF-1细胞中的亚细胞定位,有助于对其功能进行进一步研究。第一章IBDV感染对鸡法氏囊ch TLRs表达的影响本研究以感染IBDV的蛋鸡为研究对象,采用实时定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）技术检测鸡TLRs（chicken TLRs,ch TLRs）的表达变化。结果发现,与未感染的鸡相比,感染IBDV的鸡法氏囊中ch TLR1a、1b、2a、3、4和15的表达上调,而ch TLR2b、5、7和21的表达下调。相关分析发现ch TLR3的表达与法氏囊中IBDV VP2的表达有相关性。这些结果表明不同ch TLRs对相同的病毒感染有不同的反应应答,一些ch TLRs在早期被激活,一些在之后被激活,还有一些被抑制。这为研究鸡受到病原体攻击时ch TLRs的表达模式提供了有价值的基础资料。第二章IRFs在鸡体内的组织分布、发育变化及其对IBDV感染的应答本研究运用q RT-PCR方法研究了15日龄健康雏鸡体内IRFs的组织分布变化以及孵化的第15天（E15）到孵化出壳的第15天（D15）鸡IRFs（chicken IRFs,ch IRFs）在法氏囊中的发育变化,同时研究了雏鸡感染IBDV后对ch IRFs转录水平的影响。结果发现:（1）ch IRF1 m RNA主要分布在肠道中;ch IRF2、ch IRF6、ch IRF7、ch IRF8和ch IRF10主要分布在肝脏和肾脏;ch IRF5主要在脾脏表达,而ch IRF4在法氏囊中有较高的表达量。（2）ch IRF5、ch IRF7、ch IRF8和ch IRF10在小鸡孵化出壳前1天和孵化出壳的第1天的转录表达量较低,而在孵化出壳的第5天至实验结束时转录表达量显着升高;与孵化的第15天相比,孵化出壳第10天的ch IRF5和孵化出壳第5天的ch IRF7表达量分别是其41.0倍和15.7倍（P<0.05）;在整个实验过程中,除了孵化的第15天外,ch IRF4转录表达水平一直较高,孵化出壳第5天（表达量最高时间点）ch IRF4转录水平是孵化的第15天（表达量最低时间点）的11.9倍。（3）雏鸡感染IBDV后,ch IRF2、ch IRF7和ch IRF10 m RNA表达量呈先上升后下降的趋势,分别在1（day（s）post infection,dpi）、2 dpi和3 dpi时达到峰值;在IBDV感染鸡的整个实验阶段,ch IRF5 m RNA的表达均受到明显抑制;而在1 dpi时,ch IRF4的表达先是短暂上调,然后被抑制在极低的水平直到实验结束。这些实验结果表明ch IRFs在鸡不同组织中特异性表达。其中,ch IRF2、ch IRF4、ch IRF5、ch IRF7、ch IRF8和ch IRF10与法氏囊的发育或免疫应答密切相关,当雏鸡感染IBDV时,它们有的被激活,有的被抑制。这些发现将有助于筛选出一些与病毒密切相关的ch IRFs应用于宿主的先天免疫。第三章不同鸡品种IRF4基因全编码区克隆及亚细胞定位通过RT-PCR技术,克隆了817肉鸡、AA肉鸡、白来航蛋鸡及海兰褐蛋鸡IRF4基因全编码区序列,通过与Gen Bank上的原始氨基酸序列比对,发现了三种不同的剪切变化,分别为与原始氨基酸序列相比一致、缺失1个氨基酸（△1）和缺失36个氨基酸（△36）。为进一步探究不同剪切IRF4的功能,构建了相应的真核表达载体,通过转染DF-1细胞观察亚细胞定位情况,结果发现:p EGFP-N1-IRF4和p EGFP-N1-IRF4（△36）真核表达载体定位于细胞核,p EGFP-N1-IRF4（△1）在细胞质和细胞核均有分布,poly（I:C）刺激后三种剪切的亚细胞定位均无变化。这些结果为进一步探究IRF4的功能奠定了基础。
杨雪[2]（2021）在《干扰素通路及干扰调节因子在急性早幼粒细胞白血病中的功能及治疗探索》文中进行了进一步梳理研究背景:急性早幼粒细胞白血病（APL）在临床和生物学上是急性髓系白血病（AML）中的一种特殊类型。98%的APL患者存在15号和17号染色体易位形成的PML-RARα（PR）融合基因,以早幼粒细胞阶段分化阻滞和髓系干/祖细胞自我更新的表型为特征。全反式维甲酸（ATRA）和亚砷酸（ATO）的联合应用使绝大多数APL患者治愈,但仍有少数患者对联合治疗耐药或出现缓解后的复发。除了 PML-RARα中PML和RARα的点突变作为常见原发及获得性耐药的原因以外,患者携带PML-RARα以外的不典型RARα融合基因也可能出现对ATRA和ATO的标准治疗方案不敏感。融合基因TBLR1-RARα（TR）是我们实验室在2014年发现的新型APL融合基因（Blood,2014）。在前期工作中,我们发现较之于野生型RARα,TR可以募集更多转录抑制复合物,从而对RARα靶基因产生抑制作用。在ATRA的作用下,TR融合蛋白能够被ATRA降解,且呈现剂量依赖性,并诱导细胞分化。随后我们成功构建了 TBLR1-RARα可移植小鼠模型,验证了 TR融合基因在造血干/祖细胞层面的分化阻滞和自我更新表型,通过连续传代证实了TR融合基因具有独立的致白血病能力。研究目的:虽然在体外实验中观察到ATRA可以诱导TR白血病细胞分化,但在小鼠模型体内实验中2.5mg/kg的单药ATRA或联合ATO均不能延长TR小鼠的生存。与此类似,临床上携带TR融合基因的APL患者亦无法在ATRA和ATO的经典治疗方案下获得完全缓解。因此,研究TR白血病的药物表型,挖掘TR白血病独特的分子通路并寻找潜在的治疗靶点具有重要性和必要性。在本研究中,我们旨在回答以下两个关键问题:（1）TR白血病为何对ATRA和ATO的经典治疗方案“无效”?（2）靶向其他分子通路的药物联合ATRA治疗能否改善TR白血病的预后?通过和经典的PR白血病进行多层次对比,可以更全面地理解TR白血病的“耐药”表型;探索TR白血病独特的分子通路,目的在于寻找潜在的药物靶点,弥补TR白血病“耐药”情形下治疗领域的空缺。研究罕见RARα融合基因的分子通路机制,有助于改善TR-APL患者的临床预后,同时为此类携带罕见RARα融合基因的APL患者提供更多的治疗选择,推动APL成为真正意义上可被“治愈”的白血病。研究方法:我们构建了可诱导表达TR和PR两种融合蛋白的白血病细胞系模型,以更有效地挖掘TR融合基因直接调控的分子通路。可诱导表达系统的优势在于:（1）可逆性、灵活性、可重复性好;（2）高转染效率和高度特异性,几乎不激活靶点以外的基因;（3）背景异质性极低,可在早期瞬时表达目的基因并体现目的基因表达后的直接结果。我们对诱导表达24h和48h的TR和PR白血病细胞进行转录组测序（RNA-seq）和染色质免疫共沉淀测序（ChIP-seq）,基于生信分析数据探索TR白血病中可能发挥关键作用的分子通路。通过体外功能表型实验多角度验证对比TR和PR白血病的药物表型,最后利用TR小鼠模型在体内验证靶向分子通路药物对预后的影响。研究结果:转录组测序富集分析显示干扰素（IFN）通路在TR白血病中显着下调,而此现象则未见于PR白血病。同时ChIP-seq结果显示TR的表达诱导了干扰素调节因子（IRF）家族转录因子的显着富集,提示IFN通路在TR白血病中可能发挥关键作用。因此,我们使用TypeⅠ IFNs和IFNγ治疗TR和PR白血病细胞,并对比标准方案中ATRA和ATO的疗效。研究结果如下:（1）融合蛋白的降解层面:ATRA对TR和PR融合蛋白均有降解作用,但ATO只能降解PR融合蛋白,而不能降解TR融合蛋白。ATRA剂量的增加可进一步促进TR融合蛋白的降解。Type Ⅰ IFNs和IFNγ可上调PML和PR融合蛋白,但不会上调TBLR1和TR融合蛋白。IFN增加PR融合蛋白的表达提示在PR白血病中使用IFN治疗需谨慎,因为融合蛋白的增加可能加重白血病的进展。而在TR中IFN则不会引起融合蛋白表达水平的增加,提示在TR白血病中使用IFN治疗相对安全。此外,IFN在TR中还可通过上调野生型PML发挥抑癌作用。（2）白血病表型层面:TypeⅠ IFNs和IFNγ单药均不能诱导白血病细胞分化,但在TR白血病中IFN协同100nM ATRA可促进分化且达到和1μM ATRA相近的终末分化水平。ATO可促进PR白血病细胞的凋亡,但不能引起TR白血病细胞的凋亡。相反,TypeⅠ IFNs和IFNγ单药即可促进TR白血病细胞的凋亡。较高剂量的ATRA和TypeⅠ IFNs均可降低TR小鼠白血病细胞的集落形成能力和自我更新能力,但IFNγ和ATO似乎会在较早或较晚阶段增加集落的数量或大小。（3）小鼠生存体内实验:15mg/kg和25mg/kg的ATRA可以显着延长小鼠生存。ATRA联合IFNγ组较之于DMSO组无生存优势,和体外集落形成实验结果一致,推测IFNγ可能增加了 TR白血病细胞的自我更新能力。Type Ⅰ IFNs联合ATRA虽能延长TR小鼠的生存,但较之于单药ATRA并没有彰显明显优势。一方面可能和干扰素未达到发挥疗效的足够血药浓度有关;另一方面,TR白血病的发生发展可能并不完全依赖I型IFN通路的激活水平。研究结论:1)第一,ATO在TR白血病中是“无效”的。ATO不能促进TR融合蛋白的降解、细胞凋亡和自我更新的丢失。ATO的耐药可能和TR中不存在PML NB的破坏,因此ATO无法通过促进PML NB恢复的途径来激活p53和降低自我更新有关。2)第二,ATRA在TR白血病中是“不够”的。虽然低剂量ATRA就足以促进细胞分化,但提高ATRA的剂量可促进融合蛋白的降解,并减少TR白血病细胞的集落形成能力,最终带来生存获益。在TR白血病中,高剂量ATRA降低自我更新的潜能显然不依赖于PR中的PML NBs重组,其中原因需更多探索。3)第三,I型干扰素在TR白血病中是“有希望”的。一方面,IFN治疗不会上调融合蛋白表达因而加重白血病的进展。另一方面,IFN治疗诱导了细胞的凋亡、协同ATRA促进分化并表现了自我更新降低的潜能,体现了抗白血病的疗效。这可能和IFN上调了抑癌基因PML的表达有关。研究背景:干扰素调节因子（IRFs）是一类参与调控天然免疫和适应性免疫反应的转录因子。IRFs转录因子家族包括IRF1～IRF9共9个成员,其N端为具有高度同源性的DNA识别结构域（DBD）,主要识别并结合启动子序列中含有干扰素刺激反应元件（ISRE）的靶基因,C端包含不同类型的IRF相关结构域（IAD）,主要介导特异性IRF与其他家族成员的蛋白发生相互作用。较之于IRFs家族其他成员,IRF9由于相关研究较少曾被称作“被遗忘的干扰素调节因子”。I型IFN通路中IRF9主要通过和STAT1和STAT2构成ISGF3复合体进而激活下游的干扰素刺激基因（ISGs）发挥作用。IRFs依赖的通路异常（激活或抑制）与肿瘤和炎症相关,提示IRFs这类蛋白可作为潜在的治疗靶点。其中一些IRFs参与调控白细胞的发育,因此和白血病的发生发展也密切关联。此外,在携带RARa融合基因的急性早幼粒细胞白血病（APL）中,干扰素（IFN）通路和维甲酸（RA）通路存在多种交互对话。部分IRFs的启动子调控区同时有干扰素反应元件和维甲酸反应元件的存在,可同时作为IFN靶基因和RARα靶基因发挥作用。IRF9是否直接参与RA通路的转录调控目前暂无相关研究。研究目的:研究IRF9在APL中的作用及其与RARα的调控关系,探索APL中潜在的治疗靶点。研究方法:构建可诱导表达IRF9的急性早幼粒细胞白血病NB4细胞系模型,在体外验证IRF9过表达后的白血病细胞表型,通过生物信息学方法预测IRF9基因启动子序列可能有RARα转录因子的结合并扩增了相应启动子片段并进行了双荧光素酶报告基因实验。研究结果:IRF9在急性早幼粒细胞白血病中下调。基于我们此前构建的TBLR1-RARα和PML-RARα可诱导表达模型的转录组测序结果,我们在IFN通路中发现IRF9可同时被TR和PR两种RARα融合基因诱导下调,且这种下调可被ATRA挽救。IRF9的诱导表达可促进NB4细胞分化且与较低剂量ATRA（10nM和100nM）有协同促分化作用,并降低NB4细胞的集落形成能力。双荧光素酶报告基因实验未发现IRF9被RARα或RARα融合基因直接调控的证据,不排除存在远端调控或间接调控的可能。
莫诗[3]（2020）在《Rab5a介导RSV感染呼吸道上皮后抗病毒免疫作用及机制研究》文中指出第一部分Rab5a是RSV在呼吸道上皮细胞复制所必需的宿主蛋白目的:呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）是引起世界范围内婴幼儿急性下呼吸道感染最常见的病毒病原体之一,且目前尚无有效的疫苗预防特异性药物进行治疗。呼吸道上皮作为抵抗RSV感染的第一道防线,在抗病毒免疫中占有十分重要的作用,然而上皮中其宿主蛋白在抵抗病毒感染的作用尚不清楚。Rab家族蛋白作为囊泡运输的重要蛋白,在胞内及细胞间传递信号,参与免疫通路及炎症反应;此外,有文献报道称Rab蛋白作为重要的宿主蛋白参与病毒复制复合物的形成而影响病毒的复制,亦会影响病毒入胞后病毒生命周期的一系列过程。故此部分主要研究Rab蛋白在RSV感染呼吸道上皮细胞中的作用方法:用siRNA敲减Rab家族常见蛋白的表达（Rab1a、Rab2a、Rab4a、Rab5a、Rab6a、Rab7a、Rab8a、Rab9a、Rab11a）,再以RSV感染A549,检测合胞病变情况及检测RSV N基因拷贝数,筛选出与RSV复制密切相关的Rab蛋白。明确Rab5a是影响RSV感染的重要Rab蛋白后,收集RSV感染A549后1h、2h、6h及12h的细胞标本,WB及PCR分别检测Rab5a蛋白及基因表达水平;Rab5a siRNA预处理A549后构建RSV感染模型,在4℃环境完成病毒吸附实验,清洗未结合的病毒颗粒后在37℃环境下完成病毒入胞实验,通过免疫荧光及免疫共沉淀实验检测这两个过程中RSV的病毒颗粒数及RSV N蛋白的表达水平;空斑实验检测RSV感染后12h、24h、36h、48h的RSV病毒滴度。构建干预Rab5a活性部位的质粒,预处理A549细胞后予RSV感染,PCR检测RSV的N基因拷贝数。结果:1、RSV感染A549模型中,敲减Rab1a、Rab2a、Rab4a、Rab5a、Rab6a、Rab7a、Rab8a、Rab9a、Rab11a均会影响RSV的感染,影响合胞体的形成;2、Rab家族蛋白中Rab4a、Rab7a、Rab8a、Rab9a、Rab11a蛋白水平的降低,使RSV N基因拷贝数均明显降低（P<0.05）,但是合胞病变面积较对照组无明显差异;Rab5a的敲减不仅明显降低RSV N基因的拷贝数（P<0.001）,也明显减小RSV引起的合胞病变;3、RSV感染促进A549中Rab5a的基因及蛋白水平表达,均有统计学差异（P<0.05）,且呈时间依赖性;4、在RSV感染A549的模型中,RSV吸附及入胞的病毒颗粒数及RSV N蛋白的表达在siRab5a组与siCON组之间无统计学差异;5、RSV感染A549 12h、24h、36h、48h后,RSV的病毒载量随着感染时间的延长逐渐增多,在36h时间点达到峰值,48h水平仍处于高点,敲减Rab5a使RSV的病毒载量自12h后均显着低于未敲减组（P<0.001）;6、Rab5a活性位点活化后,RSV N基因拷贝数明显升高（P<0.01）,而使活性位点失活后,拷贝数明显降低（P<0.01）。结论:Rab5a影响RSV感染呼吸道上皮后的合胞体体积,在不影响病毒吸附和入胞的同时,促进RSV的复制,是RSV在呼吸道上皮细胞复制所必需的宿主蛋白。第二部分Rab5a介导RSV感染呼吸道上皮后的炎症反应目的:第一部分证实了Rab5a是RSV在呼吸道上皮细胞复制所必需的宿主蛋白,影响RSV的感染,但尚无研究指出Rab5a是否影响RSV引起的炎症反应,故此部分我们从体内模型及临床NPA标本中研究Rab5a在RSV引起的炎症反应中的作用。方法:RSV感染小鼠模型,收集感染后12h、24h、36h、48h、72h的肺组织标本,WB及PCR分别检测Rab5a蛋白及基因表达水平,免疫荧光检测Rab5a的表达水平及表达部位;Rab5a shRNA滴鼻敲减肺组织Rab5a蛋白水平后构建RSV感染模型,空斑实验检测RSV感染后1h、2h、6h、3d肺组织的病毒滴度,RSV感染5d后小鼠BALF计数炎性细胞总数及肺组织切片HE染色并进行炎症病理评分。收集了2016年10月至2017年3月因单纯RSV感染引起的急性下呼吸道感染在重庆医科大学附属儿童医院礼嘉呼吸科收治住院患儿的NPA标本,PCR检测NPA标本中RSV N基因拷贝数、Rab5a基因表达水平,ELISA检测NPA标本中IFN-λ蛋白水平,按王氏评分表对患儿病情严重度进行评分,将Rab5a表达水平与RSV N基因拷贝数、病情严重度评分、IFN-λ水平进行相关性分析。结果:1、RSV感染的小鼠模型中,Rab5a主要表达在肺组织的气道上皮细胞中,感染组较未感染组Rab5a基因及蛋白水平均明显升高,且在感染后36h达到峰值（P<0.01）;2、在RSV感染小鼠模型中,RSV感染1h、2h、6h的病毒滴度在shRab5a组及sh CON组之间无统计学差异,且在RSV感染6h的BALF及BALF肺组织中,shRab5a与sh CON组病毒滴度无统计学差异;3、敲减Rab5a降低了小鼠肺组织的病毒滴度及RSV N基因拷贝数（P<0.001）;4、敲减Rab5a明显减轻了小鼠BALF中的炎性细胞计数及肺组织炎症（P<0.01,P<0.001）;5、RSV感染引起ALRI患儿NPA标本的Rab5a基因表达水平表达升高（P<0.01）,且与RSV引起的病情严重程度呈显着正相关（P<0.01）;6、NPA标本中Rab5a表达水平与RSV N基因拷贝数呈显着正相关（P=0.01）;7、NPA标本中RSV感染组IFN-λ水平显着低于未感染组（P<0.001）,且随着住院时间的延长而逐渐降低;8、RSV感染引起ALRI住院患儿NPA中Rab5a水平与IFN-λ水平呈显着负相关（P<0.05）。结论:RSV促进呼吸道上皮细胞Rab5a的表达,且Rab5a促进RSV的复制,增强了RSV引起的肺部炎症反应。第三部分Rab5a通过抑制IRF1依赖的IFN-λ产生介导抗病毒免疫应答目的:Rab5a在病毒感染中占有重要作用,它不仅参与病毒的内吞及微泡形成,也与固有免疫应答密切相关,而干扰素是清除病毒的重要因子,包括Ⅰ型IFN及Ⅲ型IFN。文献报道Rab5a参与的早期内体,与IFITM家族的IFN诱导的膜蛋白密切相关,且早期内体与Ⅰ型干扰素受体相关,提示Rab5a与IFN存在密切关系。此外,研究指出IRF1作为呼吸道上皮细胞中对抗病毒感染的重要转录因子,是IFN表达中重要的调节因子,故此部分研究Rab5a是否通过影响IRF1从而调节IFN的表达水平介导抗病毒免疫应答。方法:用Rab5a敲减siRNA（siRab5a）及其对照（siCON）预处理A549细胞24h后,以MOI为1感染RSV后,收集细胞上清用ELISA检测IFN-α、IFN-β、IFN-λ水平,收集细胞PCR检测相应的基因水平;免疫荧光及WB检测A549细胞核内IRF1表达水平;构建IRF1敲减siRNA（si IRF1）预处理A549后,收集培养上清用ELISA检测IFN-λ水平。用特异性敲减Rab5a的慢病毒（shRab5a）及其对照（sh CON）滴鼻敲减小鼠肺组织Rab5a后,以1x10^7 PFU的RSV感染小鼠12及24小时后,收集小鼠肺组织,取肺匀浆上清ELISA法检测肺组织的干扰素水平。WB检测小鼠肺组织IRF-1蛋白水平,免疫荧光检测小鼠肺上皮IRF-1的入核表达水平。用特异性敲减Rab5a及IRF1的慢病毒（shRab5a）滴鼻敲减小鼠肺组织Rab5a及IRF1后,WB检测小鼠肺组织IRF1水平,ELISA检测小鼠肺匀浆上清IFN-λ水平。结果:1、RSV感染A549后,IFN-α、IFN-β及IFN-λ蛋白及基因水平均明显升高（P<0.001）;敲减Rab5a后,IFN-α及IFN-β蛋白水平、基因水平轻微升高,而IFN-λ蛋白及基因水平明显升高（P<0.01）;2、RSV感染小鼠12h、24h后,肺组织匀浆结果发现IFN-λ水平明显降低（P<0.001）,敲减Rab5a后,IFN-λ水平较sh CON组明显升高（P<0.001）;3、RSV感染A549模型中,IRF1入核表达量增多（P<0.001）,敲减Rab5a后进一步促进IRF1的入核;4、RSV感染A549模型中,IRF1敲减组IFN-λ水平较其对照组明显降低（P<0.01）,而同时敲减Rab5a及IRF1后的IFN-λ水平较单独IRF1敲减组升高且有统计学差异（P<0.01）;5、RSV感染后,小鼠肺组织IRF1表达增多,敲减Rab5a后IRF1水平明显升高（P<0.05）,且主要表达在肺组织上皮细胞中,入核表达量增多（P<0.01）,Rab5a敲减更能促进IRF1入核（P<0.01）;6、RSV感染模型中,小鼠肺匀浆中IFN-λ水平较未感染组明显下降;敲减Rab5a使IFN-λ水平明显升高（P<0.001）,在敲减Rab5a的同时敲减IRF1表达,IFN-λ水平较单纯Rab5a敲减组明显降低（P<0.01）。结论:RSV感染的呼吸道上皮细胞中,Rab5a表达增多,Rab5a通过调控IRF1下调IFN-λ水平抑制上皮细胞的抗病毒免疫应答。
张乔[4]（2020）在《转录调节因子PCF11和SNW1调节抗流感病毒天然免疫反应的分子机制研究》文中认为季节性流感肆虐和全球性流感大爆发严重威胁人类公共健康,给个人和政府机构造成了巨大的经济负担。目前流感临床治疗面临用药种类少且耐药突变株大量出现的挑战,因此急需开发新的有效药物充实流感治疗“武器库”。近年来,参与抗病毒天然免疫调控的宿主因子被广泛报道,由于宿主因子不易突变,具有更高的抗耐药性门槛,因此这些宿主因子的鉴定为临床药物开发提供了潜在的药物靶点。抗病毒天然免疫反应在病原体清除以及促进适应性免疫应答等方面发挥着重要作用,它的失调可能会导致机体组织损伤或病毒在体内的大量扩散。基于全基因组基因干扰组学,我们发现两个关键的转录调节因子PCF11和SNW1,它们在甲型流感病毒（IAVs）诱导的抗病毒天然免疫反应中发挥着重要调控作用。研究表明IAV感染导致了大量宿主基因转录本3’末端剪切出现异常,无法转录成成熟的mRNA从而减弱了机体的抗病毒反应。转录调节因子PCF11在某些基因mRNA的polyA加尾和3’末端剪切过程中发挥着关键的调节作用。本研究发现IAV感染导致了 PCF11表达量显着下降,自噬抑制剂bafilomycin A1完全抑制了病毒诱导的PCF11降解,表明病毒诱导的自噬促进了 PCF11降解。RNA-seq分析和体外实验结果表明敲低PCF11抑制了病毒诱导的抗病毒天然免疫反应。外源IFN-β蛋白处理发现,PCF11敲低显着抑制了 IFN-β诱导的P-STAT1激活,同时也抑制了静态及刺激状态下STAT1的转录激活,这些数据表明PCF11通过稳定STAT1的表达来保证抗病毒免疫反应的正常激活。以上实验证据表明IAV通过诱导自噬降解PCF11,抑制了 STAT1本底以及诱导状态下的转录激活从而抑制了 JAK-STAT的活化,减弱了机体的抗病毒免疫反应,最终促进了病毒在体内的复制与扩散,实现了流感病毒的免疫逃逸。文献报道转录调节因子SNW1在mRNA剪接和转录、细胞周期、急性和慢性炎症反应等过程中发挥着重要的调节作用,但是它在抗病毒天然免疫反应中的作用仍未有相关报道。本研究中,通过敲低或过表达实验我们发现,SNW1抑制了流感病毒在细胞内复制。进一步检测发现敲低SNW1显着抑制炎症因子以及干扰素相关基因的表达。外源IFN-β处理表明SNW1通过降低IFN-β表达抑制了 JAK-STAT通路的激活。更重要的是,SNW1通过与IKK激酶复合物调节因子IKKγ相互作用促进了 IAV诱导的NF-κB活化和TBK1激酶磷酸化,提高了抗病毒效应分子IL-6、CXCL10、IFN-β和MX1的表达。以上研究数据揭示了SNW1通过诱导促炎因子和干扰素信号参与宿主抗病毒天然免疫调控,抑制了流感病毒在细胞内的扩散。综上所述,本研究鉴定了 PCF11和SNW1两个关键的抗流感病毒天然免疫调节因子并揭示了具体分子作用机制,为流感药物的开发提供了潜在的药物靶点。
五且昆·吐尔逊[5]（2020）在《干扰素调节因子家族成员在流感病毒诱导的局部和全身炎症反应中的表达模式》文中研究表明流感病毒感染可诱发急性肺损伤（ALI）与其介导的大量I型干扰素（IFN-I）产生关系密切。干扰素调节因子（IRF）是负责IFN-I产生的转录因子家族,包括IRF1-9。尽管IRF3和IRF7被普遍认为是调控IFN-I产生的主要转录因子,IRF家族所有成员都能识别/结合其靶基因启动子上富含GAAA序列元件的特征提示可能都对流感病毒感染应答。本文以流感病人鼻咽上皮细胞和流感模型小鼠肺组织作为局部应答组织、流感模型小鼠外周血白细胞及其他组织如心、肠、肝、肾、脾、胃作为全身应答组织,观察了IRF家族成员对流感病毒应答的表达谱变化,并用专职产生IFN-I的人p DC样CAL-1细胞研究了流感病毒诱导IRF家族表达谱的变化规律及可能调控机制。本研究为流感病毒诱发急性免疫损伤如ALI的诊断和防治提供了分子靶标。
韩坤[6]（2020）在《草鱼IRF8对IFNI转录调控的分子机理》文中认为IRF8（Interferon regulatory factors 8）和IRF2都是干扰素调节因子家族成员。IRF8拥有一个高度保守的N端DNA结合结构域（DBD）以及一个保守度较低的C末端的IRF关联结构域（IAD）。IRF8在细胞生长分化、肿瘤发生和先天免疫过程中扮演着十分重要的角色。IRF2包含三个结构域:N末端DBD区域、C末端IAD2区域、TRD区域。IRF2也能调节细胞的发育分化,并受干扰素的诱导表达,在先天免疫中发挥重要作用。在病毒刺激的免疫基因的转录调控中,IRF8与IRF2相互作用形成复合物,复合物通过与IRF1竞争ISRE元件上的结合位点,调控下游基因的表达。为了研究草鱼IRF8（CiIRF8）和IRF2（CiIRF2）在基因表达调控中的作用,我们用Q-PCR分析CiIRF8和CiIRF2的表达。结果显示,CiIRF8与CiIRF2在草鱼脑、眼、肠、鳃、皮肤、肝、脾、肾各组织中都有表达,Poly I:C刺激后,CiIRF8与CiIRF2在各组织中的表达量均有上调,但反应程度和诱导时间不同。其中CiIRF8在脑、眼、肠、皮肤、肝、脾、肾七大组织中6 h表达量达到峰值,鳃组织在12 h达到峰值,脾组织的表达量最高。CiIRF2在各组织中均6 h表达量达到峰值,肝组织的表达量最高。这也证实了 CiIRF8与C7IRF2可能对病毒具有应答并且在各组织中的效果不同。细胞定量结果显示,经Poly I:C刺激后,在草鱼CIK细胞中CiIRF2和CiIRF8的表达量均显着上升。为了研究CiIRF8在草鱼抗病毒免疫中的作用,我们在CIK细胞中过表达Ci1RF8后,Q-PCR和Western blot分别分析CiIFN在核酸水平和蛋白水平上的表达。结果显示,在CiIRF8过表达的CIK细胞中,CiIFN在核酸水平和蛋白水平上的表达都降低。相反,如果敲降CiIRF8则CiIFN的表达量都上升。因此,我们得出结论,CiIRF8能够负调节CiIFN的表达。然后我们对CiIRF2、CiIRF8在细胞中的位置分布进行研究,结果显示,在CIK细胞中,CiIRF2分布于细胞核中,CiIRF8均匀分布在细胞中。经Poly I:C刺激后,CiIRF2的分布无变化而CiIRF8有入核现象。为了研究CiIRF8/CiIRF2复合物的存在,我们将FLAG-tagged CiIRF2与GFP-tagged CiIRF8的重组质粒共转染进HEK-293T细胞中,免疫共沉淀检测发现CiIRF8与CiIRF2的相互作用。此外,免疫荧光共定位结果也显示CiIRF8与CiIRF2的蛋白质在细胞核中相互作用。为了进一步研究CiIRF8/CiIRF2复合物在草鱼抗病毒免疫中的作用,我们通过单独转染 pcDNA3.1-tagged CiIRF8、pcDNA3.1-tagged CiIRF2、共转染pcDNA3.1-tagged CiIRF8 与 pcDNA3.1-tagged CiIRF2 进入草鱼 CIK 细胞中,双荧光素酶实验显示,CiIRF8和CiIRF2负调控CiIFN启动子的转录活性,CiIRF8/CiIRF2复合物对CiIFN转录活性的负调控更为显着。这个结果表明CiIRF8通过与CiIRF2相互结合而增强对CiIFN转录的负调节作用。
王胜楠[7]（2020）在《IFN-α亚型在流感病毒感染中的差异性表达》文中研究表明流感病毒感染后上皮细胞和免疫细胞通过模式识别受体识别流感病毒,通过释放包括IFN-α和IFN-β在内的I型干扰素和各种细胞因子,促进固有免疫系统的抗病毒反应。但是过度释放的细胞因子可能诱导产生细胞因子风暴,造成急性肺损伤。流感病毒感染所诱发的急性肺损伤被认为与其诱导的Ⅰ型干扰素（尤其IFN-α）关系密切。IFN-α有多种亚型,人有13种,小鼠有14种。已有研究证明不同病毒感染诱导产生的IFN-α亚型不相同,目前流感病毒感染中IFN-α亚型的表达差异尚不明确。为了探索IFN-α亚型在流感病毒感染中的差异性表达,我们首先通过生物信息学分析筛选IFN-α亚型;随后使用体外流感病毒感染人和小鼠上皮细胞、单核/巨噬细胞及流感病毒感染小鼠模型,检测流感病毒感染后IFN-α亚型及相关转录因子m RNA的表达水平;最后克隆表达IFN-α21亚型重组蛋白,初步探究其生物学活性。本研究为流感病毒感染引发免疫损伤的防治提供了实验基础。
吕磊[8]（2020）在《干扰素调节因子7影响狂犬病病毒致病性的分子机制研究》文中研究指明狂犬病（Rabies）是一种被狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）感染引起的人兽共患病。RABV属于嗜神经病毒,其病理症状主要为致死性的脑炎,出现发病症状后致死率接近100%,目前缺少有效的治疗方法。目前大多数发达国家采用在宠物广泛疫苗接种的手段基本消灭了人间狂犬病,而对于医疗卫生条件落后的发展中国家而言,狂犬病仍是极大的威胁。由于加大了对狂犬病的防控,自2007年以来我国狂犬病发病人数从2007年的3302例降为2017年的516例,总数降低了84.37%。但从当前形势看要在2030年消除人间狂犬病的目标仍然十分艰巨。目前RABV的致病机制研究领域中仍存在许多未解之谜,亟待深入研究从而为狂犬病临床治疗方案的开发奠定基础,早日解除狂犬病对人和动物的威胁。干扰素调节因子7（Interferon regulatory factor 7,IRF7）是诱导Ⅰ型干扰素（interferons,ⅠFN）产生的重要参与者,凭借着调控多种细胞因子参与到天然免疫和适应性免疫中。据报道,相比WT小鼠,IRF7-/-小鼠对西尼罗病毒（West Nile Virus,WNV）更易感,但未有研究表明IRF7是否在RABV感染过程中发挥作用。因此,本课题利用IRF7-/-小鼠来探究IRF7对RABV致病性的影响。在后肢肌肉攻毒条件下的致病性实验中,IRF7-/-小鼠相比WT小鼠表现为发病时间提前和死亡率升高,说明RABV在IRF7缺失情况下致病性增强,暗示着IRF7参与RABV感染诱导的外周免疫应答激活。利用RT-q PCR检测感染部位、脊髓和脑组织中的病毒载量,发现缺失IRF7-/-小鼠各组织中病毒载量均高于WT小鼠,值得注意的是,两者在感染早期感染部位病毒量存在差异,说明分布在外周中的IRF7抑制了RABV在后肢大腿肌肉部位的复制。为了探究IRF7抑制RABV复制的机制,一方面,我们检测了引流淋巴结中各种细胞因子的表达水平,其中MCP-1、MIP-1α和MIP-1β的表达水平在缺失IRF7后受到影响。了解到MCP-1、MIP-1α、MIP-1β三者都隶属于趋化因子中的CC家族,主要负责单核细胞在机体内分布和动态平衡,推测IRF7可能通过诱导趋化因子的产生参与免疫细胞如p DC、c DC和巨噬细胞向淋巴结内招募。利用流式细胞术比较发现,在感染后的第4天和第6天,IRF7-/-小鼠引流淋巴结中这三种细胞的数量皆少于WT小鼠,这与我们的推测相符。另一方面,为了探究p DC、c DC和巨噬细胞在被RABV激活后IRF7如何直接发挥作用,我们用RABV分别直接感染这些体外诱导的细胞群,检测细胞上清中的病毒滴度以及胞内病毒基因组、IFNα和ISG的表达水平,发现IRF7参与p DC和巨噬细胞抑制病毒以及诱导IFNα和ISG的表达的过程,而在c DC中IRF7作用不明显,分析可能是因为IRF7的本底水平具有细胞特异性。在中枢感染条件下的攻毒实验中,IRF7-/-小鼠相比WT小鼠表现为发病时间提前,死亡率升高,脑各分区中的病毒载量更高,说明IRF7在中枢感染情况下也能影响RABV致病性。检测两种小鼠中枢中各种细胞因子的表达水平发现,缺失IRF7后中枢几乎丧失产生IFNα的能力,而各种炎症因子的表达水平却比WT组高,利用脑组织切片发现IRF7-/-小鼠脑内炎症和病变情况更为剧烈。外周和中枢的IRF7都参与RABV感染引起的机体抗病毒应答。在外周,IRF7一方面促进p DC、c DC和巨噬细胞的招募;另一方面参与诱导p DC、c DC和巨噬细胞中IFNα和ISG的表达。在中枢,IFNα的产生在一定程度上受IRF7调控。
陈怡[9]（2020）在《干扰素调节因子5与溃疡性结肠炎的相关性研究》文中进行了进一步梳理目的:炎症性肠病（Inflammatory bowel disease,IBD）主要疾病类型包括克罗恩病（Crohn’s disease,CD）和溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）。UC病变主要位于大肠粘膜及粘膜下层,连续、弥漫性分布,以腹痛腹泻、黏液脓血便为主要临床症状,其病因和发病机制目前尚未明确,受遗传、环境、微生物、免疫等多种因素影响,其中,免疫因素被认为是一个重要的影响因素。干扰素调节因子5（Interferon regulatory factor 5,IRF5）属于调节免疫系统活动的转录因子家族,可通过Toll样受体通路调节白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、IL-12、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）等炎症因子的表达,影响多种类型细胞的免疫炎症反应,从而参与系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合征等自身免疫性疾病的发生发展。研究表明,IL-1β、IL-10、IL-13、IL-17、TNF-α等炎症因子在UC发病中起重要作用,而IRF5表达水平的增高可增加UC患病风险,但IRF5在UC中的具体作用机制目前尚不清楚。因此,本文首先探究IRF5在UC患者与健康人肠道粘膜组织中的表达水平差异,其次通过UC动物模型探究IRF5基因全身敲除对UC表型及分子水平的影响,进而探讨IRF5是否通过调节炎症因子的表达影响UC的发生发展,以期为UC的治疗提供新的思路。方法:1.收集UC患者与正常健康人群的肠道粘膜组织标本,通过免疫组织化学染色方法比较两组人群肠道粘膜组织中IRF5基因表达水平差异。2.所购C57BL/6J小鼠为IRF5基因全身单敲杂合鼠,合笼鉴定其子代基因型,获得野生型小鼠为对照组和IRF5基因全身敲除纯合小鼠为实验组。3.利用葡聚糖硫酸钠（Dextran sulfate sodium,DSS）构建小鼠急性结肠炎模型,根据两组小鼠大便性状、体重变化、疾病活动指数（Disease activity index,DAI）、全结肠大体观及病理改变,比较两组小鼠结肠炎严重程度差异。4.获取两组小鼠结肠粘膜组织,采用实时荧光定量PCR检测两组小鼠肠道中炎症因子的表达水平,比较组间差异。结果:1.根据免疫组织化学染色评分,IRF5基因在UC患者肠道粘膜组织中的表达水平明显高于正常健康人群（4.48±3.06 vs 2.10±1.60,P<0.05）。2.实验组小鼠腹泻、便血、体重减轻等结肠炎症状比对照组小鼠更轻,第6日和第7日DAI评分更低（1.88±0.89 vs 2.79±0.64,P<0.05;1.29±0.84 vs 3.04±1.19,P<0.01）,结肠短缩更不明显（6.50±0.23 vs 5.98±0.60,P<0.05）,病理损伤更轻。3.与对照组相比,实验组小鼠肠道粘膜组织中炎症因子白介素-1受体拮抗剂（Interleukin-1 receptor antagonist,IL-1rn）、IL-10、IL-13、IL-17水平更高（P<0.05）,IL-1β、TNF水平更低（P<0.05）,而IL-2、IL-23无明显差异（P>0.05）。结论:IRF5基因在UC患者肠道粘膜组织中的表达水平高于健康人群;IRF5基因全敲纯合小鼠结肠炎症状及结肠病变比野生型小鼠更轻,表明IRF5表达水平的下调对UC具有缓解作用。与野生型小鼠相比,IRF5基因全敲纯合小鼠肠道中抗炎因子表达水平上调,而促炎因子水平下调,表明IRF5可通过调节肠道粘膜组织中炎症因子的表达水平影响UC的发生发展,有选择的控制IRF5的表达水平有望成为UC治疗的新方法。
王志轩[10]（2020）在《日本鳗鲡干扰素调节因子11（IRF11）的转录调控及功能的初步研究》文中研究表明干扰素调节因子（Interferon regulatory factors,IRFs）是一类重要的转录因子,可结合干扰素（Interferon,IFN）和干扰素诱导基因（Interferon-stimulated gene,ISG）的启动子区调控其表达,在抗病毒、抗肿瘤,细胞增殖和凋亡等过程中发挥着重要的作用。至今,在鱼类中已报道了11个IRF家族成员,即IRF1-11,其中IRF11为硬骨鱼类中所特有的。本论文以日本鳗鲡为研究对象,对其IRF11的功能特征进行了初步探讨,主要结果如下:克隆获得了日本鳗鲡IRF11基因（AjIRF11）,其cDNA全长1321 bp,编码281个氨基酸,蛋白分子量理论值为31.97 kDa。序列分析结果显示,AjIRF11属于IRF1亚家族成员,其DBD结构域包含6个保守的色氨酸残基。基因共线性分析结果显示,AjIRF11的上游基因和下游基因分别为CHS1和KIF1BP,其下游基因链与腔棘鱼和斑点雀鳝IRF11下游基因链一致,在棘鳍类中,IRF11基因均位于IL4R.1和NIP7基因之间,推测IRF11基因可能在硬骨鱼类进化过程中经历了谱系特异性的基因组重组事件。荧光定量PCR结果显示,AjIRF11主要在鳃中表达,爱德华氏菌感染后8 h,鳃中AjIRF11的转录表达量上调了3.6倍,感染72 h后,鳃和肠道中AjIRF11的转录表达量分别上调了4.04倍和1.4倍。而在poly I:C刺激的日本鳗鲡各组织/器官中,IRF11的转录表达量无显着变化。克隆获得了AjIRF11启动子区域,并通过转录因子数据库进行比对分析。结果显示,AjIRF11启动子区域有若干个SP1结合位点和NF-κB结合位点,并没有发现ISRE基序和GAS位点。构建了AjIRF11启动子报告质粒,构建了日本鳗鲡IRFs,STATs,以及RLRs和TLRs信号通路上的关键作用因子的真核表达质粒,并分别利用双荧光素酶报告系统检测了过表达转录因子、信号通路相关基因等对AjIRF11启动子荧光素酶活性的影响。结果显示过表达组与对照组无显着差异。免疫荧光分析结果显示,AjIRF11定位在细胞核中。我们对其序列进一步分析,并利用免疫荧光进行验证后发现,AjIRF11拥有两个核定位信号,其中NLS1为75KTWKANFR82和97KSIKK101为由两簇碱性氨基酸构成的bipartite NLS,在引导AjIRF11入核过程中起着关键作用,而NLS2(119KRRK122)为由单簇碱性氨基酸构成的monopartite NLS,发挥辅助入核的作用。此外,我们构建了日本鳗鲡干扰素（AjIFNs-pro）和Mx基因（AjMxs-pro）的启动子报告质粒,利用双荧光素酶报告系统检测了AjIRF11对AjIFNs-pro和AjMxs-pro的调控作用。结果显示,过表达AjIRF11能够显着激活AjIFNs-pro和AjMxs-pro启动子的活性。利用荧光定量PCR检测了AjIRF11对鱼类抗病毒相关基因的调控作用,发现过表达AjIRF11能显着诱导EPC细胞抗病毒相关基因IFNa,Mx1,PKR,Viperin,ISG15基因的上调表达。综上所述,本研究克隆获得了日本鳗鲡IRF11基因cDNA全长序列,并对日本鳗鲡IRF11的组织表达和转录机制、亚细胞定位和在免疫应答中发挥的作用做了初步研究。本论文为全面、系统地揭示IRF11在鱼类天然免疫中的功能奠定了基础。
二、干扰素调节因子家族（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干扰素调节因子家族（论文提纲范文）
（1）Toll样受体及干扰素调节因子对IBDV感染应答研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 1 Toll样受体研究进展 |
| 1.1 TLR2亚家族 |
| 1.2 TLR3 |
| 1.3 TLR4 |
| 1.4 TLR5 |
| 1.5 TLR7 |
| 1.6 TLR15和TLR21 |
| 2 干扰素调节因子的研究进展 |
| 2.1 IRF1亚家族 |
| 2.2 IRF3亚家族 |
| 2.3 IRF4亚家族 |
| 2.4 IRF5亚家族 |
| 3 鸡传染性法氏囊病病毒 |
| 3.1 IBDV基因组结构 |
| 3.2 IBDV感染与Toll样受体途径 |
| 3.3 IBDV感染与干扰素调节因子 |
| 4 研究目的与意义 |
| 第一章 IBDV感染对鸡法氏囊ch TLRs表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和病毒株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 VP2的表达变化 |
| 2.2 IBDV感染后ch TLRs在鸡法氏囊中的表达变化 |
| 2.3 VP2 m RNA与ch TLRs的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 IRFs在鸡体内的组织分布、发育变化及其对IBDV感染的应答 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和病毒株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 IRFs在鸡不同组织中的分布特征 |
| 2.2 IRFs在鸡法氏囊中的发育变化 |
| 2.3 IBDV感染对鸡IRFs的表达影响分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 不同鸡品种IRF4基因全编码区克隆及亚细胞定位 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物、细胞和载体 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.5 IRF4基因序列分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 RT-PCR扩增鸡IRF4基因 |
| 2.2 不同鸡品种IRF4基因编码区全序列分析 |
| 2.3 真核表达载体构建 |
| 2.4 亚细胞定位 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果目录 |
（2）干扰素通路及干扰调节因子在急性早幼粒细胞白血病中的功能及治疗探索（论文提纲范文）
| 第一部分 TBLR1-RARα急性早幼粒细胞白血病的耐药表型和靶向干扰素通路的治疗研究 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 一.急性早幼粒细胞白血病的分子机制和靶向治疗 |
| (一) PML-RARA融合蛋白的致白血病机制 |
| (二) ATRA和ATO治疗APL的作用机制 |
| (三) APL新融合基因TBLR1-RARα的功能表型 |
| 二.干扰素信号通路和肿瘤免疫 |
| (一) 干扰素信号通路 |
| (二) 干扰素在血液肿瘤中的应用 |
| 第二章 材料与方法 |
| 一.实验材料 |
| (一) 细胞系和实验动物 |
| (二) 药物和试剂 |
| (三) 实验所用质粒 |
| (四) 实验所用仪器 |
| 二.实验方法 |
| (一) 试剂配制 |
| (二) 细胞培养 |
| (三) RNA提取、逆转录cDNA及实时荧光定量PCR(qPCR) |
| (四) 蛋白质免疫印迹法(Western Blot) |
| (五) 可诱导表达载体的构建 |
| (六) 可诱导表达白血病细胞系的建立 |
| (七) 转录组测序(RNA-seq)及生信分析 |
| (八) 染色质免疫共沉淀(ChIP)及测序分析 |
| (九) 体外功能表型实验 |
| (十) 小鼠体内实验 |
| (十一) 统计学方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 一.可诱导表达TBLR1-RARα和PML-RARα白血病细胞系模型的建立 |
| 二.IFN通路相关分子在TBLR1-RARα白血病中下调 |
| 三.IRF motif在TBLR1-RARα白血病中显着富集 |
| 四.IFN对融合蛋白表达的影响 |
| 五.IFN促进白血病细胞凋亡并协同ATRA促进分化 |
| 六.Type Ⅰ IFNs降低TR白血病小鼠细胞的集落形成能力 |
| 七.ATRA单药及联合IFN对TR小鼠生存的影响 |
| 第四章 分析和讨论 |
| 第五章 研究结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 IRF9对急性早幼粒细胞白血病生物学功能的影响和机制研究 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 一.实验材料 |
| (一) 实验细胞系 |
| (二) 药物和试剂 |
| (三) 实验所用质粒 |
| (四) 实验所用仪器 |
| 二.实验方法 |
| (一) 构建可诱导表达IRF9的慢病毒载体和NB4细胞系 |
| (二) 体外功能表型实验 |
| (三) 人外周血单个核细胞(PBMC)的获取 |
| (四) 基因组DNA的提取 |
| (五) 双荧光素酶报告基因实验 |
| 第三章 实验结果 |
| 一.IRF9在急性早幼粒细胞白血病中下调 |
| 二.可诱导表达IRF9白血病细胞系的建立 |
| 三.IRF9表达促进NB4细胞分化并降低集落形成能力 |
| 四.IRF9与RARα的转录调控关系 |
| 第四章 分析和讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 白血病的靶向治疗:前世和令生 |
| 参考文献 |
| 急性髓细胞白血病中的黏连蛋白复合体突变的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历、在校期间发表论文及获奖情况 |
| 致谢 |
（3）Rab5a介导RSV感染呼吸道上皮后抗病毒免疫作用及机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 Rab5a是RSV在呼吸道上皮细胞复制所必需的宿主蛋白 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 Rab5a介导RSV感染呼吸道上皮后的炎症反应 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 Rab5a通过调控IRF1依赖的IFN-λ水平介导抗病毒免疫应答 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 Rab蛋白在呼吸系统感染中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文 |
（4）转录调节因子PCF11和SNW1调节抗流感病毒天然免疫反应的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言与背景 |
| 1.流感病毒概述 |
| 2.抗病毒天然免疫反应 |
| 3.细胞自噬 |
| 4.研究目的与意义 |
| 第二章 组学数据挖掘鉴定参与调控流感病毒感染的关键转录调节因子 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料与方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.本章小结 |
| 第三章 转录调节因子PCF11调控抗流感病毒天然免疫反应的分子机制研究 |
| 1.引言 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.本章小结 |
| 第四章 转录激活因子SNW1促进流感病毒诱导的抗病毒天然免疫反应的分子机制研究 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料与方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.本章小结 |
| 全文结论 |
| 讨论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 研究成果 |
| 致谢 |
（5）干扰素调节因子家族成员在流感病毒诱导的局部和全身炎症反应中的表达模式（论文提纲范文）
| 提要 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一篇 文献综述 |
| (一)流感病毒感染与其相关免疫应答 |
| 1.1 流感病毒简介 |
| 1.2 流感病毒与固有免疫 |
| 1.3 干扰素及其信号转导途径 |
| 1.4 Ⅰ型干扰素与炎症反应 |
| (二)干扰素调节因子家族成员及其免疫调节作用 |
| 2.1 IRF家族成员的结构特征 |
| 2.2 IRF家族成员的生物学功能 |
| 2.3 IRF3、IRF5和IRF7是TLR及 RLR信号传导中Ⅰ型 IFN表达的主要调控因子 |
| (三)寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)的研究进展 |
| 3.1 免疫刺激性寡脱氧核苷酸的结构特征与功能 |
| 3.2 免疫抑制性寡脱氧核苷酸的结构特征与功能 |
| 课题设计思路 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 流感病毒感染后对局部和全身IRF家族成员表达水平的影响 |
| 前言 |
| 第一节 流感病毒感染人局部组织中IRFs的表达水平变化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 患者鼻咽拭子标本采集 |
| 1.1.2 鼻咽拭子标本的病毒检测和分类 |
| 1.1.3 IAV、IBV和非呼吸道感染者临床指标采集 |
| 1.2 实验试剂与器材 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 IAV、IBV和非呼吸道感染患者鼻咽拭子标本的收集及研究流程图 |
| 1.3.2 鼻咽拭子标本的处理和病毒检测 |
| 1.3.3 Trizol法提取IAV、IBV和非呼吸道感染者鼻咽上皮细胞内总RNA并逆转录成cDNA |
| 1.3.4 RT-qPCR法检测流感病毒感染患者鼻咽拭子标本中IRF家族成员的m RNA表达水平 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 不同流感病毒感染的鼻咽上皮细胞分类 |
| 2.2 IAV、IBV和非呼吸道感染患者临床资料分析 |
| 2.3 流感病毒感染患者鼻咽上皮细胞中IRF家族成员的m RNA水平检测 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 流感病毒感染小鼠局部和全身组织中IRFs的表达水平变化及GAAA ODN对其的调节作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和细胞 |
| 1.2 流感病毒 |
| 1.3 寡脱氧核苷酸 |
| 1.4 实验试剂与器材 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.5.1 流感病毒的扩增和血凝效价的测定 |
| 1.5.2 流感病毒在MDCK细胞上半数组织细胞感染剂量(TCID50)的检测 |
| 1.5.3 流感病毒感染小鼠LD50的检测 |
| 1.5.4 流感病毒感染小鼠模型的建立 |
| 1.5.5 流感病毒感染小鼠肺及其他重要脏器组织中IRF家族m RNA水平的检测 |
| 1.5.6 流感病毒感染小鼠经GAAA ODN M1 干预处理后,小鼠肺及其他重要脏器组织中IRF家族m RNA水平的检测 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 H1N1流感病毒的扩增和血凝效价的测定 |
| 2.2 H1N1流感病毒在MDCK细胞上半数组织细胞感染剂量的测定 |
| 2.3 流感病毒感染BALB/c小鼠的LD50测定 |
| 2.4 H1N1感染小鼠肺等脏器中IRF家族的m RNA表达谱及GAAA ODN M1对IRFs表达的调控作用 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞后对IRFs,TLR3/7,RIG-Ⅰ及其下游信号分子表达的影响 |
| 前言 |
| 第一节 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞IRF-IFN-Ⅰ信号通路相关因子的表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 流感病毒 |
| 1.3 实验试剂与器材 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 流感病毒H1N1 感染不同时间对人pDC样 CAL-1 细胞IRF家族表达谱的影响 |
| 1.4.2 流感病毒H9N2 感染不同时间对人pDC样 CAL-1 细胞IRF家族表达谱的影响 |
| 1.4.3 流感病毒H1N1 感染不同时间对IRFs上游PRR受体信号通路(TLR3、TLR7、RIG-Ⅰ)和下游IFN-Ⅰ及炎症因子表达影响 |
| 1.4.4 分别用人重组干扰素(rIFN-α2b)和重组rIFN-γ处理CAL-1 细胞对IRFs及ISGs表达的影响 |
| 1.4.5 统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 流感病毒H1N1 感染对人pDC样 CAL-1 细胞IRF家族表达谱的影响 |
| 2.2 流感病毒H9N2 感染不同时间对人pDC样 CAL-1 细胞IRF家族表达谱的影响 |
| 2.3 流感病毒H1N1 感染不同时间对IRFs上游PRR受体信号通路(TLR3、TLR7、RIG-Ⅰ)和下游IFN-Ⅰ及炎症因子表达影响 |
| 2.4 分别用人重组干扰素(rIFN-α2b)和重组rIFN-γ处理CAL-1 细胞对IRFs及 ISGs表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 流感病毒对CAL-1 细胞IRF家族及其上下游信号分子表达调控的可能机制探讨 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 流感病毒 |
| 1.3 寡脱氧核苷酸 |
| 1.4 实验试剂与器材 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.5.1 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞用人重组干扰素(rIFN-α2b)处理对IRF家族表达水平的影响 |
| 1.5.2 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞用人重组干扰素(rIFN-α2b)处理对TLR3/7及其下游信号分子表达水平的影响 |
| 1.5.3 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞同时用不同浓度的氯喹处理对IRF家族表达水平的影响 |
| 1.5.4 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞同时用不同浓度的氯喹处理对TLR3/7 及其下游信号分子表达水平的影响 |
| 1.5.5 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞同时用不同浓度的GAAA ODN A1 处理对IRF家族表达水平的影响 |
| 1.5.6 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞同时用不同浓度的GAAA ODN A1 处理对TLR3/7及其下游信号分子表达水平的影响 |
| 1.5.7 统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 重组rIFN-α2b,氯喹和GAAA ODN A1对H1N1感染的CAL-1 细胞中IRF家族表达谱的影响 |
| 2.2 重组IFN-α2b,氯喹和GAAA ODN A1对H1N1感染的CAL-1 细胞中TLR3/7 及其下游信号分子表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三节 流感病毒感染CAL-1 细胞后对IRF3、IRF5和IRF7 磷酸化水平的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 流感病毒 |
| 1.3 寡脱氧核苷酸 |
| 1.4 实验试剂与器材 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.5.1 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 及用GAAA ODN A1 处理对IRF3,IRF5,IRF7 的表达和磷酸化水平的影响 |
| 1.5.2 GAAA ODN A1对H1N1感染CAL-1细胞中IRF5核转位的影响 |
| 1.5.3 统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞及用GAAA ODN A1 处理对IRF3,IRF5,IRF7 的表达和磷酸化水平的影响 |
| 2.2 GAAA ODN A1对H1N1感染CAL-1细胞中IRF5核转位的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 不同单链RNA病毒对人pDC样 CAL-1 细胞中IRFs、TLR3/7和RIG-Ⅰ及其下游信号分子表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 不同ssRNA病毒 |
| 1.3 实验试剂与器材 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 不同流感病毒感染CAL-1 细胞中TLR3、7和RIG-Ⅰ及其下游信号分子m RNA水平动态变化 |
| 1.4.2 不同ssRNA病毒对IRF家族表达谱的影响 |
| 1.4.3 统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 不同流感病毒感染CAL-1 细胞中TLR3、7和RIG-Ⅰ及其下游信号分子mRNA水平动态变化 |
| 2.2 TNF-和 IFN-m RNA表达水平有可能是决定流感病毒致病性强弱和炎症强弱的重要指标 |
| 2.3 不同ssRNA病毒对IRF家族表达谱的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
| 附录 |
（6）草鱼IRF8对IFNI转录调控的分子机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 干扰素调节因子家族研究概况 |
| 1.2 IRF1-G |
| 1.3 IRF3-G |
| 1.4 IRF4-G |
| 1.5 IRF5-G |
| 1.6 鱼类IRF8、IRF2的研究进展 |
| 1.7 研究目的及意义 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 仪器与试剂 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 主要试剂、耗材、试剂盒 |
| 2.1.3 载体、菌种、细胞系、草鱼 |
| 2.2 引物及siRNA合成序列表 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 草鱼总mRNA的提取 |
| 2.3.2 开放阅读框序列的克隆 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR |
| 2.3.4 真核表达载体的构建 |
| 2.3.5 细胞复苏、培养与转染 |
| 2.3.6 双荧光素酶报告系统 |
| 2.3.7 草鱼IRF8调控IFN |
| 2.3.8 Western blot实验 |
| 2.3.9 免疫共沉淀实验 |
| 2.3.10 亚细胞定位 |
| 2.3.11 免疫荧光分析蛋白共定位 |
| 2.4 实验相关软件及网址 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 3.1 草鱼IRF8与IRF2的表达分析 |
| 3.1.1 Poly I:C上调草鱼IRF8和IRF2在组织中的表达 |
| 3.1.2 Poly I:C上调草鱼IRF8与IRF2在细胞中的表达 |
| 3.2 草鱼IRF8负调控IFN的表达 |
| 3.2.1 过表达CiIRF8抑制IFN的表达 |
| 3.2.2 敲降CiIRF8增强IFN的表达 |
| 3.3 CiIRF8与CiIRF2的亚细胞定位分析 |
| 3.4 CiIRF8和CiIRF2的相互作用 |
| 3.4.1 免疫荧光共定位 |
| 3.4.2 CiIRF8与CiIRF2免疫共沉淀 |
| 3.5 CiIRF8协同CiIRF2抑制IFN启动子活性 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 鱼类IRF8介导的先天免疫信号通路 |
| 4.2 草鱼IRF8与IRF2组织表达分析 |
| 4.3 草鱼IRF8和IRF2协同下调IFN转录水平 |
| 4.4 草鱼IRF8与IRF2的亚细胞定位及相互作用 |
| 第五章 主要结论、创新点及研究展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 研究展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（7）IFN-α亚型在流感病毒感染中的差异性表达（论文提纲范文）
| 提要 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 流感病毒简介 |
| 1.2 流感病毒感染诱发的固有免疫应答 |
| 1.3 干扰素调节因子调节IFN-I的产生 |
| 1.4 IFN-α及其亚型的免疫调节 |
| 第二章 IFN-α亚型生物信息学分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 IFN-α亚型序列信息的获取 |
| 2.2.2 IFN-α亚型氨基酸序列及碱基序列分析 |
| 2.2.3 IFN-α亚型蛋白的空间结构分析 |
| 2.2.4 IFN-α亚型的启动子分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 IFN-α亚型氨基酸序列及碱基序列比对 |
| 2.3.2 IFN-α亚型蛋白的空间结构 |
| 2.3.3 IFN-α亚型的启动子分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 流感病毒感染细胞后IFN-α亚型及IFN-α相关转录因子的表达 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料方法 |
| 3.2.1 实验细胞 |
| 3.2.2 流感病毒和鸡胚 |
| 3.2.3 实验小鼠和流感病毒 |
| 3.2.4 实验试剂与器材 |
| 3.2.5 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 流感病毒感染上皮细胞和单核/巨噬细胞中IFN-α亚型表达 |
| 3.3.2 流感病毒感染上皮细胞和单核/巨噬细胞中干扰素调节因子的表达 |
| 3.3.3 用重组人IFN-α2b作用于细胞模拟干扰素正反馈环路对IFN-α亚型及相关转录因子表达的调控作用 |
| 3.3.4 流感病毒感染Balb/c小鼠后IFN-α亚型及IFN-α相关转录因子的表达 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 人IFN-α亚型IFNA21 的克隆、表达、纯化及生物学活性研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料方法 |
| 4.2.1 实验试剂与器材 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 H21 蛋白基因序列的分析及优化 |
| 4.3.2 H21 蛋白优化后基因与数据库中序列比对 |
| 4.3.3 H21 蛋白等电点及分子量预测 |
| 4.3.4 H21 蛋白重组质粒的构建与鉴定 |
| 4.3.5 H21 蛋白的可溶性表达及鉴定 |
| 4.3.6 H21 蛋白的纯化 |
| 4.3.7 H21 蛋白生物学活性鉴定 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）干扰素调节因子7影响狂犬病病毒致病性的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表(Abbreviations) |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 狂犬病简介 |
| 1.1.1 狂犬病流行病学 |
| 1.1.2 RABV病原学特性 |
| 1.1.3 RABV的入侵 |
| 1.1.4 RABV的复制 |
| 1.1.5 RABV与先天性免疫 |
| 1.2 干扰素调节因子 |
| 1.2.1 干扰素调节因子的生物学功能 |
| 1.2.2 IRF7的结构与功能 |
| 1.2.3 IRF7与病毒之间的相互作用 |
| 第2章 研究目的与意义 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物、细胞和病毒 |
| 3.1.2 主要药品和试剂 |
| 3.1.3 主要相关试剂配置 |
| 3.1.4 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 IRF7~(-/-)小鼠基因型鉴定 |
| 3.2.2 攻毒实验 |
| 3.2.3 RNA的提取、RT-PCR |
| 3.2.4 SYBR Green I实时定量PCR |
| 3.2.5 脑组织取材、固定 |
| 3.2.6 脑冰冻切片及免疫荧光染色 |
| 3.2.7 流式细胞术 |
| 3.2.8 原代细胞的分离与培养 |
| 3.2.9 病毒毒价滴定 |
| 3.2.10 血清中和抗体滴定 |
| 3.2.11 血清总IgG检测 |
| 3.2.12 HE染色及CD45免疫组化 |
| 3.2.13 数据分析 |
| 第4章 结果与分析 |
| 4.1 外周感染时IRF7对RABV致病性的影响 |
| 4.1.1 IRF7~(-/-)小鼠基因型的鉴定 |
| 4.1.2 后肢肌肉攻毒条件下的致病性实验 |
| 4.1.3 RABV基因组在小鼠各组织中的分布情况 |
| 4.1.4 RABV在小鼠脑内的分布情况 |
| 4.1.5 IRF7对小鼠引流淋巴结内趋化因子产生的影响 |
| 4.1.6 IRF7对抗原递呈细胞招募的影响 |
| 4.1.7 IRF7对抗原递呈细胞抗病毒功能的影响 |
| 4.1.8 IRF7对小鼠引流淋巴结内IFNα和ISG产生的影响 |
| 4.1.9 RABV感染时IRF7对中和抗体及IgG产生的影响 |
| 4.2 脑内感染时IRF7对RABV致病性的影响 |
| 4.2.1 脑内攻毒条件下的致病性实验 |
| 4.2.2 RABV在小鼠脑组织中的分布情况 |
| 4.2.3 IRF7 缺失对感染小鼠脑内IFNα水平的影响 |
| 4.2.4 IRF7缺失对感染小鼠脑内炎症及病变的影响 |
| 第5章 讨论 |
| 5.1 IRF7 抑制RABV在外周的复制 |
| 5.2 IRF7 参与RABV感染引起的抗原递呈细胞细胞的招募 |
| 5.3 IRF7 参与p DC和巨噬细胞发挥抗病毒作用的过程 |
| 5.4 IRF7 参与RABV引起的体液免疫 |
| 5.5 IRF7 抑制RABV在 CNS中复制 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）干扰素调节因子5与溃疡性结肠炎的相关性研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分IRF5在UC患者与正常健康人群肠道中的表达及意义 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分IRF5基因全身敲除对小鼠急性结肠炎的影响及意义 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 IRF5 在自身免疫性疾病中的作用及研究价值 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取的科研成果 |
（10）日本鳗鲡干扰素调节因子11（IRF11）的转录调控及功能的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 鱼类I型干扰素的研究概况 |
| 1.2 鱼类干扰素调节因子的研究概况 |
| 1.3 IRF1 亚家族的研究概况 |
| 1.3.1 哺乳动物IRF1和IRF2 的研究概况 |
| 1.3.2 鱼类IRF1 亚家族的研究概况 |
| 1.4 研究目的与意义 |
| 1.5 研究内容与技术路线 |
| 第2章 日本鳗鲡IRF11 基因的表达及转录调控分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 日本鳗鲡、细胞 |
| 2.1.2 实验仪器设备 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 引物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 RACE-PCR获取基因全长 |
| 2.2.2 质粒提取 |
| 2.2.3 荧光定量PCR |
| 2.2.4 IRF11 启动子报告质粒的构建 |
| 2.2.5 启动子分析实验 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 cDNA的克隆及序列分析 |
| 2.3.2 氨基酸序列分析及系统进化树 |
| 2.3.3 基因共线性分析 |
| 2.3.4 免疫刺激后AjIRF11 的基因表达变化 |
| 2.3.5 鱼类IRF11 启动子序列分析 |
| 2.3.6 AjIRF11 启动子活性分析 |
| 2.3.7 AjIRF11 转录调控分析 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 第3章 日本鳗鲡IRF11 的核定位信号的研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 细胞 |
| 3.1.2 实验仪器设备 |
| 3.1.3 实验试剂 |
| 3.1.4 引物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 质粒构建 |
| 3.2.3 核苷酸定点突变 |
| 3.2.4 HEK293T细胞转染 |
| 3.2.5 免疫细胞化学 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 IRF11 核定位信号预测 |
| 3.3.2 IRF11 的亚细胞定位 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 第4章 日本鳗鲡IRF11 抗病毒免疫分子机理研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 细胞 |
| 4.1.2 实验仪器设备 |
| 4.1.3 实验试剂 |
| 4.1.4 引物 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞培养 |
| 4.2.2 IFN和 Mx启动子报告质粒的构建 |
| 4.2.3 EPC细胞的转染和荧光素酶活性检测 |
| 4.2.4 AjIRF11 对细胞抗病毒基因的调控 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 IFN和 Mx启动子报告质粒的构建 |
| 4.3.2 Poly I:C对 IFN和 Mx启动子活性调控作用 |
| 4.3.3 AjIRF11对IFN和 Mx启动子活性调控作用 |
| 4.3.4 qPCR检测IRF11对ISGs的调控作用 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 总结与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成果情况 |
四、干扰素调节因子家族（论文参考文献）
- [1]Toll样受体及干扰素调节因子对IBDV感染应答研究[D]. 程玲玲. 河南科技学院, 2021
- [2]干扰素通路及干扰调节因子在急性早幼粒细胞白血病中的功能及治疗探索[D]. 杨雪. 北京协和医学院, 2021(02)
- [3]Rab5a介导RSV感染呼吸道上皮后抗病毒免疫作用及机制研究[D]. 莫诗. 重庆医科大学, 2020
- [4]转录调节因子PCF11和SNW1调节抗流感病毒天然免疫反应的分子机制研究[D]. 张乔. 南方医科大学, 2020
- [5]干扰素调节因子家族成员在流感病毒诱导的局部和全身炎症反应中的表达模式[D]. 五且昆·吐尔逊. 吉林大学, 2020(01)
- [6]草鱼IRF8对IFNI转录调控的分子机理[D]. 韩坤. 南昌大学, 2020(01)
- [7]IFN-α亚型在流感病毒感染中的差异性表达[D]. 王胜楠. 吉林大学, 2020(08)
- [8]干扰素调节因子7影响狂犬病病毒致病性的分子机制研究[D]. 吕磊. 华中农业大学, 2020(02)
- [9]干扰素调节因子5与溃疡性结肠炎的相关性研究[D]. 陈怡. 浙江大学, 2020(02)
- [10]日本鳗鲡干扰素调节因子11（IRF11）的转录调控及功能的初步研究[D]. 王志轩. 集美大学, 2020(08)
标签：干扰素论文; 白血病论文; 慢性粒细胞白血病论文; 癌症论文;