一、体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和胶原表达特性的研究（论文文献综述）
杜朝政,智佳佳,王越,王新军,袁银鹏,王宇泽[1]（2022）在《组织工程技术修复半月板损伤的替代策略》文中认为背景:目前的手术方法不能提供半月板再生和替换的长期解决方案,但组织工程技术可以提供替代的治疗策略。目的:就半月板损伤修复的临床策略及组织工程研究现状作一综述。方法:应用计算机检索PubMed数据库、MEDLINE数据库、Google学术数据库、CNKI中国期刊全文数据库、万方医学网数据库收录的文献,英文引文检索词为 "meniscus injury;tissue engineering;meta-analysis;allografts;meniscus repair;scaffold;polymers;hydrogels;polyurethane;intestinal submucosa;polycaprolactone;polylactic;self-assembly;bone marrow MSC;meniscus derived stem cells;synovium derived MSCs;adipose derived MSC;co-culture;growth factor;transforming growth factor-beta;basic fibroblast growth factor;Insulin growth factor",中文引文检索词为"半月板;间充质干细胞;支架;生长因子;组织工程;压缩模量;拉伸模量;水凝胶;静电纺丝",检索期限为2005-01-01/2020-10-01。结果与结论:半月板组织工程作为半月板治疗研究的热点方向,虽然在各个方面都取得了丰富的研究成果,但均缺乏大量长期的临床试验来验证结论的准确性。生物分子作为组织工程不可或缺的工具,目前仍然需要更多的人或动物实验来确定不同生物分子准确的作用信号通路、应用的最佳浓度和组合方式及生物分子的递送方式。尽管已发现很多种具有半月板表型分化潜力的干细胞,但对于各种干细胞在组织工程中的作用仍待深入研究,最具优势或最适合半月板组织工程的干细胞种类依然颇具争议。与此同时,半月板在细胞组成、细胞外基质成分及生物力学特性上与关节软骨和椎间盘等组织相似,并且关节软骨和椎间盘的修复再生策略同样备受关注,相似领域的研究进展可以相互借鉴、相互促进。
王靖淞[2]（2021）在《细胞组织工程化半月板治疗半月板损伤的基础研究》文中认为半月板是位于膝关节股骨与胫骨之间两块半月形的纤维软骨,起到了分散应力、缓冲减震、润滑和稳定膝关节的作用。半月板损伤是骨科临床中最常见的膝关节损伤之一。半月板损伤主要分为慢性退变性损伤和急性外伤性损伤。慢性退变性半月板损伤最常见于中老年人群,被认为是早期退行性膝关节骨性关节炎的典型表现之一。临床研究表明对退行性半月板撕裂行半月板切除术或非手术保守治疗的临床效果并无显着差异。然而目前对退行性半月板的组织病理学特征、半月板细胞表型的改变以及退行性半月板细胞的再生潜能尚不清楚。急性创伤性损伤多发于青年人运动损伤,其中半月板红区的垂直纵向撕裂可通过半月板缝合修复,对不可修复的白区半月板撕裂通常采取关节镜下部分半月板切除术。然而半月板切除术后的患者远期临床随访效果并不尽如人意。同种异体半月板和半月板支架移植是目前治疗半月板切除术后患者出现局部明显膝关节疼痛的方案。然而这两种治疗方案均存在一定的缺陷,例如半月板移植物挤出、移植物萎缩、较高风险的二次翻修和失败率。在另一方面,尽管近些年来众多临床研究的结果表明了保留患者本体半月板的重要性,然而实际临床操作中半月板切除术的手术率依旧高居不下。这些问题使得近些年来的基础研究重点开始倾向于基于细胞治疗的组织工程化半月板修复。实验一:退行性半月板分区细胞表型鉴定和组织学分析目的:研究退行性半月板的组织病理学改变,并鉴定对比红区和白区半月板细胞表型和体外软骨形成能力。方法:提取10个全膝关节置换术患者的半月板进行组织切片分析,并提取相同半月板红区和白区的半月板细胞以及股骨软骨细胞,对比三种细胞的体外细胞增殖能力。同时对三种细胞分别采用流式细胞术鉴定细胞表面标记物,采用PCR鉴定软骨形成相关的基因表达水平,采用软骨诱导分化对比体外软骨形成能力。结果:退行性半月板的组织切片中发现源自关节囊的“树状”胶原纤维束的血管化程度随着半月板退化的严重程度而减少。红区半月板细胞的细胞增殖速率在原代培养中显着快于白区半月板细胞和软骨细胞。白区半月板细胞的CD49b和CD49c阳性率在P0和P2中均显着高于红区半月板细胞和软骨细胞。体外软骨诱导分化的结果显示,软骨细胞形成的软骨小球合成的GAG水平最高。红区半月板细胞的I型胶原基因表达水平显着高于白区细胞和软骨细胞,这与免疫组化染色中红区半月板细胞的软骨小球I型胶原染色强度最高的结果相符。结论:细胞表面标记物CD49b和CD49c可有效区分来在退行性半月板的白区和红区半月板细胞表型（白区半月板细胞整合素标记物阳性率更高）。在退行性半月板中源自关节囊的“树状”胶原纤维束的血管化程度与半月板的病变过程密切相关。实验二:人体半月板祖细胞提取及细胞表型鉴定目的:从人体半月板的红区和白区中提取和鉴定半月板祖细胞群。方法:从5例膝关节置换术患者的半月板和软骨组织中提取半月板红区和白区细胞以及软骨细胞（混合细胞）,并采用纤连蛋白细胞黏附法从中分别提取半月板红区和白区的祖细胞以及软骨祖细胞,采用Cell-IQ?对祖细胞集落形成进行动态分析。同时对比鉴定与其相对应区域的半月板混合细胞群的细胞表面标记物、软骨形成相关基因表达水平和体外软骨分化形成潜能。结果:与混合细胞群相比半月板祖细胞和软骨祖细胞在体外呈细胞集落样生长,且细胞增殖分化速度远快于混合细胞。细胞动态成像分析结果表明,红区半月板祖细胞较白区半月板祖细胞和软骨祖细胞的细胞集落增殖速率显着加快。祖细胞的细胞表面标记物CD49b、CD49c的阳性率显着高于混合细胞群。体外软骨诱导分化的结果显示,祖细胞形成的软骨小球X型胶原基因表达水平显着低于混合细胞群,并且祖细胞软骨小球的GAG/DNA合成水平较混合细胞软骨小球显着增加,体外形成的软骨小球也更加致密完整。结论:人体半月板的红区和白区中分别包含了具有干细胞特性的祖细胞群,该祖细胞群相比较半月板混合细胞群具有更优的细胞形态、增殖和体外软骨形成能力。同时也证明红区半月板祖细胞的增殖能力较白区半月板祖细胞更强。这可能与半月板红区的自我修复能力更强有关。实验三:纤维蛋白水凝胶-高分子半月板支架的构建及生物性能研究目的:研究以纤维蛋白凝胶为细胞载体移植自体半月板细胞于聚氨酯半月板支架促进半月板损伤修复的可行性研究。方法:获取5只羊的双后膝关节内外侧半月板,并提取内侧半月板的白区半月板细胞进行体外扩增培养。外侧半月板四等分,用皮肤活检穿孔器制造3mm直径的外植体缺损模型。将扩增后的自体白区半月板细胞以纤维蛋白凝胶为载体种植于高分子聚氨酯支架中,并移植入羊半月板缺损部位（凝胶组）。同时以单纯种植细胞支架组和单纯支架组作为对照实验组,在体外培养28天后对外植体内形成的新生组织进行组织成份、基因表达水平和免疫组化染色对比分析。结果:以纤维蛋白凝胶为细胞载体的聚氨酯支架相比于单纯支架组和单纯细胞支架组具有更高的细胞密度和细胞活性。凝胶组中GAG和DNA的合成量也显着高于其余两组。I型胶原免疫组化染色的结果也证实凝胶组支架中合成更多的I型胶原蛋白。结论:该实验证实了以纤维蛋白凝胶为载体运送自体白区半月板细胞植入临床应用的半月板支架修复羊半月板缺损外植体模型的可行性,为实现一步细胞修复组织工程化半月板奠定了基础。结果表明纤维蛋白凝胶移植的半月板细胞相比于单纯种植细胞组具有更高的代谢活动水平和细胞外基质合成的能力。实验四:胶原/海藻酸钙互穿网络水凝胶细胞载体可行性研究目的:探索胶原/海藻酸钙水凝胶作为细胞载体替代物的可行性研究。方法:将胶原分别与10mg/ml、20 mg/ml、30 mg/ml浓度的海藻酸钠溶液混合制备三种互传网络水凝胶支架,并测试了水凝胶支架的理化性能。然后将兔半月板细胞接种于三种支架并体外培养,采用死活染色、细胞生长曲线、PCR来对比不同浓度的海藻酸钠支架对细胞活动的调控能力。结果:红外光谱和圆二色光谱分析结果表明,海藻酸钠与胶原两种材料并没有发生相互作用,同时保持了其各自的天然结构和生物活性。随着海藻酸钠浓度的增加,水凝胶支架的弹性模量也随之增加。然而在20 mg/ml浓度的混合水凝胶支架中,半月板细胞具有最佳的细胞形态和细胞密度,同时蛋白聚糖、SOX-9和II型胶原的基因表达水平也最高。然而三种支架之间细胞生长曲线并无显着性差异。结论:胶原/海藻酸钠互穿网络水凝胶支架兼具了胶原和海藻酸钠原有的良好性能,并且在20mg/ml海藻酸钠浓度的混合水凝胶使半月板细胞具有最佳的细胞形态和更高的基因表达水平。综合以上研究成果,本研究综合全面的对退行性半月板的病理改变、半月板的祖细胞群、细胞组织工程化半月板等方面展开了深入研究。这些研究进一步完善了目前半月板生理结构和病理改变的认知,并且为今后临床中以细胞治疗促进半月板组织再生提供了新的思路。
王晓宇[3]（2021）在《静电纺纳米纤维重构半月板分层纤维结构的研究》文中研究说明半月板常常因为创伤或者年龄退化性病变引起损伤,不及时治疗或处理不当最终会发展为关节炎,更严重时将影响患者的正常生活。常见的半月板损伤治疗方法主要包括半月板部分或全部切除,但是为了避免由于半月板切除而引发更严重的膝关节并发症,临床上考虑尽量保留半月板。使用人工支架重建半月板可以在一定程度上维持半月板的完整性,因此人工半月板支架成为了组织工程领域的研究热点。然而,半月板的修复和再生依然是临床上最具有挑战性的组织修复技术之一,因为目前还没有一种人工支架能做到从结构上对半月板仿生。半月板独特的分层结构能够提供良好的力学支撑。因此,构建一种具有模拟半月板分层结构的仿生支架对于半月板修复与再生有着重要的意义。半月板分层纤维结构为其提供了复杂的生物力学功能,起着保护膝关节的核心作用。然而,重新构建半月板分层纤维结构极其困难。组织工程和再生医学的迅速发展为受损半月板的修复与再生提供了新的途径。静电纺丝技术能将材料加工成微米甚至纳米级纤维,并且可以利用不同的接收装置对纤维结构调控,以得到多种不同层次结构的纤维支架。该方法制备纤维支架操作简单、效率高,可实现半月板分层结构的重建从而更好的促进半月板修复。我们采用具有良好力学性能的聚合物聚乳酸己内酯[poly（L-lactic acid-co-caprolactone）,P（LLA-CL）]作为主要支撑材料,再加入原组织来源的半月板脱细胞外基质（decellularized meniscal ECM,dm ECM）为支架提供半月板组织特异性组分,采用电纺技术构建仿生支架。研究结果表明,在静电纺丝过程中调节纳米纤维的接收方式可以有效地控制支架结构。制备具有无规或取向纤维结构的电纺支架,可以重新构建半月板的表面和表层。在此基础上,通过动态水流静电纺将电纺纳米纤维制备成纱线状的纤维束,可以仿生半月板内部的周向纤维束。SEM和力学拉伸测试结果显示,这些支架具有明显的纤维各向异性和较好的力学性能。FTIR、XRD以及TGA等实验结果显示了dm ECM成功掺入到了支架中,且可以稳定的存在。CCK8、活死染色以及SEM等体外研究表明支架具有良好的细胞相容性,HE染色结果显示纳米纱支架具有多孔隙的三维结构支持大量半月板细胞长入。半月板细胞在培养过程中分泌大量的细胞外基质可以在一定程度上增强支架的力学性能,尤其是纳米纱支架由于细胞长入力学性能增强最为显着。本研究中基于这样一个理念,多孔的三维支架具有细胞长入的能力,细胞因此获得了一个立体的生存空间,在生长过程中分泌的细胞外基质等相关活性物质可以沉积到整个支架内部,创建了一个有潜力促进组织修复与再生的微环境,而无规和取向支架由于致密的表面结构细胞及分泌物只能存在于支架表面。半月板细胞生长相关基因的表达、BCA蛋白含量、胶原含量以及GAG含量的测定结果都证实了上述理论,纳米纱凭借其独特的三维结构收获了更多蛋白和半月板修复相关活性物质的沉积。综上所述,本研究制备的静电纺支架表现出较好的力学性能及细胞相容性,能够促进半月板细胞生长与增殖,为半月板修复提供一个良好的微环境,本研究为静电纺支架在半月板修复和再生领域的应用提供了理论和实验依据。
游茗柯,罗俊容,付维力[4]（2020）在《生长因子在半月板修复中的应用研究进展》文中研究指明半月板损伤的修复有多种方法,除传统切除部分或全部半月板外,其自身的重建修复也在逐步发展,其中,起着生化刺激作用的生长因子与半月板再生有密切关系。本文总结生长因子在半月板再生中的作用,并对其作用机制进行分析探讨。结果显示:生长因子对半月板的作用多样,如:胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor,IGF-1）可促进细胞增殖,IGF-1、转化生长因子（transforming growth factor,TGF）可促进糖胺聚糖（glycosaminoglycan,GAG）和Ⅱ型胶原生成,血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor,FGF）可促进细胞进行有丝分裂等。生长因子在半月板损伤修复中起重要作用,可促进半月板更有效地修复与再生。
赵中溢[5]（2020）在《明胶海绵与海藻酸钠水凝胶复合体构建关节软骨组织工程化支架》文中研究表明正常人的关节软骨具有优秀的生物力学性能,不仅可以在关节间起缓冲作用,而且也在促进人体身体运动方面起着至关重要的作用。因此关节软骨的完整性至关重要。但是由于关节软骨缺乏血管和血供,因此自我修复极为困难,所以一旦关节软骨损伤,其损伤很难自我修复。同时关节软骨的损伤还常常伴有关节下骨的损伤,如若不做处理,进一步发展可进发为骨关节炎,对患者生活造成巨大影响。但是目前临床上对软骨损伤的治疗,如软骨钻磨、骨膜和软骨膜移植、软骨下骨钻孔、人工关节置换等治疗效果并不理想。近年来组织工程的迅速发展,为软骨及软骨下骨的修复提供了新途径及新方法。支架作为组织工程的核心内容之一起着至关重要的作用。传统的软骨组织工程修复关节软骨缺损,是在生物支架上种植软骨细胞,这种方法一方面细胞的种植率较低;另一方面,从修复的角度来看,软骨损伤通常伴随软骨下骨的损伤,单纯的运用软骨细胞修复软骨而忽略了软骨下骨的修复,其修复效率有限。因此本研究设想能否构建一种复合支架,在支架上层种植软骨细胞,支架下层种植成骨细胞,通过这种方式可以同时修复关节软骨及软骨下骨的损伤。复合支架的难点在于如何选择合适的材料。因此在深入认识关节软骨及关节下骨的基础上,我们选用医用明胶海绵与海藻酸钠水凝胶来构建复合支架。以往多项研究表明医用明胶海绵及海藻酸钠的生物相容性、孔径率及力学特性均可以支持其作为关节软骨组织工程的支架材料。本研究阐明了在关节软骨组织工程中构建明胶海绵-海藻酸钠水凝胶复合支架的可行性,为修复关节软骨缺损提供依据及技术支持。方法:1.构建含成骨细胞的底层支架选取适量明胶海绵,切成小块后灭菌;成骨细胞MC3T3-E1扩增后种植在明胶海绵上,体外培养诱导成骨细胞分化,监测成骨细胞在支架表面的贴附、增殖和分化状况。2.制备并培养含细胞的复合支架将含有软骨细胞的海藻酸钠溶液利用与CaCl?溶液交联在明胶海绵支架上形成海藻酸钠水凝胶;培养形成的复合支架并检测支架下层成骨细胞在支架表面的贴附、增殖和分化状况及水凝胶中软骨细胞的增殖情况。3.对含细胞的复合支架进行检测将不同时间提取的复合支架标本进行检测,明确复合支架中碱性磷酸酶及糖胺聚糖的表达情况。结果:1.MC3T3-E1在明胶海绵支架上扩增生长良好,活/死细胞染色示随时间推移活细胞在支架上数量增多。2.海藻酸钠水凝胶与明胶海绵支架接合良好,猪膝软骨细胞及MC3T3-E1分别在海藻酸钠水凝胶与明胶海绵支架上生长良好,活/死细胞染色示随时间推移两种活细胞在支架上数量增多。3.复合支架上的细胞与单纯明胶海绵及单纯海藻酸钠水凝胶上的细胞相比碱性磷酸酶及糖胺聚糖表达提升。结论:通过海藻酸钠溶液可以与CaCl?溶液交联形成水凝胶的方法成功构建了组织工程复合支架,明胶海绵-海藻酸钠水凝胶复合支架较单纯的明胶海绵支架及单纯的海藻酸支架可以更好地促进MC3T3-E1细胞及猪膝软骨细胞的增殖和分化。明胶海绵-海藻酸钠水凝胶复合支架在关节软骨组织工程中具有良好的应用前景。
付晓宁[6]（2020）在《促红细胞生成素促进半月板修复并阻止骨关节炎的形成》文中研究表明研究背景半月板损伤在骨关节炎（osteoarthritis OA）的发病过程中起着关键作用。长期临床观察结果证实:半月板撕裂后行部分切除术,不能减少OA的发生率。如果半月板损伤不能及时治疗,可诱发关节炎症,引起关节生物力学变化,导致OA形成。因此,急需发现可促进半月板再生的药物,延缓或逆转OA病程。而在动物试验中,促红细胞生成素（erythropoietin EPO）可促进骨折愈合和软骨缺损修复。研究目的本课题研究目的是研究小鼠半月板的发育过程,研究与软骨修复相关生长因子以及EPO对半月板细胞的影响,重点是关节形成、软骨形成、血管生成、炎症和基质的代谢,建立小鼠半月板器官培养体系来检测所选生长因子的作用,并揭示EPO对小鼠半月板损伤诱发的OA（MIO）的作用。研究方法1.首先通过研究小鼠半月板的发育过程,收集胚胎期和出生后一定时期内小鼠的膝关节样本,进行组织学方面的研究。2.分离出原代半月板细胞进行细胞体外培养,用来检测一些可能涉及关节形成、软骨再生和半月板修复有关的因素。3.建立了小鼠半月板器官的体外培养体系,经过体外培养和处理,提取RNA和蛋白质分别进行RT-PCR及Western Blotting,还可以进行组织切片用于组织学及免疫组织化学染色。4.建立了半月板损伤诱发的OA（MIO）的小鼠模型,在不同时期对小鼠模型进行了 PBS/EPO干预,观察EPO是否增强了半月板修复并防止了 OA的形成。研究结果1.通过研究小鼠半月板的发育过程,获得了一些半月板细胞增殖、凋亡和Col-1的分布的基本数据,提示出生前后半月板细胞的增殖与凋亡同时发生提示在这一时期有活跃的组织更替。2.通过分离半月板细胞进行细胞培养研究,结果显示EPO具有促进细胞增殖、基质蛋白生成和新生血管生成的能力。3.通过小鼠半月板的器官体外培养,结果显示,EPO上调Col-1,Col-2和VEGF-A的表达,并下调MMP-13的表达。说明EPO具有促进细胞增殖、基质蛋白生成和新生血管生成的能力,并抑制关节的炎症。4.通过对比EPO/PBS在不同时期进行干预,收集膝关节样本进行组织染色。结果显示,早期干预是最有效的,EPO可显着减轻MI0的严重程度,这可能与增强半月板再生有关。研究结论1.EPO可抑制半月板金属蛋白酶MMP-13的表达,上调Col-1,Col-2,VEGF-A的表达,抑制关节的炎症、促进半月板再生修复。2.EPO可能成为一种有效的DMOAD,可以用于半月板损伤的早期治疗,对半月板再生具有最佳效果,以防止OA进展。
聂振国[7]（2020）在《3D打印仿生型PCL支架复合凝胶构建组织工程半月板及其体外实验研究》文中认为目的本研究的目的是:1、采取简化建模,仿真设计方法,利用生物3D打印技术,构建与天然半月板外部形态及内部结构相似的仿生型聚己内酯（PCL,polycaprolactone）半月板支架,并比较其物理特性。2、制备明胶/海藻酸钠/纤维蛋白原复合凝胶（GEL,Gelatin/Alginate/Fibrinogen composite Gel）支架;构建PCL/GEL复合支架。3、评价上述三种支架的生物相容性,细胞增殖及对兔半月板纤维软骨细胞（MFCs,Meniscal Fibrochondrocytes）分泌细胞外基质能力的影响,并探讨PCL支架复合凝胶构建组织工程半月板的可行性。方法1、利用熔融沉积成型技术（FDM,Fused Deposition Modeling）,打印不同规格（丝径/孔径）的PCL支架及仿生型PCL半月板支架。在扫描电镜下观察支架微观结构,检测支架孔隙率,测试支架压缩及拉伸弹性模量。2、以明胶,海藻酸钠,纤维蛋白原为原料制备凝胶支架,并将仿生型PCL支架与凝胶复合构建PCL/GEL复合支架。3、将半月板纤维软骨细胞分别种植于PCL支架,GEL支架及仿生型PCL/GEL复合支架中,在体外培养后行阿尔玛蓝（Alamar Blue）细胞增殖实验,活/死细胞染色,糖胺多糖（GAG,Glycosaminoglycan）、DNA定量实验评价各组支架的促细胞增殖能力,生物相容性及对细胞分泌细胞外基质能力的影响。结果1、本实验打印了丝径分别为100μm、150μm、200μm,孔径为100μm、150μm、200μm、250μm、300μm的PCL支架,扫描电镜显示各组支架具有良好的三维孔隙结构,支架孔隙率与丝径大小成反比,与孔径大小成正比。我们设计的网格状纤维/环形纤维交替堆叠的PCL半月板支架在扫描电镜下呈部分非贯穿孔结构。生物力学结果显示,仿生型PCL半月板支架与同孔径的PCL支架相比,压缩弹性模量显着增大,环向拉伸和径向拉伸模量较PCL支架无显着性差异。2、细胞增殖实验结果证实,PCL/GEL复合支架组在21天的体外培养中,细胞增殖曲线整体呈上升趋势,而其他各组在14天后开始成下降趋势。活/死染色结果显示,PCL/GEL复合支架组和GEL组随着培养时间的延长,细胞在支架内活细胞数目逐渐增多,表明MFCs细胞在凝胶内、PCL支架与凝胶复合体内均可存活并生长。GAG/DNA定量实验结果显示PCL/GEL复合支架组在第7天和14天时,细胞分泌GAG的能力显着优于其他各组。结论仿生型PCL半月板支架的内部纤维结构与天然半月板相似,具有清晰的三维孔隙结构,良好的生物力学性能。PCL/GEL复合半月板支架在体外实验中能促进MFCs的增殖,具有较好的生物相容性及促细胞分泌细胞外基质的能力,为后期动物实验的开展提供了一定的理论基础。
杜国庆,桑晓文,王楠,石瑛,熊轶喆,杨光月,陈元川,詹红生[8]（2019）在《大鼠半月板纤维软骨细胞的体外培养和生物学特征鉴定》文中研究表明目的:体外分离、培养和鉴定大鼠半月板纤维软骨细胞,为研究大鼠半月板纤维软骨细胞的损伤修复提供简单、可行的细胞培养方法。方法:机械分离大鼠膝关节内外侧半月板,0.1%Ⅱ型胶原酶消化配合机械吹打,10%FBS的培养基行原代和传代培养,倒置显微镜动态观察不同时间点半月板纤维软骨细胞的形态及生长情况,鉴定采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法。CCK-8法检测大鼠纤维软骨细胞增殖。结果:在不同时间点,细胞表现出不同的生理形态,由多角形或短梭形变为梭形,最终呈现出三角形或椭圆形,并随着时间延长,细胞增殖能力逐渐增加。细胞培养48 h和72 h的OD值分别明显高于培养24 h的OD值（P<0.05）,差异具有统计学意义。细胞培养48 h和72 h的OD值相比较,72 h的OD值虽有增加,但并无统计学差异（P>0.05）。经甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色为阳性。结论:该方法培养的细胞形态稳定,增殖能力强,具有体内纤维软骨细胞的生物学基本特性,可为后续实验提供简单、可靠的原代大鼠半月板纤维软骨细胞培养方法。
杨育晖[9]（2018）在《仿生型PCL/明胶/硫酸软骨素复合取向支架的制备及其半月板组织工程的实验研究》文中研究说明目的:半月板由于自身特殊的循环系统和解剖结构,损伤后很难自行修复。目前国内外尚无理想的组织工程支架产品能够促进非血运区损伤的半月板进行修复再生。本研究拟采用人工合成材料聚己内酯（poly?-Polycaprolactone,PCL）和天然成分明胶（Gelatin,GEL）、硫酸软骨素（Chondroitin sulfate,CS）模拟半月板主要成分及纤维结构特点制备仿生型PCL/GEL/CS复合取向支架。探究该支架材料的材料属性、生物相容性、纤维软骨诱导活性,以及联合骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）应用促进半月板非血运区损伤的修复再生能力。方法:（1）支架材料的制备及表征:利用同轴静电纺丝技术和高速接收辊制备了“芯-壳”结构的仿生型复合取向支架A-PCL/GEL/CS和复合非取向支架R-PCL/GEL/CS,以PCL和明胶制备取向型A-PCL和A-PCL/GEL纤维支架作为对照组。通过扫描电镜和透射电镜观察各组支架材料的形貌特点,对比分析各组材料的润湿性、孔隙率、降解率和生物力学性能等理化属性,利用红外干涉光谱和咔唑法验证仿生型复合支架的成分构成和芯层CS的缓释行为。（2）支架材料的体外生物学性能研究:提取、分离、扩增兔BMSCs,采用含TGF-β3、CTGF、地塞米松和抗坏血酸盐的纤维软骨体系进行诱导培养,对诱导分化的细胞进行形态观察和细胞外基质成分染色。将BMSCs和各组纤维支架置于纤维软骨诱导体系共培养,在设定时间终止培养,扫描电镜观察细胞在纤维支架的粘附状态,CCK-8检测细胞的增殖情况,I、II型胶原蛋白和糖胺聚糖检测细胞外基质含量,RT-PCR检测各组细胞-支架复合体上纤维软骨相关基因的表达水平,评估各组支架促进BMSCs向纤维软骨细胞分化的生物学性能功能。（3）支架材料的体内生物相容性及修复再生研究:制备仿生型PCL/GEL/CS复合取向支架浸提液,采用小鼠和新西兰白兔作为实验动物,按照医用材料生物学评价国家标准评估仿生型支架材料的体内生物相容性。采用新西兰白兔作为实验动物,构建半月板非血运区损伤动物模型。根据移植物和处理方式不同分为细胞-支架复合体缝合组、支架缝合组、单纯缝合组和单纯损伤组。术后12周处死实验动物,对各组半月板进行大体标本观察、组织学、免疫组化和生物力学分析,探讨仿生型复合取向支架修复损伤半月板结构和功能的可行性。结果:（1）支架材料表征结果证实,仿生型纤维支架的纤维取向高度一致,单根纤维呈“芯-壳”结构;添加天然成分明胶和糖胺聚糖的复合支架较对照组具有更好的孔隙率、更高的亲水性和溶胀率等材料属性;仿生型复合取向支架具有较理想的生物力学性能,并显着优于非取向型;将亲水性佳的硫酸软骨素制成芯层能够有效缓慢持续释放,避免突释现象。（2）通过观察细胞形态观察、特异性染色和I、II型胶原蛋白免疫组化染色可证实,扩增的BMSCs能够顺利分化为半月板纤维软骨细胞。诱导分化后的细胞在复合支架上的粘附增殖情况显着优于PCL和PCL/GEL组支架;细胞在各组纤维支架能够稳定持续分泌相关细胞外基质,PCL/GEL/CS复合组的细胞外基质含量显着高于PCL和PCL/GEL组;RT-PCR结果也证实,PCL/GEL/CS复合支架材料能够显着提升纤维软骨相关基因的表达,加速BMSCs向纤维软骨细胞谱系分化。（3）仿生型PCL/GEL/CS复合取向支架不会引起实验动物的全身毒性和皮内刺激反应,具备良好的体内生物相容性。损伤半月板的大体标本、组织学和生物力学结果证实,仿生型PCL/GEL/CS复合取向支架能促进非血运区损伤半月板的修复再生,联合BMSCs应用的修复效果优于支架单独应用,具有更好的半月板组织整合修复能力。结论:仿生型PCL/GEL/CS复合取向支架具有良好的生物相容性、纤维软骨诱导活性和生物力学性能,利用BMSC联合仿生纤维支架在纤维软骨体系共培养所制备的细胞-支架复合体能够有效促进损伤半月板的修复再生。
郭维民[10]（2018）在《半月板双相支架促进半月板原位再生修复研究》文中指出实验目的:1.制备既仿生半月板微环境又仿生取向性微结构的半月板双相支架,并评价其理化性能和生物相容性;2.构建半月板纤维软骨细胞双相支架复合体,分别在体外和裸大鼠皮下评估双相支架的成软骨能力;3.在膝关节内侧半月板缺损模型中植入双相支架,评估其原位再生半月板和对膝关节软骨的保护效应;4.在绵羊膝关节内侧半月板缺损模型中植入半月板双相支架,评估其原位再生修复半月板损伤和对膝关节软骨的保护。实验方法:1.通过湿法粉碎、差速离心法制备脱细胞半月板细胞外基质,利用3D打印技术制备取向性PCL半月板支架,医学影像学技术获取绵羊半月板三维影像,并制备半月板双相支架;2.利用扫描电镜、生物力学机等评估半月板的微观形貌、拉伸和压缩模量等理化学特性;3.细胞与双相支架粘附实验、双相支架大鼠皮下植入实验和体内成血管实验进一步验证双相支架的生物相容性、免疫原性、材料降解以及成血管特性;4.构建兔半月板纤维软骨细胞双相支架复合体,在体外条件下通过死活细胞染色、特异性细胞外基质染色和免疫荧光染色等验证双相支架的成软骨特性,构建GFP大鼠标记的半月板纤维软骨细胞双相支架复合体,在裸大鼠皮下植入条件下,通过特异性细胞外基质染色和免疫荧光染色等方法验证体内条件下的异位成软骨效应;5.将半月板双相支架植入新西兰大白兔膝关节内侧半月板缺损模型中,3月、6月时取材,通过大体观察、组织学等验证半月板双相支架原位再生修复损伤半月板以及保护膝关节软骨的作用;6.进一步构建大动物模型,将半月板双相支架植入绵羊膝关节内侧半月板缺损模型中,并于植入3月时取材,通过大体观察、组织学、X线成像等验证双相支架原位再生修复损伤半月板以及保护膝关节软骨。实验结果:1.扫描电镜的观察结果显示半月板双相支架PCL支架具有很好的孔径及孔隙率,3D打印的PCL支架可以很好地仿生半月板微结构,双相支架具有很好的生物相容性及生物力学特点,大鼠皮下植入实验显示双相支架免疫原性较低;2.兔半月板纤维软骨细胞双相支架复合体体外培养结果显示,双相支架可以很好地保持半月板纤维软骨细胞活性,并且可以诱导半月板纤维软骨细胞分泌半月板细胞外基质成分;细胞双相支架复合体裸大鼠皮下异位成软骨实验证实,示踪的GFP半月板纤维软骨细胞可以在体内存活4周,并且在异位诱导成软骨分化;3.膝关节内侧半月板修复实验大体观察证实,半月板双相支架可修复再生半月板组织,且获得和半月板自体移植组类似结果,要明显优于半月板切除组结果;组织学染色的结果证实双相支架组再生的半月板组织可以表达半月板特异性的细胞外基质成分,并且与天然半月板类似,而且随着时间延长而逐渐成熟;对应关节的膝关节软骨大体观察和组织学分析显示,双相支架可以很好的保护膝关节软骨组织,和自体移植组的保护效应类似;4.绵羊膝关节内侧半月板修复实验大体观察证实,半月板双相支架可修复再生半月板组织,明显优于半月板切除组;组织学染色的结果证实双相支架组再生的半月板可以表达半月板特异性的细胞外基质;对应关节的膝关节软骨大体观察分析显示,双相支架可以很好的保护膝关节软骨组织,和自体移植组的保护效应类似;膝关节X线的成像结果显示双相支架组膝关节退化要明显小于半月板切除组,和半月板自体移植组类似。实验结论:半月板双相支架可以很好地仿生半月板的天然微环境和微结构,生物相容性较好;构建的半月板纤维软骨细胞双相支架复合体的体外和体内成软骨实验证实双相支架可促进半月板纤维软骨细胞成软骨分化;兔膝关节内侧半月板原位修复实验证实,半月板双相支架可以原位再生修复半月板,具有保护膝关节软骨的作用,防止膝骨关节炎的发生,绵羊的半月板原位修复实验进一步证实了双相支架原位再生修复作用以及膝关节软骨保护效应,该动物模型很好地模拟了正常成人的膝关节受力,为后期临床试验的进一步开展奠定了很好的理论基础。
二、体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和胶原表达特性的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和胶原表达特性的研究（论文提纲范文）
（1）组织工程技术修复半月板损伤的替代策略（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 1.2.1 纳入标准 |
| 1.2.2 排除标准 |
| 1.3 数据提取 |
| 2 结果Results |
| 2.1 半月板组织工程支架 |
| 2.1.1 天然高分子材料 |
| 2.1.2 脱细胞细胞外基质材料 |
| 2.1.3 合成聚合物材料 |
| 2.1.4 复合聚合物材料 |
| 2.1.5 无支架自组装 |
| 2.2 细胞来源 |
| 2.2.1 骨髓来源间充质干细胞 |
| 2.2.2滑膜来源间充质干细胞 |
| 2.2.3 脂肪来源间充质干细胞 |
| 2.2.4 软骨来源祖细胞 |
| 2.2.5 半月板来源干细胞 |
| 2.2.6 细胞共培养 |
| 2.3 生物分子 |
| 2.3.1 成纤维细胞生长因子 |
| 2.3.2转化生长因子β |
| 2.3.3 胰岛素样生长因子 |
| 2.4 生物机械刺激 |
| 3 结论Conclusions |
（2）细胞组织工程化半月板治疗半月板损伤的基础研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 退行性半月板分区细胞表型鉴定和组织学分析 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.2.1 实验试剂 |
| 1.2.2 实验标本 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 原代半月板细胞和软骨细胞提取 |
| 1.3.2 细胞生长动力学 |
| 1.3.3 流式细胞术 |
| 1.3.4 实时荧光定量聚合酶链式反应 |
| 1.3.5 体外诱导成软骨分化 |
| 1.3.6 组织切片染色 |
| 1.3.7 统计学分析 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 半月板组织学评分分级 |
| 1.4.2 细胞生长动力学 |
| 1.4.3 流式细胞术细胞表面标记物 |
| 1.4.4 红白区半月板细胞和软骨细胞基因表达水平 |
| 1.4.5 体外软骨形成能力分析 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 人体半月板祖/干细胞提取及细胞表型鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 提取半月板的红白区祖细胞和混合细胞 |
| 2.2.3 祖细胞集落动态分析 |
| 2.2.4 流式细胞术 |
| 2.2.5 体外诱导成软骨分化潜能分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 半月板祖细胞和混合细胞形态和生长动力学 |
| 2.3.2 Cell-IQ~?动态分析 |
| 2.3.3 细胞表面标记物 |
| 2.3.4 软骨小球基因表达水平 |
| 2.3.5 体外软骨形成潜能分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 纤维蛋白水凝胶-高分子半月板支架的构建及生物性能研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 纤维蛋白凝胶支架渗透性 |
| 3.2.2 人体软骨细胞在纤维凝胶聚氨酯支架中的存活率 |
| 3.2.3 羊半月板外植体模型 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 纤维蛋白凝胶在支架中的分布和细胞存活率 |
| 3.3.2 显微镜下半月板外植体 |
| 3.3.3 基因表达水平 |
| 3.3.4 合成细胞外基质对比分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章:胶原/海藻酸钙互穿网络水凝胶细胞载体可行性研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 兔半月板细胞提取和培养 |
| 4.2.2 胶原/海藻酸钙互穿网络水凝胶制备及力学性能表征 |
| 4.2.3 傅里叶红外光谱(FTIR) |
| 4.2.4 圆二色光谱分析 |
| 4.2.5 细胞骨架形态和死活染色 |
| 4.2.6 细胞生长曲线 |
| 4.2.7 qRT-PCR检测水凝胶对软骨相关功能基因 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 互穿网络水凝胶膜的制备与表征 |
| 4.3.2 海藻酸钠浓度对互穿网络水凝胶力学性能的影响 |
| 4.3.3 半月板细胞在ALG-COL水凝胶支架中生长情况 |
| 4.3.4 半月板细胞在ALG-COL水凝胶支架中基因表达水平 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 半月板解剖、损伤、治疗及组织工程化半月板的研究进展 |
| 半月板解剖结构和组织构成 |
| 半月板大体解剖 |
| 半月板细胞外基质 |
| 半月板细胞 |
| 半月板的损伤及修复 |
| 半月板损伤机制和分型 |
| 半月板切除术 |
| 半月板缝合术 |
| 半月板同种异体移植术 |
| 半月板支架 |
| 细胞组织工程化半月板-种子细胞 |
| 半月板纤维软骨细胞 |
| 透明软骨细胞 |
| 间充质干细胞 |
| 细胞组织工程化半月板-半月板支架 |
| 人工合成高分子支架 |
| 水凝胶支架 |
| 生物材料支架 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（3）静电纺纳米纤维重构半月板分层纤维结构的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 半月板组织 |
| 1.1.1 半月板组织的结构和组成 |
| 1.1.2 半月板损伤类型 |
| 1.2 静电纺丝技术概述 |
| 1.2.1 静电纺丝技术 |
| 1.2.2 静电纺丝的优势 |
| 1.3 细胞向三维静电纺丝支架中的长入 |
| 1.4 半月板脱细胞外基质 |
| 1.5 本课题的研究意义与研究内容 |
| 1.5.1 研究意义 |
| 1.5.2 主要研究内容 |
| 1.5.3 主要创新点 |
| 第二章 P(LLA-CL)/dm ECM三种仿生支架的制备及表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料和试剂 |
| 2.2.2 实验仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 半月板脱细胞外基质的制备 |
| 2.3.2 P(LLA-CL)/dm ECM静电纺丝支架的制备 |
| 2.3.2.1 静电纺丝溶液的制备 |
| 2.3.2.2 纳米纤维支架的制备 |
| 2.4 测试与表征 |
| 2.4.1 纳米纤维支架表面形貌 |
| 2.4.2 纳米纤维直径大小及分布 |
| 2.4.3 纳米纤维酸碱度变化测试 |
| 2.4.4 纳米纤维支架红外测试 |
| 2.4.5 纳米纤维支架热失重分析 |
| 2.4.6 表面亲疏水性测试 |
| 2.4.7 纳米纤维支架力学性能测试 |
| 2.4.8 纳米纤维支架晶体结构表征 |
| 2.4.9 生物相容性测试 |
| 2.4.10 生物统计学分析 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 纳米纤维外观图与表面形貌 |
| 2.5.2 纳米纤维直径大小及分布 |
| 2.5.3 纳米纤维的酸碱度变化 |
| 2.5.4 纳米纤维支架红外和晶体结构分析 |
| 2.5.5 纳米纤维支架热失重分析 |
| 2.5.6 表面亲疏水性测试 |
| 2.5.7 纳米纤维支架力学性能测试 |
| 2.5.8 半月板纤维软骨细胞的贴壁情况与形态学观察 |
| 2.5.9 纳米纤维支架生物相容性评价 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 本章小结 |
| 第三章 P(LLA-CL)/dm ECM 支架的半月板相关生物学研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料和试剂 |
| 3.2.2 实验仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 HE(苏木精-伊红)染色 |
| 3.3.2 细胞生长对不同纳米纤维支架力学性能的影响 |
| 3.3.3 半月板相关基因的表达 |
| 3.3.4 BCA蛋白含量测定 |
| 3.3.5 胶原含量测定 |
| 3.3.6 糖胺多糖(GAG)总含量测定 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 半月板细胞在纳米纤维支架上细胞长入 |
| 3.4.2 细胞生长对不同纳米纤维支架力学性能的影响结果 |
| 3.4.3 相关基因的表达 |
| 3.4.4 BCA总蛋白含量测试 |
| 3.4.5 胶原与 GAG 含量测试 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读硕士学位期间科研及发表论文情况 |
| 致谢 |
（4）生长因子在半月板修复中的应用研究进展（论文提纲范文）
| 1 前言 |
| 2 常见生长因子及其作用 |
| 2.1 GF-1 |
| 2.2 TGF-β |
| 2.3 PDGF |
| 2.4 FGFFGF-21 |
| 2.5其他生长因子及其作用 |
| 2.5.1肝细胞生长因子（HGF) |
| 2.5.2 IL-IL-1 |
| 2.5.3软骨素酶-ABC |
| 2.5.4内皮抑素 |
| 2.5.5多种生长因子联合培养 |
| 3 总结 |
（5）明胶海绵与海藻酸钠水凝胶复合体构建关节软骨组织工程化支架（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 构建含成骨细胞的底层支架及检测 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 与 MC3T3-E1 细胞共培养明胶海绵支架活/死细胞检测 |
| 第二部分 构建明胶海绵-海藻酸钠水凝胶复合支架及检测 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 复合支架的检测 |
| 2.1 复合支架活/死细胞染色 |
| 2.2 碱性磷酸酶(ALP)检测 |
| 2.3 糖胺多糖检测 |
| 2.4 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 明胶海绵支架的活/死细胞染色 |
| 2 明胶海绵海藻酸钠水凝胶复合支架的活/死细胞染色 |
| 3 碱性磷酸酶(ALP)检测结果 |
| 4 糖胺聚糖检测结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（6）促红细胞生成素促进半月板修复并阻止骨关节炎的形成（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词 |
| 引言 |
| 实验材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 半月板的修复与再生对骨关节炎作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历、在读期间发表的论文 |
| 致谢 |
（7）3D打印仿生型PCL支架复合凝胶构建组织工程半月板及其体外实验研究（论文提纲范文）
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一、文献综述 |
| 参考文献 |
| 二、在校期间科研成绩 |
| 三、致谢 |
| 四、个人简历 |
（8）大鼠半月板纤维软骨细胞的体外培养和生物学特征鉴定（论文提纲范文）
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 大鼠半月板纤维软骨细胞的分离、提取和培养 |
| 1.2.2 大鼠半月板纤维软骨细胞甲苯胺蓝染色鉴定 |
| 1.2.3 大鼠半月板纤维软骨细胞Ⅱ型胶原和细胞核免疫荧光染色鉴定 |
| 1.2.4 大鼠半月板纤维软骨细胞的CCK-8增殖检测 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠半月板的体外分离和提取 |
| 2.2 大鼠半月板纤维软骨细胞形态学特征 |
| 2.3 大鼠半月板纤维软骨细胞的CCK-8增殖检测 |
| 2.4 大鼠半月板纤维软骨细胞的甲苯胺蓝染色鉴定 |
| 2.5 大鼠半月板纤维软骨细胞Ⅱ型胶原免疫荧光染色和细胞核染色鉴定 |
| 3 讨论 |
（9）仿生型PCL/明胶/硫酸软骨素复合取向支架的制备及其半月板组织工程的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 半月板的结构与功能 |
| 1.2.1 半月板的解剖特点 |
| 1.2.2 半月板的细胞成分 |
| 1.2.3 半月板的细胞外基质成分 |
| 1.2.4 半月板的生物力学和功能 |
| 1.3 组织工程技术在半月板修复重建中的应用 |
| 1.3.1 支架材料 |
| 1.3.2 种子细胞 |
| 1.3.3 生长因子 |
| 1.4 静电纺丝概述 |
| 1.5 本文设计思路 |
| 第2章 仿生型复合取向半月板组织工程支架的制备及理化特性研究.. |
| 前言 |
| 2.1 实验材料和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂和耗材 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 静电纺丝溶液的配制 |
| 2.2.2 静电纺丝支架的制备 |
| 2.2.3 静电纺丝纤维支架的形貌特征 |
| 2.2.4 静电纺丝纤维支架的润湿性、孔隙率、溶胀率和降解率检测. |
| 2.2.5 静电纺丝纤维支架的机械性能检测 |
| 2.2.6 静电纺丝纤维支架的红外干涉检验 |
| 2.2.7 同轴共电纺支架组硫酸软骨素的释放行为检测 |
| 2.2.8 统计学处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 静电纺丝制备纤维支架的外观 |
| 2.3.2 静电纺丝纤维支架的形貌特征 |
| 2.3.3 纤维支架材料的亲疏水性 |
| 2.3.4 纤维支架的孔隙率、溶胀率和降解率 |
| 2.3.5 纤维支架的机械性能检测 |
| 2.3.6 纤维支架的红外干涉检测 |
| 2.3.7 纤维支架芯层硫酸软骨素的缓释检测 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 仿生型复合取向半月板组织工程支架的体外生物学性能研究 |
| 前言 |
| 3.1 实验材料和仪器 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂和耗材 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 骨髓间充质干细胞的提取和传代培养 |
| 3.2.2 骨髓间充质干细胞的诱导分化 |
| 3.2.3 诱导分化的骨髓间充质干细胞爬片 |
| 3.2.4 BMSCs在纤维软骨体系下诱导分化的细胞表征观察 |
| 3.2.5 体外构建骨髓间充质干细胞-支架复合体 |
| 3.2.6 诱导分化的骨髓间充质干细胞在支架上的增殖情况检测 |
| 3.2.7 诱导分化的骨髓间充质干细胞在支架上的粘附形态观察 |
| 3.2.8 诱导分化的骨髓间充质干细胞在支架上的组织生物化学分析. |
| 3.2.9 诱导分化的骨髓间充质干细胞在支架上的相关基因表达 |
| 3.2.10 统计学处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 间充质干细胞的提取培养及形态观察 |
| 3.3.2 经纤维软骨体系诱导分化的细胞表征观察 |
| 3.3.3 经诱导分化的骨髓间充质干细胞在支架上的增殖情况检测 |
| 3.3.4 经诱导分化的骨髓间充质干细胞在支架上的粘附形态观察. |
| 3.3.5 经诱导分化的骨髓间充质干细胞在支架上的组织生物化学分析 |
| 3.3.6 经诱导分化的骨髓间充质干细胞在支架上的相关基因表达. |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 仿生型复合取向半月板组织工程支架的体内生物相容性和修复再生研究 |
| 前言 |
| 4.1 实验材料和仪器 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要试剂和耗材 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 仿生型纤维半月板支架的急性全身毒性实验 |
| 4.2.2 仿生型纤维半月板支架的皮内刺激实验 |
| 4.2.3 构建兔内侧半月板损伤动物模型及细胞-支架复合体修复损伤半月板 |
| 4.2.4 损伤半月板修复再生的大体标本和组织学评估 |
| 4.2.5 生物力学检测 |
| 4.2.6 统计学处理 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 急性全身毒性实验结果 |
| 4.3.2 皮内刺激实验结果 |
| 4.3.3 损伤半月板修复的大体观察 |
| 4.3.4 损伤半月板修复的组织学观察 |
| 4.3.5 损伤半月板修复的力学检查结果 |
| 4.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（10）半月板双相支架促进半月板原位再生修复研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 半月板双相支架的制备及理化学特性研究 |
| 目的 |
| 材料与方法 |
| 一、主要的试剂及耗材 |
| 二、主要的设备 |
| 三、实验方法 |
| 四、统计学方法 |
| 结果 |
| 一、半月板双相支架形貌学以及结构特点 |
| 二、半月板双相支架大鼠皮下免疫排斥反应 |
| 三、半月板双相支架体内血管形成 |
| 四、半月板双相支架生物相容性检测 |
| 五、半月板双相支架的生物力学检测 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 半月板纤维软骨细胞复合半月板双相支架的体外评价及裸大鼠异位成软骨特性研究 |
| 目的 |
| 材料与方法 |
| 一、主要的试剂及耗材 |
| 二、主要的设备 |
| 三、实验方法 |
| 四、统计学方法 |
| 结果 |
| 一、半月板纤维软骨细胞双相支架复合体死活细胞染色结果 |
| 二、半月板纤维软骨细胞双相支架复合体组织学特异性染色结果 |
| 三、半月板纤维软骨细胞双相支架复合体生物化学分析结果 |
| 四、半月板纤维软骨细胞双相支架复合体RT-PCR分析结果 |
| 五、GFP大鼠半月板纤维软骨细胞双相支架复合体的体外培养观察 |
| 六、GFP大鼠半月板纤维软骨细胞双相支架复合体的裸大鼠皮下异位成软骨评价 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 半月板双相支架促进新西兰大白兔膝关节内侧半月板缺损原位再生修复实验研究 |
| 目的 |
| 材料与方法 |
| 一、主要的试剂及耗材 |
| 二、主要的设备 |
| 三、实验方法 |
| 四、统计学方法 |
| 结果 |
| 一、膝关节大体观察 |
| 二、新生半月板组织学评价 |
| 三、膝关节软骨保护作用 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 半月板双相支架促进绵羊膝关节内侧半月板缺损原位再生修复实验研究 |
| 目的 |
| 材料与方法 |
| 一、主要的试剂及耗材 |
| 二、主要的设备 |
| 三、实验方法 |
| 四、统计学方法 |
| 结果 |
| 一、膝关节大体观察 |
| 二、新生半月板组织学评价 |
| 三、X线检查结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 通过募集内源性干/组细胞修复和再生半月板损伤的非细胞策略 |
| 一、前言 |
| 二、基于细胞的半月板再生和修复策略 |
| 三、非细胞的半月板修复和再生策略 |
| 四、半月板修复和再生相关的内源性干/祖细胞 |
| 五、在半月板修复和再生过程中,有利于内源性干细胞归巢的募集因子 |
| 六、半月板再生和修复的未来展望 |
| 七、总结 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 参加学术交流情况 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
四、体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和胶原表达特性的研究（论文参考文献）
- [1]组织工程技术修复半月板损伤的替代策略[J]. 杜朝政,智佳佳,王越,王新军,袁银鹏,王宇泽. 中国组织工程研究, 2022(34)
- [2]细胞组织工程化半月板治疗半月板损伤的基础研究[D]. 王靖淞. 大连医科大学, 2021(01)
- [3]静电纺纳米纤维重构半月板分层纤维结构的研究[D]. 王晓宇. 东华大学, 2021(01)
- [4]生长因子在半月板修复中的应用研究进展[J]. 游茗柯,罗俊容,付维力. 中国运动医学杂志, 2020(12)
- [5]明胶海绵与海藻酸钠水凝胶复合体构建关节软骨组织工程化支架[D]. 赵中溢. 青岛大学, 2020(01)
- [6]促红细胞生成素促进半月板修复并阻止骨关节炎的形成[D]. 付晓宁. 郑州大学, 2020(02)
- [7]3D打印仿生型PCL支架复合凝胶构建组织工程半月板及其体外实验研究[D]. 聂振国. 锦州医科大学, 2020
- [8]大鼠半月板纤维软骨细胞的体外培养和生物学特征鉴定[J]. 杜国庆,桑晓文,王楠,石瑛,熊轶喆,杨光月,陈元川,詹红生. 现代生物医学进展, 2019(15)
- [9]仿生型PCL/明胶/硫酸软骨素复合取向支架的制备及其半月板组织工程的实验研究[D]. 杨育晖. 吉林大学, 2018(12)
- [10]半月板双相支架促进半月板原位再生修复研究[D]. 郭维民. 中国人民解放军医学院, 2018(09)
标签：半月板论文; 细胞增殖论文; 内侧半月板切除术论文; 细胞分化论文; 半月板变性论文;