一、APAAP免疫酶标及DNA末端原位标记双重染色检测急性白血病细胞原位凋亡（论文文献综述）
金文东[1]（2019）在《光动力疗法治疗小鼠乳腺癌的生物效应三维空间分布的研究》文中研究表明作为一种新型无创肿瘤治疗方法,光动力疗法（photodynamictherapy,PDT）是以特定波长的光照射富集于肿瘤部位的光敏剂以达到杀伤肿瘤的目的。其对肿瘤的杀伤机制包含光与生物组织的相互作用—光在组织中的分布、组织对光的吸收、光敏剂在组织中的分布以及反应区域氧的支持;因此,与传统的放、化疗不同,PDT是一种独特的具有强烈空间分布性的效应机制。PDT作用机制的研究与肿瘤精准治疗密切相关,目前对其肿瘤治疗机制的研究主要基于其三要素及其诱导的肿瘤组织生物效应,包括对光、光敏剂和氧在生物组织中的分布以及PDT作用后引起的直接生物效应和间接生物效应的研究。虽然大量研究人员对光子、光敏剂和氧在组织中的分布以及PDT诱导的局部细胞坏死、凋亡和对微血管的作用等生物效应机制进行了研究,然而目前PDT治疗肿瘤的生物效应空间分布的研究还较为欠缺,单纯的三要素空间模型和局部效应无法完成对临床PDT精准治疗的指导和辅助作用。目的:建立PDT全肿瘤样本直接效应和间接效应图片集,分析PDT生物效应的三维空间分布,构建PDT生物效应三维模型,为临床PDT精准治疗提供更好的指导和辅助作用。方法:为了构建光动力杀伤肿瘤生物效应空间分布模型,本文运用脑神经学科中常用的三维分子重建技术,对PDT作用3天后BALB/C裸鼠EMT-6皮下移植瘤（直径约1cm）进行序列切片（5μm）及生物标记。分别进行HE染色、TUNEL和CD31免疫组化染色以对PDT治疗后的坏死、凋亡和血管进行标记,同时运用全视野成像技术对病理切片进行数字化图像提取（20X）。数字图像肿瘤分割后运用Matlab代码分别提取坏死（HE染色样本中的红色和白色区域）、凋亡（TUNEL标记样本中的棕色区域）和血管（CD31标记样本中的棕色区域）信号,高斯核密度函数结合热力图的方式可视化细胞坏死、凋亡和血管在组织中的密度分布,面积百分比对其在组织中的分布进行量化分析,最后利用Amira软件对其进行三维重建。同时以MC方法建立组织光能量密度分布模型,进行相互验证。结果:对照组相比,PDT治疗3天后肿瘤坏死主要分布于肿瘤上层和中间层;肿瘤凋亡主要分布于肿瘤底层;肿瘤上层血管坏死的同时,肿瘤中间和底层伴有血管增生。坏死面积百分比与组织深度呈指数递减关系,随着深度的递增,坏死区域从上层的整层组织几乎全部坏死（约100%）向深部肿瘤组织的两个肿瘤巢中心收缩（皮下3500μm处的25%）。细胞凋亡呈弥漫性分布于肿瘤深部,凋亡面积百分比在皮下3800 μm组织深度处高达21%。血管增生明显,呈弥漫性分布于肿瘤组织中间层和底层,血管面积百分比在皮下2900μm组织深度处高达11.1%。在三维重建模型上,PDT治疗3天后肿瘤的坏死和凋亡在深度方向上呈互补形态,从上而下看,坏死逐渐减少,而凋亡逐渐增加,坏死和凋亡共同组成的肿瘤细胞死亡呈现倒梯形,而血管增生主要发生于肿瘤细胞死亡逐渐减少的中下层。结论:PsD-007介导的PDT肿瘤组织坏死、凋亡和血管增生呈现明显的空间异质性,PDT所致直接效应（坏死）与光能量密度的空间分布趋势一致,都呈指数减少;而PDT所致间接效应（凋亡和血管增生）与光能量密度的空间分布无直接相关性。与PDT光分布模型相比,PDT生物效应模型更能反映PDT的治疗效果,对PDT临床精准治疗具有更大的参考价值。光动力效应的分析应将其组成因素包括光、光敏剂和氧与组织实际效应结合起来进行分析。本文对PDT杀伤肿瘤效应的空间分布分析模型为光动力效应的模型研究提供了新的证据,也为PDT临床精准治疗方案及其剂量学提供了理论支持。
罗详冲[2]（2017）在《PRIM2在非小细胞肺癌中的表达及临床相关研究》文中认为[目的]本研究拟通过观察PRIM2在非小细胞肺癌（non-small lung cancer,NSCLC）组织、癌旁肺组织中的表达情况,探讨PRIM2与NSCLC患者的临床病理特征的相关性,以及该基因在NSCLC中肿瘤细胞转移、侵袭方面的作用。[方法]收集云南省肿瘤医院2014年11月至2016年7月内101例初诊为NSCLC患者的手术标本,分别取材癌组织和癌旁肺组织标本,同时获得101例NSCLC患者完整的临床病历资料。手术切除的标本均由10%中性福尔马林溶液固定,后通过脱水、包埋、染色、切片后通过光镜进行细胞形态学观察,应用免疫组织化学技术（Immunohistochemical technique, IHC）,检测 NSCLC 癌组织和癌旁肺组织中PRIM2的表达情况。分析PRIM2的表达情况,初步阐明PRIM2与NSCLC患者的临床病理特征的相关性。采用SPSS 17.0软件进行统计分析,P<0.05为差异有统计学意义。[结果]1.PRIM2在NSCLC癌组织中的表达明显高于癌旁肺组织（5.5%&20.8%, P<0.0001）差异有统计学意义;2. NSCLC癌组织中PRIM2的表达与性别、发病年龄、病理分期、组织学类型、原发灶情况、淋巴结转移及无显着相关性。[结论]PRIM2在NSCLC癌组织中高表达,但PRIM2表达水平与NSCLC患者的性别、发病年龄、组织学类型、原发灶情况、淋巴结转移及病理分期无显着相关性。因此,我们推测PRIM2可能在肿瘤的发生发展中起重要作用,可能成为NSCLC分子靶向治疗的靶基因。
程淼[3]（2012）在《雄黄纳米微粒在细胞水平抑制》文中认为呼吸道合胞病毒和腺病毒是儿童呼吸道感染的常见病原,这两种病毒具有致病力强,发病率高的特点,常因院内感染引起爆发流行,目前仍缺乏对呼吸道合胞病毒和腺病毒治疗较好的药物。国内外有关于雄黄治疗病毒性疾病的临床报道,尚无雄黄抗病毒的实验研究。本实验选择非阶段性的单链负股RNA病毒-呼吸道合胞病毒（respiratoy syncytialvirus,RSV）和属于双链DNA病毒-腺病毒（Adenovirus,ADV）为研究对象,观察雄黄纳米微粒抗人3型腺病毒（Human Adenovirus-3, HAdV-3）和RSV的作用。同时由于在HAdV-3感染早期,病毒为了最大限度地增殖与传播,抑制感染细胞凋亡,以保证自己能够在细胞凋亡前产生足够数量的子代病毒以及逃避宿主的免疫监视系统。本研究在腺病毒感染早期,通过观察雄黄纳米微粒对PI3-K （phosphatidylinositol3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶）/AKT （v-akt murine thymoma viral oncogene homolog）通路的抑制作用,诱导腺病毒感染细胞凋亡,来探讨雄黄抗病毒的作用机制,揭示雄黄纳米微粒抗腺病毒分子靶点。目的1通过体外实验建立RSV和HAdV-3感染Hep-2的细胞模型,观察雄黄纳米微粒对细胞病变（Cytopathic effect, CPE）的抑制作用,并采用荧光定量RT-PCR和PCR的方法检测雄黄对RSV和HAdV-3病毒基因表达的影响,探讨雄黄纳米微粒抑制RSV和HAdV-3核酸复制的作用。2研究雄黄纳米微粒在腺病毒感染早期诱导病毒感染细胞凋亡的机制。通过激光共聚焦显微镜观察雄黄纳米微粒干预腺病毒感染早期细胞凋亡情况。采用western-blot法观察雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞的AKT、p-AKT、NF-κB p65蛋白表达的影响,同时采用RT-PCR法检测雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞凋亡蛋白Fas L、Bc1-2、bax及p53mRNA基因表达的影响,探讨雄黄纳米微粒抑制PI3-K通路诱导腺病毒感染细胞凋亡而起到抗病毒的作用。方法1雄黄纳米微粒对腺病毒及呼吸道合胞病毒复制的影响：采用CPE抑制实验,通过预防给药、治疗给药及直接灭活给药三种方式,在细胞水平上观察雄黄纳米微粒对腺病毒和呼吸道合胞病毒感染Hep-2细胞病变的抑制作用；采用荧光定量PCR和荧光定量RT-PCR的方法观察雄黄纳米微粒对腺病毒和呼吸道合胞病毒基因表达的影响,探讨雄黄纳米微粒抗DNA病毒和RNA病毒的作用。2观察雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞活性的影响：分别在腺病毒感染Hep-2细胞的24h、48h、72h和120h时,采用MTT方法观察不同浓度雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞A值的影响。3雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞凋亡的影响：采用Annexin V/PI双染法激光共聚焦显微镜观察雄黄纳米微粒大剂量组和小剂量组在腺病毒感染24h时诱导病毒感染早期细胞凋亡的情况。4雄黄纳米微粒对腺病毒感染Hep-2细胞PI3-K通路的影响：采用western-blot的方法研究雄黄纳米微粒大剂量组和小剂量组在腺病毒感染24h时Hep-2细胞中AKT、 p-AKT、NF-κB p65蛋白表达的水平,探讨雄黄纳米微粒对PI3-K通路的影响。5雄黄纳米微粒对腺病毒感染细胞凋亡调控蛋白FasL、P53、Bc1-2、Bax基因表达的影响：采用实时荧光定量RT-PCR的方法研究雄黄纳米微粒大剂量组和小剂量组,在腺病毒感染24h时细胞凋亡调控蛋白FasL、P53、Bc1-2、Bax mRNA的基因表达。结果1雄黄纳米微粒在预防、治疗及直接灭活三种给药方式下,均可减轻HAdV-3和RSV感染Hep-2细胞的CPE程度。其中,雄黄纳米微粒抗HAdV-3的半数有效浓度（IC50）分别为0.255μg/mL、0.142μg/mL、0.117μg/mL,治疗指数（TI）分别为2.55、4.57和5.55；雄黄纳米微粒抑制RSV感染Hep-2细胞病变的半数有效浓度（IC50）分别为0.20μg/mL、0.13μg/mL、0.16μ/mL,治疗指数（TI）分别为3.18、4.99和4.11。雄黄纳米微粒对HAdV-3和RSV感染Hep-2细胞CPE抑制作用均存在着量效关系。2荧光定量PCR和RT-PCR检测雄黄纳米微粒对HAdV-3和RSV感染Hep-2细胞病毒复制量,结果显示Hep-2细胞对照组无扩增曲线,CT>35,HAdV-3和RSV病原体检测均为阴性；雄黄纳米微粒（加腺病毒）组、利巴韦林（加腺病毒）组和腺病毒模型组扩增曲线的CT值分别为29.30±0.08、33.05±1.29、26.01±0.25,腺病毒病原体检测为阳性。与腺病毒组（66699932±23.85）相比,雄黄纳米微粒（加腺病毒）组的复制量（912435.44±16.57）和利巴韦林（加腺病毒）组的复制量（459124.84±12.82）均降低,具有显着性差异（P<0.05）。雄黄纳米微粒（加呼吸道合胞病毒）组、利巴韦林组（加呼吸道合胞病毒）和呼吸道合胞病毒组扩增曲线的CT值分别为25.58±0.19、27.42±5.74、17.59±0.1,呼吸道合胞病毒病原体检测为阳性。与呼吸道合胞病毒组（70952000±46.14）相比,雄黄纳米微粒（加呼吸道合胞病毒）组的复制量（1123500±20.25）和利巴韦林（加呼吸道合胞病毒）组的复制量（426593.78±49.02）均降低,差异显着（P<O.05）。3通过MTT法和激光共聚焦显微镜观察雄黄纳米微粒诱导腺病毒感染Hep-2细胞凋亡,结果显示雄黄纳米微粒0.367μg/mL、0.184μg/mL、0.092μg/mL、0.046μg/mL剂量组在HAdV-3感染24h时可诱导HAdV-3感染Hep-2细胞凋亡,同时经激光共聚焦显微镜观察显示雄黄大剂量组的细胞凋亡较小剂量组更明显；当雄黄纳米微粒作用到48h时可减轻HAdV-3感染细胞病变,细胞存活率明显多于腺病毒对照组,其对腺病毒CPE的抑制作用可以持续至120h。4雄黄纳米微粒可通过作用于PI3-K介导的信号通路,降低磷酸化AKT和NF-κB p65蛋白表达的水平,增加促凋亡蛋白P53、FasL、Bax mRNA表达,降低抑凋亡蛋白Bcl-2mRNA表达,说明雄黄纳米微粒可能在腺病毒感染早期诱导感染细胞凋亡,发挥抗病毒的作用。结论1本研究证实了雄黄纳米微粒具有抗腺病毒和呼吸道合胞病毒的作用,填补了雄黄抗病毒实验研究的空白；2雄黄纳米微粒可在腺病毒感染早期通过抑制PI3-K通路,降低AKT的磷酸化,促染早期细胞凋亡,从而起到抑制腺病毒复制的作用。
井大新[4]（2011）在《健脾补肾法治疗骨髓增生异常综合征RA型的临床观察》文中提出目的:观察以健脾补肾方药为主联合康力龙治疗骨髓增生异常综合征RA型（myelodysplastic syndrome,MDS-RA）的临床疗效,并初步探讨其疗效机理,为临床用药提供依据。方法:将符合纳入标准的30例骨髓增生异常综合征RA型患者随机分为治疗组和对照组,治疗组16例,采用健脾补肾方药为主加减联合康力龙治疗;对照组14例,单纯采用康力龙治疗,两组疗程均为6个月。观察两组患者治疗前后临床疗效、中医症候的改善情况、外周血细胞计数、外周血及骨髓幼稚细胞百分比的变化情况。结果:临床观察:治疗组综合疗效总有效率为75.00%,对照组总有效率57.14%,二者之间存在显着性差异（P<0.05）;治疗组的中医证候积分改善显着,明显优于对照组（P<0.05）;健脾补肾法可有效改善外周血象,降低外周血及骨髓中幼稚细胞百分比,与对照组之间有显着性差异（P<0.05）。结论:采用健脾补肾法联合康力龙,可有效改善患者的临床症状及血液学指标,对MDS-RA有较好的疗效。
李传峰[5]（2010）在《鸭病毒性肿头出血症病毒感染特性及其免疫检测技术的研究》文中提出1998-2003年四川省、重庆市、贵州省和云南省等养鸭省份发生了一种以鸭头肿胀、眼结膜充血、出血,全身皮肤广泛性出血,肝肿胀呈土黄色,并伴有出血斑点,体温43℃以上,排草绿色稀粪等特征性的急性病毒性传染病。该病目前给养鸭业带来了巨大的经济损失。程安春等通过流行病学调查、临床症状和病理学变化观察、病理组织学检查、病原的分离鉴定、人工感染试验、电镜观察、防治试验,确诊为一种新的鸭病,并命名为“鸭病毒性肿头出血症（Duck viral swollen head hemorrhagic disease, DVSHD）”。国内其他学者也称之为“鸭传染性肿头症”或“鸭肿头败血症”。本病与鸭瘟在临床特征和尸检变化上有许多相似之处,鸭病毒性肿头出血症病毒（Duck swollen head hemorrhagic disease virus, DSHDV）是该病的病原。目前有关该病的研究资料报道较少,特别是有关DSHDV感染特性以及特异、敏感、快速的检测方法等更是缺乏深入研究。因此,本文对鸭病毒性肿头出血症病毒的对成年鸭和鸭胚感染特性以及相关的免疫检测技术进行了一系列的研究。本研究获得以下系列结果：1.鸭病毒性肿头出血症实验感染模型的建立：本实验用鸭病毒性肿头出血症病毒强毒（HY-99株）作为种毒,通过肌注、口服和滴鼻三种方式感染28日龄健康鸭,攻毒后每天观察临床症状和发病鸭及死亡鸭的剖检变化。结果显示,感染鸭出现以体温升高、头颈肿胀、眼结膜充血、出血、排灰白色或草绿色稀粪为主要特征的临床症状和肝脏肿大、出血呈土黄色、免疫器官和消化道严重充血、出血为主要特征剖检变化。结果表明,临床症状和剖检变化与自然感染鸭基本一致,本实验成功构建了鸭病毒性肿头出血症实验感染模型。2. DSHDV强毒人工感染鸭组织病理学发展规律研究：本研究对实验感染模型中感染鸭各个组织器官进行了动态组织病理学变化观察。结果表明,实验感染模型中三组鸭出现的组织病理学变化基本一致,但时间存在差异：肌注组鸭于感染后72h内、滴鼻组和口服组144h内组织病理学变化以充血、出血和炎性细胞浸润为主；肌注组鸭于感染72h后、滴鼻组和口服组144h后组织病理学变化以弥漫性出血、大小不等坏死灶或粘膜上皮细胞的坏死为主。免疫器官、消化腺、消化道、呼吸器官、心脏和肾脏等是主要的靶器官。这表明DSHDV是一种泛嗜性病毒,对全身各个组织器官具有严重破坏作用。3. DSHDV强毒在人工感染鸭宿主细胞内的形态发生学和超微病理学研究：电镜下,完整DSHDV粒子呈圆形或椭圆形,无囊膜,直径为70nm-85nm。病毒粒子仅出现在感染细胞的胞浆中。电镜下,可观察到病毒粒子于感染4h后吸附于法氏囊靶细胞表面,并通过细胞的内吞作用进入细胞后,在胞浆内脱去双层衣壳,随后在胞浆内复制并合成病毒相关蛋白。这些合成结构蛋白、非结构蛋白及成熟或不成熟的病毒粒子在胞浆内聚集成圆形、椭圆形或不规则形的包涵体结构。感染后24h-72h,病毒核酸在这些基质上组装和成熟形成完整的病毒粒子。感染144h后,成熟病毒通过细胞的崩解而释放到细胞间隙。DSHDV强毒人工感染成年鸭后能够引起宿主细胞明显的超微结构变化（坏死和凋亡）。该病毒的主要靶器官包括法氏囊、胸腺、脾脏、肝脏、消化道和肾脏等器官。病毒侵染靶细胞主要有：淋巴细胞、肝细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、上皮性网状细胞、粘膜上皮细胞、肠腺细胞等。4. DSHDV强毒致人工感染鸭和鸭胚宿主细胞凋亡的研究：通过TEM法观察发现,DSHDV经尿囊腔感染10日龄鸭胚后尿囊膜上皮细胞、肝细胞、肠道上皮细胞和心肌细胞发生凋亡。凋亡细胞时间分布在感染后24h-96h,同时在部分宿主细胞的胞浆内发现少量病毒粒子。本研究利用HE染色法、TEM法和TUNEL法三种方法均观察到DSHDV感染诱导鸭宿主细胞的凋亡。发生凋亡的器官包括法氏囊、胸腺、脾脏、肾脏、肝脏、心脏、食管、腺胃和肠道。宿主细胞的凋亡指数从感染后2h到72h逐渐增加,72h达到最高值。感染72h后,濒死鸭和死亡鸭宿主细胞死亡以典型坏死为主。DSHDV感染诱导的细胞凋亡在DVSHD的致病机制中起到重要作用。5.免疫酶组织化学检测DSHDV抗原方法的建立和应用：本研究以兔抗DSHDVIgG作为一抗、HRP-羊抗兔IgG作为二抗建立并优化了在石蜡切片中检测DSHDV抗原的间接免疫酶SP法,研究证实本方法具有较高的特异性和敏感性。该方法的应用研究揭示,三组鸭感染DSHDV后,肌注组（4h）、滴鼻组（12h）和口服组（24h）依次首先从法氏囊组织中检测阳性信号,随后抗原在多个组织中检出,包括免疫器官、消化腺、消化道、肾脏、心脏、肺脏和气管等。DSHDV侵染的靶细胞主要包括淋巴细胞、巨噬细胞、网状细胞、粘膜上皮细胞、肝细胞、间质细胞、腺泡细胞、肠腺细胞、肾小管上皮细胞、心肌细胞和柱状上皮细胞等。6.间接ELISA检测鸭病毒性肿头出血症抗体方法的建立和应用：本研究以浓缩纯化的DSHDV作为包被抗原,建立了检测DSHDV抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。试验最佳反应条件为：抗原最佳稀释度为1：40,高免血清为1：80稀释,最佳反应时间为60min；酶标抗体为1：2000稀释,最佳反应时间为60min；封闭液为1%BSA-PBST,封闭时间为60min；包被抗原最佳工作条件为37℃孵育1h后过夜；底物的最佳反应时间为37℃孵育15min。本实验建立的方法可成功应用于临床样品的检测和鸭免疫后抗体水平的评估。因此,本方法具有良好的特异性、稳定性、可重复性和较高的敏感性,可用于DVSHD抗体的检测。
任秀君[6]（2007）在《针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响》文中研究表明研究目的:高脂血症（hyperlipidemia,HLP）由血中脂蛋白合成与清除紊乱所致,表现为血浆脂蛋白异常、血脂增高等,属于祖国医学的“痰浊”“瘀血”范畴。它是动脉粥样硬化等心脑血管疾病发生的重要危险因素,有效地防治HLP是防治心脑血管疾病的重要途径。脑血管疾病是目前严重危害人类健康的主要疾病之一。在我国死于脑血管病者居三大死因首位。其中缺血性脑血管疾病占60%～80%。脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高的“三高”特点,是威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病。为了减少和延缓中风的发生,减轻中风后机体状态,从高血脂阶段早期进行针刺干预,是针刺防治中风的新视角,具有重要流行病学研究意义。高血脂与中风,神经干细胞与神经营养因子之间的关系是目前研究尚未进行探讨的部分,本研究试图通过建立高血脂合并脑缺血动物模型,并观察针刺的影响,探讨在高血脂阶段积极早期进行针刺干预,是否可通过升高神经营养因子的合成与分泌,从而促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,促进脑损伤的修复和再生。研究方法:应用大鼠喂养经典高脂饲料,化学诱导大脑中动脉血栓闭塞制造高血脂合并脑缺血模型。将动物随机分为八组:正常对照组、高血脂模型组、高血脂治疗组、脑缺血模型组、脑缺血治疗组、高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组。高血脂治疗组用电针三阴交、丰隆穴治疗10天。脑缺血治疗组用针刺人中、百会穴治疗7天。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组,先给大鼠喂养高脂饲料造成高血脂模型,治疗Ⅰ组电针三阴交、丰隆穴10天后,两组同时电针三阴交、丰隆穴,针刺人中、百会穴,7天后处死。正常对照组和模型组均不针刺。用生化方法检测各组治疗前后血脂四项。应用神经行为学指标观察治疗前后神经症状的改善情况。实验结束用免疫组化方法检测海马区和额叶皮层脑缺血病理改变、室管膜下区和大脑额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达情况。用酶联免疫法（ELISA）检测右侧大脑匀浆中神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）浓度。实验结果:1高血脂合并脑缺血模型的建立本实验选用经典高脂饲料喂养6周造成高脂血症大鼠模型,在此基础上用大脑中动脉FeCl3刺激血栓性闭塞法造成局灶性脑缺血,最终造成高血脂合并脑缺血模型。预实验结果显示,与同时段正常对照组比较,高血脂组4周、6周CHO、LDL-C、TG升高有显着差异,P<0.01,HDL-C没有显着差异。说明高脂饲料喂养4-6周可以造成大鼠高血脂模型。由于高血脂形成时间较长,饲养6周的高血脂症大鼠模型更近似于人类高血脂症的病理变化,正式实验定为6周。正式实验,42天,高脂饮料喂养的各组大鼠的CHO和LDL-C、TG与正常对照组大鼠比较,升高有显着性差异,P<0.01。HLD-C降低有显着性差异,P<0.01。证明高血脂症大鼠造模成功,可以进行实验。52天脑缺血造模后,在MCAO清醒（术后约1h）后,在1～2h内观察模型动物有脑缺血模型出现的神经功能缺失症状,各组大鼠在造模后1～2h的神经症状行为在评定上均有阳性反应,与正常对照组比较均有显着性差异p<0.01。HE染色结果可见,实验组动物脑缺血造模后,缺血灶出现在额叶,位置比较恒定,缺血灶内细胞排列散乱,并见大量神经元变性坏死,出现脑水肿表现,海马区大量神经元变性坏死,排列紊乱,各组有不同程度的神经元脱失现象等病理改变,说明本实验的脑缺血模型制作是成功的。本实验首次建立高血脂合并脑缺血的动物模型,此模型成功率高,死亡率小,重复性好,充分模拟了人类疾病的病理及生理改变。2正常大鼠血脂、HE染色结果、神经干细胞、NSE、神经营养因子的表达正常大鼠CHO 51.92±9.46mg/dL, HDL-C 26.80±8.16 mg/dL,LDL-C 30.50±8.19 mg/dL,TG47.98±12.18 mg/dL。HE染色结果显示,大鼠右侧海马区和额叶皮层神经细胞排列清楚,细胞形态清晰。神经干细胞标志,nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,在正常大鼠右侧脑内表达较少,在前脑背外侧伸展、侧脑室外侧壁可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞（背外侧伸展nestin:阳性细胞数63±9.40;面密度0.62±0.10%;光密度0.50±0.03%。PCNA:阳性细胞数185±10.60;面密度1.93±0.11%;光密度1.22±0.07%。vimentin:阳性细胞数95±6.31;面密度0.61±0.04%;光密度0.34±0.02%。Tuj-1:阳性细胞数56±7.69;面密度0.96±0.13%;光密度0.22±0.03%。侧脑室外侧壁:nestin:阳性细胞数41±5.61;面密度0.35±0.05%;光密度0.23±0.03%。PCNA:阳性细胞数114±22.79;面密度1.25±0.25%;光密度0.94±0.19%。vimentin:阳性细胞数48±11.85;面密度1.05±0.26%;光密度0.58±0.14%。Tuj-1:阳性细胞数35±4.69;面密度0.88±0.12%;光密度0.45±0.06%。）正常对照组大脑右侧额叶皮层相应区域表达更少。（nestin:阳性细胞数14±3.47;面密度0.11±0.03%;光密度0.09±0.02%。PCNA:阳性细胞数58±6.52;面密度0.64±0.07%;光密度0.39±0.04%。vimentin:阳性细胞数56±6.46;面密度0.22±0.03%;光密度0.11±0.01%。Tuj-1:阳性细胞数13±5.14;面密度0.08±0.03%;光密度0.05±0.02%。）右侧大脑匀浆中NSE（41.70±3.47 ng/dL）及神经营养因子NGF（79.36±7.07 pg/ml）、BDNF（5.66±0.86μg/L）、bFGF（51.20±6.05 ng/L）含量呈基础表达。3针刺对实验性高血脂大鼠的治疗作用3.1针刺对实验性高血脂大鼠血脂的作用经针刺治疗后,和高血脂模型组相比,高血脂治疗组大鼠的CHO、LDL-C、TG降低有极显着差异,P<0.01。HLD-C升高有极显着差异,P<0.01。说明针刺能降低实验性高血脂大鼠CHO、LDL-C、TG,升高HLD-C,调节血脂水平。3.2针刺对实验性高血脂大鼠右侧大脑SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1在实验性高血脂造模后大鼠脑内表达较少,在室管膜下区SVZ、背外侧角可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞,额叶皮质表达更少,与正常对照组相比,其阳性细胞数、面密度、光密度没有显着差异,P>0.05。针刺对实验性高血脂大鼠nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达影响不大。3.3针刺对高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中NSE的作用高血脂造模后,右侧脑匀浆中NSE浓度与正常脑匀浆中NSE浓度没有显着差异,P>0.05,说明高血脂本身不能影响右侧脑组织中NSE的分泌与合成。高血脂大鼠治疗组和模型组之间没有显着差异,说明针刺不能影响实验性高血脂大鼠NSE的分泌。3.4针刺对实验性高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组比较,高血脂模型组大鼠大脑匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显降低,P<0.05或P<0.01;与高血脂模型组比较,针刺治疗组BDNF显着升高,P<0.05,NGF、bFGF没有显着差异,P>0.05,但有升高的趋势。实验结果提示高血脂可降低大鼠大脑中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成,针刺可升高高血脂状态某些神经营养因子的含量,如BDNF。4针刺对实验性脑缺血大鼠的治疗作用4.1针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用59天,与正常对照组比较,脑缺血模型组和脑缺血治疗组神经症状评分升高有极显着性差异,p<0.01;与脑缺血模型对照组比较,脑缺血治疗组的神经症状评分降低有极显着性差异,p<0.01。HE染色结果显示,脑缺血治疗组缺血区周围组织水肿减轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。4.2针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用脑缺血后,大鼠缺血侧前脑室管膜下区（背外侧伸展、侧脑室外侧壁）、缺血区额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1强表达,并有多层阳性细胞,背外侧角可见大量的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,并向外形成了背外侧伸展,脑缺血区可见散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。与正常对照组比较,脑缺血模型组、治疗组nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与脑缺血模型组比较,脑缺血治疗组各项升高均有极显着差异,P<0.01。脑缺血后存在神经干细胞的增殖,并有一部分神经干细胞有向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化的趋向。针刺后各项指标高于脑缺血组。说明针刺可提高实验性脑缺血大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。针刺结果显示,针刺可促进大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。4.3针刺对实验性脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常组相比,脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组大脑匀浆中NSE含量降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示:脑缺血后,脑匀浆中NSE浓度显着升高,说明出现脑损伤。针刺可降低NSE浓度,从而减轻脑损伤。4.4针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常组相比,脑缺血模型组缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显上升,有显着性差异,P<0.05;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组缺血侧脑组织匀浆中NGF、bFGF含量升高有显着差异,P<0.05或P<0.01。实验结果提示脑缺血后,缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF浓度显着升高,说明脑缺血后,自身可分泌神经营养因子,从而产生一定的脑保护作用。针刺可通过促进缺血侧大脑NGF、bFGF的分泌与合成,加强脑保护作用。5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠的治疗作用5.1针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠血脂的作用经针刺治疗后,与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组、Ⅱ组CHO、LDL-C升高有极显着性差异,P<0.01;高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅱ组TG升高,有极显着性差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组CHO、TG、LDL-C降低有显着性差异,P<0.01或P<0.05,治疗Ⅱ组没有显着差异,P>0.05;与治疗Ⅰ组比较,治疗Ⅱ组CHO、LDL-C、TG没有显着差异,P>0.05;HDL-C,各组之间比较没有显着差异,P>0.05,但与42天比较,治疗Ⅰ组HDL-C升高有显着差异,P<0.01。本实验表明,针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,高血脂合并脑缺血模型治疗治疗Ⅰ组疗效好于治疗Ⅱ组,从而说明从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平。5.2针刺对实验性高血脂合并脑缺血脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用与合并模型组比较,合并治疗组神经症状评分显着降低,p<0.05;与合并治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组没有显着差异,p>0.05,说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。针刺后缺血区HE结果显示,针刺后缺血区周围组织水肿减轻。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组水肿程度最轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明电针在高血脂成模后积极治疗可减轻脑损害。5.3针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用高血脂合并脑缺血模型组前脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、额叶缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达弱于单纯脑缺血模型组。与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,高血脂合并脑缺血Ⅱ组各项降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示高血脂可减弱脑缺血后nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达。即高血脂可减弱脑缺血后神经干细胞的增殖,迁移和分化。针刺可提高高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比Ⅱ组各项表达要强,说明在高血脂阶段介入治疗,更能提高nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。针刺结果显示,针刺可促进高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。说明在高血脂阶段介入治疗,更能促进神经干细胞的增殖,分化和迁移。5.4针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常对照组和脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量显着上升,有显着性差异,P<0.05,P<0.01。与正常对照组相比,合并各组缺血侧大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与合并模型组比较,合并治疗Ⅰ组、Ⅱ组下降有显着差异P<0.01,P<0.05;与高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组升高有显着差异P<0.05。实验结果提示,高血脂合并脑缺血可加重脑缺血后脑损伤,针刺可减低高血脂合并脑缺血大鼠的脑损伤,尤其在高血脂阶段介入针刺治疗的治疗Ⅰ组疗效远远好于治疗Ⅱ组。5.5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组、脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组NGF、BDNF、bFGF降低有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组NGF、bFGF上升有显着差异P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组NGF、BDNF降低有显着差异P<0.01。实验结果提示:高血脂可降低脑缺血后脑自身的保护作用,针刺可通过促进NGF、BDNF、bFGF的分泌和合成,从而起到脑保护的作用。针刺治疗Ⅰ组的NGF、BDNF高于Ⅱ组,说明在高血脂阶段积极进行针刺治疗可更好的提高神经营养因子分泌,从而起到脑保护的作用。实验结论:1高血脂合并脑缺血模型的建立是成功的。2高血脂本身并不能影响实验性高血脂大鼠右侧室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑匀浆中NSE的表达,但能降低右侧大脑匀浆中神经营养因子,如NGF、BDNF、bFGF的分泌。3脑缺血能增强实验性脑缺血大鼠缺血侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。4高血脂合并脑缺血,可减弱脑缺血后室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织NSE的分泌,降低缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,减弱大脑的自我保护作用。5针刺“丰隆”、“三阴交”,可降低实验性高血脂大鼠CHO、TG、LDL-C,升高HDL-C水平。针刺不能影响实验性高血脂大鼠高血脂后大脑右侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑组织中NSE的分泌,但能促进右侧脑组织中BDNF的分泌与合成。6针刺“百会”“人中”可改善实验性脑缺血大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,降低缺血侧NSE的分泌,增强实验性脑缺血大鼠缺血侧大脑室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进大脑缺血侧脑组织NGF、bFGF的分泌与合成。7针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,改善高血脂合并脑缺血模型大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,可提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。8从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平,改善脑缺血状态,明显提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧大脑NSE的分泌,促进缺血侧大脑匀浆中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。9针刺能通过促进缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,降低NSE分泌,促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,从而促进神经元的修复和再生。综上所述本实验结果显示,神经营养因子和神经干细胞增殖、迁移、分化之间存在必然联系。在实验性脑缺血和实验性高血脂合并脑缺血大鼠脑缺血造模后,神经营养因子含量的升高,往往同神经干细胞的增殖同时出现,所以猜测本实验脑缺血后是神经营养因子的升高促进了神经干细胞的增殖、迁移和分化。实验结果表明,针刺作为一种治疗手段在一定程度上促进了神经营养因子的分泌,从而最终促进了脑缺血后神经干细胞增殖、迁移、分化,尤其在高血脂阶段针刺治疗可减轻脑缺血后损伤,促进神经元的修复与再生。
李晓,沈炜明,浦权[7]（2005）在《骨髓增生异常综合征患者凋亡造血细胞的克隆性初步研究》文中进行了进一步梳理目的研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者凋亡造血细胞的克隆性来源。方法经过G带或R带染色体核型分析,确定骨髓细胞有异常克隆存在的MDS患者共19例,其中10例取骨髓分离有核细胞制备离心涂片。同步进行DNA末端原位杂交（ISEL）及相应异常染色体的间期荧光原位杂交（FISH）（简称ISEL/FISH法）。计数有核细胞中异常克隆细胞百分比和凋亡细胞中异常克隆细胞百分比。4名正常人8张离心涂片经Fas单抗孵育诱导凋亡后行FISH/ISEL检测作为方法学对照。另9例患者骨髓有核细胞经膜联蛋白Ⅴ（AnnexinⅤ）及碘化丙锭（PI）标记染色细胞,流式细胞术分选PI-、AnnexinⅤ+PI-、AnnexinV-PI-细胞,离心涂片后再行FISH检测（简称FCM/FISH法）。结果10例经ISEL/FISH分析的MDS患者骨髓有核细胞中异常克隆细胞百分比平均为37.1%,凋亡细胞中异常克隆细胞百分比仅为24.0%。正常人经Fas单抗诱导的凋亡细胞核型不变。9例经FCM/FISH分析者,8例显示凋亡细胞中核型正常百分比高于非凋亡细胞。结论MDS凋亡细胞主要来源于残余正常造血细胞。
李克玲[8]（2004）在《救脑宁注射液治疗实验性脑血肿家兔的作用及其机制研究》文中研究指明出血性中风多发生在中、老年高血压病人,是一种常见、多发病,由于其高病死率、高致残率,严重危害人类健康。近年来,大量文献显示,人们对缺血再灌注损伤所致的缺血性中风研究较多,而对出血性中风研究相对较少。本研究是在我们已往多年的工作基础上,以活血化瘀、清热解毒、化痰开窍法方药—救脑宁注射液为基础,以脑血肿周围损伤组织的神经细胞凋亡变化为切入点,从整体、细胞、分子、基因水平深入探讨中医药对实验性脑血肿以及原代神经细胞拟缺血再灌注损伤的保护作用,这将对指导中医临床及深入研究中医药有效方剂的作用机制提供实验依据。 本论文包括三部分:（1）救脑宁注射液对实验性脑血肿家兔治疗作用的研究:复制家兔实验性脑血肿模型,观察脑组织病理学变化的演变规律,以及救脑宁注射液的治疗效应;（2）救脑宁注射液对缺血再灌注诱导原代神经细胞损伤的影响:在体外培养神经细胞拟缺血再灌注损伤模型上,观察救脑宁注射液抗损伤作用的细胞代谢、形态学与凋亡变化;（3）救脑宁注射液改善缺血再灌注所致原代神经细胞凋亡及其调控机制的研究:从细胞、分子、基因水平,在原代神经细胞拟缺血再灌注损伤模型基础上,试图从凋亡发生的两条主要途径:线粒体途径和死亡受体途径、Caspase-3 蛋白酶级联反应以及相关的上游调控基因等方面阐明救脑宁注射液抗神经细胞凋亡的作用环节与机制。 家兔脑血肿整体动物实验分为六组:正常对照组（Control）,模型组（Model）,救脑宁高剂量组（JNN-H）,中剂量组（JNN-M）,低剂量组（JNN-L）和清开灵注射液组（QKL）。实验各组分别在造模后 3、7、15 天（d）取材,观察动物一般情况、脑系数、脑组织含水量、脑组织 HE、Nissl’s、Mallory 染色、投射电镜形态学变化以及 TUNEL 染色显示凋亡细胞等指标变化,并采用计算机图像分析系统对相关形态学指标进行定量分析。 体外培养神经细胞拟缺血再灌注损伤实验也同样分为上述六组即:Control,Model,JNN-H,JNN-M,JNN-L,QKL。实验各组分别于单纯缺血 2 小时（h）及缺血 2h+再灌注 4h取材,检测细胞代谢率（MTT）、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、细胞凋亡率（流式细胞技术）、形态学、细胞 DNA 和 RNA 变化（AO 染色）、线粒体膜电位（流式细胞技术）、细胞内 pH 值（流式细胞技术）、细胞内 bcl-2/bax、Fas/FasL、Caspase-3 蛋白的表达以及RT-PCR 检测 bcl-2/bax mRNA 表达等指标变化,用计算机图像分析系统对相关指标进行定量分析。 主要实验结果如下: 1. 救脑宁注射液可改善实验性脑血肿家兔一般状态,减轻脑水肿及病理组织学变化,抑制凋亡发生 实验动物造模后,健侧（左侧）肌力下降,尤以前肢为重,行走病侧（右侧）偏转步态,以术后 7-9 天内明显;造模后 3、7、15 天,分别出现不同程度的脑水肿、脑组织含水量增加,以 3、7 天为重;脑组织病理形态学观察可见:（1）造模 3 天时,脑组织以广泛的细胞与间质水肿和出血为重,神经细胞不同程度的变性、坏死;（2）造模 7 天时,脑组织水肿仍较明显,出血现象有不同程度的改善,血肿周围脑组织出现明显的炎细胞反应与胶质增生现象,可见少量格子细胞;（3）造模 15 天时,从脑组织形态学变化上看,<WP=4>-2- 救脑宁注射液治疗实验性脑血肿家兔的作用及其机制研究脑组织水肿已不十分明显,出血现象也有减轻,血肿周围脑组织的胶质反应性增生及炎细胞浸润现象更加明显,并可见较多的格子细胞,血肿有明显的吸收表现。脑组织 TUNEL 染色,造模后皆有明显的阳性深染细胞出现,但以 7 天时凋亡表现最重。 救脑宁注射液高、中、低剂量组,在各取材时间点表现出不同程度地减小血肿面积,减轻脑组织含水量及血肿周围组织出血、水肿现象;TUNEL 染色显示,神经细胞凋亡阳性细胞数明显少于相同时间点的模型组;从三种用药剂量对各指标的作用效果来看,以中剂量作用更好一些,其与清开灵的药效作用相比,要么相似要么更佳。 2. 救脑宁注射液有不同程度地提高神经细胞代谢率及 DNA、RNA 含量,降低 LDH 漏出率与凋亡率,改善缺血再灌注致形态学异常变化 神经细胞造模后,细胞代谢率 MTT 明显下降,LDH 漏出率、凋亡率明显升高,与正常对照组比较 p<0.05;形态学表现为:（1）倒置相差显微镜:可见有的细胞体积变大,轮廓不清,光晕不明显,突起肿胀、断裂或短缩。而有的细胞则体积缩小,颜色加深,光晕消失;（2）普通光学显微镜:HE 染色,神经元的数目较正常对照组明显减少,神经元突起形成的网络明显稀疏。神经元发生不同程度的肿胀,轮廓不清,突起有断裂、短缩;部分神经元体积变小,深染,出现核固缩现象等;Nissl’s 染色,可见细胞内尼氏体明显减少,模糊不清。（3）荧光显微镜:细胞内染色质稀疏,DNA、RNA 含量均减少,荧光强度明显减弱;部分神经细胞核明显固缩,核内染色质凝集呈块状分布,核膜完整。上述损伤性变化以缺血 2h+再灌注 4h 时为重。 救脑宁注射液高、中、低剂量组,在各时间点表现出不同程度地提高细胞代谢率、降低 LDH 漏出率和凋亡率的作用,与模型组比较 p<0.05;同时也显示出改善细胞形态学异常变化、增加细胞内 DNA、RNA 含量,保护神经细胞功能与结构免遭?
李晓,应韶旭,刘薏芝,陶英,常春康,蒋秦燕,黄薇,石军,浦权[9]（2003）在《骨髓增生异常综合征巨噬细胞增生与造血细胞凋亡的相关性》文中认为目的 观察骨髓增生异常综合征（MDS）巨噬细胞增生状况与原位细胞凋亡的相关性并探讨其意义。方法 用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶免疫酶标（APAAP）技术（CD68抗原标记）结合DNA末端原位标记（ISEL）分析30例MDS患者（其中低危组21例、高危组9例）骨髓塑料冷包埋切片中巨噬细胞数量和造血细胞原位凋亡状况,并分析二者间的相关性。缺铁性贫血（IDA）12例作对照。结果 （1）MDS患者骨髓切片中CD68阳性细胞数为（29.2±33.0）/mm2,对照组为（21.2±16.7）/mm2（P>0.05）;（2）MDS病例凋亡细胞数平均为（71.5±70.9）/mm2,对照组为（37.3±23.0）/mm2（P<0.05）;（3）MDS低危组CD68阳性细胞[（35.5±37.0）/mm2]和凋亡细胞数[（90.7±74.6）/mm2]均高于高危组[（14.6±11.7）/mm2和（26.8±33.1）/mm2]（P分别<0.05和<0.01）;（4）MDS病例CD68阳性细胞数与造血细胞凋亡显示显着正相关;r=0.83,P<0.001;（5）MDS病例骨髓切片中CD68阳性细胞与凋亡细胞不显示位置上的相关性;（6）MDS病例CD68阳性细胞本身存在过度凋亡。结论 MDS存在过度凋亡;MDS低危组凋亡高于高危组;MDS巨噬细胞与造血细胞凋亡具有相关性。
李晓,浦权,刘薏芝,石军,陶英,常春康,蒋秦燕,黄薇[10]（2002）在《骨髓增生异常综合征巨核细胞增殖与凋亡的初步研究》文中提出为观察骨髓增生异常综合征 （MDS）巨核系细胞增殖与凋亡状况 ,用CD4 1免疫酶标 （APAAP）结合DNA末端原位标记 （ISEL） ,分析 2 9例MDS患者骨髓塑料冷包埋切片中巨核细胞的增生状况、凋亡数量及特征 ,并以缺铁性贫血 14例作为对照。结果显示 ,2 9例MDS之CD4 1阳性细胞数平均为 （2 6 .2 3± 18.18）个 /毫米2 ,对照组 （15 .6 4± 7.11）个 /毫米2 ,t′2 .5 4 ,P <0 .0 5 ;MDS病例微小巨核细胞明显增多 ,占巨核细胞总数的 31.2 0 % ,对照组仅12 .0 1% ,P <0 .0 1。MDS巨核细胞总数与微小巨核细胞数之间显示正相关 ,r值 0 .70 2 ,P <0 .0 1。MDS之巨核细胞且出现在骨小梁旁的异常分布及成簇现象。MDS巨核系细胞凋亡仅占该系细胞的 4 .4 0 % ;占凋亡细胞总数的9.32 % ,与对照组相比无显着差异。MDS巨核系细胞凋亡仅见于微小巨核细胞 ,且与微小巨核细胞数间存在正相关 （r =0 .5 89） ,但部分显示微小巨核细胞形态学特征的凋亡细胞不表达CD4 1。结论认为 ,MDS确实存在巨核细胞过度增殖及明显病态 ,微小巨核细胞凋亡可能系机体对异常增殖的生理反应 ,未观察到巨核细胞凋亡明显增加可能与晚期凋亡细胞不表达CD4 1有关
二、APAAP免疫酶标及DNA末端原位标记双重染色检测急性白血病细胞原位凋亡（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、APAAP免疫酶标及DNA末端原位标记双重染色检测急性白血病细胞原位凋亡（论文提纲范文）
（1）光动力疗法治疗小鼠乳腺癌的生物效应三维空间分布的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 光动力疗法现状 |
| 1.1.2 光动力疗法原理和作用机制 |
| 1.1.3 光动力生物效应 |
| 1.1.4 光动力疗法空间分布模型 |
| 1.2 立题依据和创新性分析 |
| 1.2.1 光动力生物效应三维空间分布的意义 |
| 1.2.2 三维分子重建 |
| 1.2.3 空间分布分析 |
| 1.2.4 技术路线和创新点 |
| 1.3 论文结构 |
| 第二章 光动力治疗乳腺癌动物模型 |
| 2.1 实验器材 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验材料和试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞复苏 |
| 2.2.2 细胞传代 |
| 2.2.3 细胞冻存 |
| 2.2.4 皮下移植瘤模型建立 |
| 2.2.5 光动力治疗 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 全肿瘤组织样本的制备与分子标记 |
| 3.1 肿瘤组织蜡块准备 |
| 3.1.1 实验仪器 |
| 3.1.2 实验材料和试剂 |
| 3.1.3 实验方法和结果 |
| 3.2 H&E染色 |
| 3.2.1 H&E染色原理 |
| 3.2.2 H&E染色器材与试剂 |
| 3.2.3 H&E染色步骤 |
| 3.2.4 H&E染色结果 |
| 3.3 TUNEL免疫组化染色 |
| 3.3.1 TUNEL免疫组化染色原理 |
| 3.3.2 TUNEL免疫组化染色器材与试剂 |
| 3.3.3 TUNEL免疫组化染色步骤 |
| 3.3.4 TUNEL免疫组化染色结果 |
| 3.4 CD31免疫组化染色 |
| 3.4.1 CD31免疫组化染色原理 |
| 3.4.2 CD31免疫组化染色器材与试剂 |
| 3.4.3 CD31免疫组化染色步骤 |
| 3.4.4 CD31免疫组化染色结果 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 全视野数字化病理切片图像处理 |
| 4.1 H&E染色病理切片图像处理 |
| 4.1.1 实验设备 |
| 4.1.2 实验方法和结果 |
| 4.1.3 图像分割阈值的设定 |
| 4.2 TUNEL免疫组化病理切片图像处理 |
| 4.2.1 实验设备 |
| 4.2.2 实验方法和结果 |
| 4.2.3 棕褐色细胞核凋亡信号的提取 |
| 4.3 CD31免疫组化病理切片图像处理 |
| 4.3.1 实验设备 |
| 4.3.2 实验方法和结果 |
| 4.3.3 棕褐色细胞膜血管信号的提取 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 光动力生物效应的三维空间分布 |
| 5.1 肿瘤组织光分布模拟 |
| 5.1.1 实验目的和方法 |
| 5.1.2 实验结果 |
| 5.2 肿瘤组织坏死分布分析 |
| 5.2.1 实验目的和方法 |
| 5.2.2 实验结果 |
| 5.2.3 讨论 |
| 5.2.4 结论 |
| 5.3 肿瘤组织凋亡分布分析 |
| 5.3.1 目的和方法 |
| 5.3.2 实验结果 |
| 5.3.3 讨论 |
| 5.3.4 结论 |
| 5.4 肿瘤组织血管分布分析 |
| 5.4.1 目的和方法 |
| 5.4.2 实验结果 |
| 5.4.3 讨论 |
| 5.4.4 结论 |
| 5.5 肿瘤组织坏死、凋亡和血管分布关系分析 |
| 5.5.1 实验目的和方法 |
| 5.5.2 实验结果 |
| 5.5.3 讨论 |
| 5.5.4 结论 |
| 5.6 本章小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 主要研究工作总结 |
| 6.2 进一步的工作展望 |
| 6.2.1 本研究的不足之处 |
| 6.2.2 生物效应三维空间分布建立和分析方法 |
| 6.2.3 应用前景 |
| 参考文献 |
| 论文、专利及科研项目 |
| 致谢 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 附录3 |
| 附录4 |
（2）PRIM2在非小细胞肺癌中的表达及临床相关研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 中文摘要 英文摘要 前言 材料与方法 结果 讨论 结论 参考文献 综述 参考文献 攻读学位期间获得的学术成果 致谢 |
（3）雄黄纳米微粒在细胞水平抑制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 上篇 文献综述 |
| 综述一 雄黄的制备和现代药理作用研究概况 |
| 1 雄黄的制备、表征 |
| 2 雄黄的粒度分析方法 |
| 3 雄黄复方的药代动力学研究 |
| 4 雄黄现代药理作用的研究 |
| 5 雄黄临床治疗病毒感染性疾病 |
| 6 雄黄毒副作用 |
| 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中西医治疗呼吸道合胞病毒和腺病毒感染性疾病的研究进展 |
| 1 中医病毒感染性疾病的认识 |
| 2. 中药抗病毒的实验研究 |
| 3 西药抗腺病毒和呼吸道合胞病毒的研究进展 |
| 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 下篇 实验研究 |
| 第一部分 雄黄纳米微粒抗呼吸道合胞病毒和腺病毒的研究 |
| 前言 |
| 实验一 雄黄纳米微粒体外抗HAdV-3和RSV的增殖作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 雄黄纳米微粒对HAdV-3和RSV基因表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 雄黄纳米微粒抑制PI3-K/AKT途径诱导腺病毒感染早期细胞凋亡的研究 |
| 前言 |
| 实验三 雄黄纳米微粒在HAdV-3感染不同时间对Hep-2细胞生存率的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 雄黄纳米微粒对腺病毒感染早期细胞凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）健脾补肾法治疗骨髓增生异常综合征RA型的临床观察（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 一、临床资料 |
| （一） 病例来源 |
| （二） 诊断标准 |
| （三） 病例选择标准 |
| （四） 一般资料 |
| 二、治疗方法 |
| （一） 分组方法 |
| （二） 治疗方案 |
| 三、疗效判定 |
| （一） 临床疗效判定标准 |
| （二） 观察指标 |
| 四、统计方法 |
| 五、治疗结果 |
| （一） 临床疗效比较 |
| （二） 检测指标结果比较 |
| 讨论 |
| 一、中医学对骨髓增生异常综合征的认识 |
| （一） 历史沿革 |
| （二） 病因病机的认识 |
| （三） 辨证论治 |
| （四） 导师对MDS-RA 病因病机的认识 |
| 二、现代医学对MDS 发病机制的研究进展 |
| （一） 造血细胞分子生物学异常 |
| （二） 免疫机制异常 |
| （三） 造血微环境异常 |
| 三、组方依据及现代药理研究 |
| （一） 药物组成 |
| （二） 剂型选择 |
| （三） 中药功效溯源 |
| （四） 立方原则及配伍特点 |
| （五） 现代药理研究 |
| 四、结果分析 |
| （一） 临床疗效分析 |
| （二） 检测指标结果分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 详细摘要 |
（5）鸭病毒性肿头出血症病毒感染特性及其免疫检测技术的研究（论文提纲范文）
| 本论文的创新性工作 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 常用缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 鸭主要病毒性传染病病原的感染特性 |
| 1 概况 |
| 2 鸭病毒性传染病流行特点 |
| 3 鸭主要病毒性传染病病原的感染特性 |
| 3.1 鸭病毒性肠炎病原的感染特性 |
| 3.2 鸭病毒性肝炎病原的感染特性 |
| 3.3 鸭流感病原的感染特性 |
| 3.4 鸭病毒性肿头出血症病原的感染特性 |
| 4 存在的问题和研究方向 |
| 第二章 免疫酶技术在病毒病研究中的应用 |
| 1 免疫酶技术基本原理 |
| 2 免疫酶技术发展简史 |
| 3 酶标技术的研究进展 |
| 3.1 标记酶的特点 |
| 3.2 标记酶的种类 |
| 3.3 标记酶底物的种类 |
| 3.4 酶标记技术的种类 |
| 4 免疫酶技术的研究就进展 |
| 4.1 免疫酶组化技术研究进展 |
| 4.2 免疫酶测定法的研究进展 |
| 5 免疫酶组化在病毒病研究中的应用 |
| 5.1 免疫酶组化技术在家畜病毒病研究中的应用 |
| 5.2 免疫酶组化技术在家禽病毒病研究中的应用 |
| 6 酶联免疫吸附测定法在病毒病研究中的应用 |
| 6.1 ELISA在家畜病毒病研究中的应用 |
| 6.2 ELISA在家禽病毒病研究中的应用 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第三章 DSHDV强毒人工感染鸭实验模型构建及组织病理学发展规律研究 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要试剂及配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验鸭分组及人工感染 |
| 2.2 临床症状及病理剖检 |
| 2.3 病理切片的制备和观察 |
| 3 结果 |
| 3.1 临床症状 |
| 3.2 剖检变化 |
| 3.3 组织病理学变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 DVSHD病理学模型构建及其特征 |
| 4.2 DVSHD与鸭常见传染病的临床症状及剖检变化的异同 |
| 4.3 DVSHD与鸭常见传染病的组织学变化的异同 |
| 4.4 病理学变化的特征及意义 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第四章 DSHDV强毒在人工感染鸭宿主细胞内的形态发生学和超微病理学研究 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要试剂及配制 |
| 1.4 主要仪器及设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 人工复制病例 |
| 2.2 透射电镜样品制备及观察 |
| 3 结果 |
| 3.1 DSHDV的形态特征 |
| 3.2 DSHDV分布及形态发生特点 |
| 3.3 宿主细胞的超微结构变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 DSHDV病毒粒子在感染鸭体内形态特征与形态发生学过程 |
| 4.2 DSHDV致感染鸭的超微结构变化及意义 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第五章 DSHDV强毒人工感染鸭和鸭胚致宿主细胞凋亡研究 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 主要试剂及配制 |
| 1.4 主要仪器及设备 |
| 1.5 器材 |
| 2 方法 |
| 2.1 鸭胚的人工感染 |
| 2.2 实验鸭的人工感染及样品的采集 |
| 2.3 HE染色法观察 |
| 2.4 透射电镜法观察 |
| 2.5 TUNEL法检测细胞凋亡 |
| 3 结果 |
| 3.1 DSHDV在鸭胚上的培养特性 |
| 3.2 DSHDV致鸭胚宿主细胞凋亡的观察 |
| 3.3 DSHDV致鸭宿主细胞凋亡的观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 细胞凋亡的基本特征 |
| 4.2 细胞凋亡的检测方法 |
| 4.3 DSHDV感染与宿主细胞凋亡 |
| 4.4 DSHDV致宿主细胞凋亡的规律 |
| 4.5 DSHDV致宿主细胞凋亡机制的探讨 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第六章 免疫组化检测DSHDV方法的建立和在检测病毒侵染规律研究中的应用 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 抗体 |
| 1.4 主要试剂及配制 |
| 1.5 主要仪器及设备 |
| 1.6 器材 |
| 2 方法 |
| 2.1 人工复制病例 |
| 2.2 实验鸭的人工感染及样品采集 |
| 2.3 兔抗DSHDV高免血清IgG的提取和纯化 |
| 2.4 载玻片和盖玻片的处理 |
| 2.5 免疫组化检测材料的固定、包埋和切片 |
| 2.6 免疫组化检测鸭病毒性肿头出血症病毒方法的建立及优化 |
| 2.7 间接免疫酶法检测DSHDV在鸭体中的侵染规律 |
| 3 结果 |
| 3.1 兔抗DSHDV高免血清效价及IgG纯化 |
| 3.2 免疫组化SP染色方法的建立和优化 |
| 3.3 特异性实验结果 |
| 3.4 重复性和稳定性实验结果 |
| 3.5 间接免疫酶法检测组织中DSHDV在鸭体中的侵染规律 |
| 4 讨论 |
| 4.1 检测DSHDV抗原的间接免疫酶法的建立与优化 |
| 4.2 DSHDV抗原的定位和DSHDV的侵染规律 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第七章 间接ELISA检测鸭病毒性肿头出血症抗体方法的建立和应用 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 血清 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要溶液的配制 |
| 1.6 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 抗原的制备与纯化 |
| 2.2 鸭病毒性肿头出血症阳性、阴性血清的制备 |
| 2.3 间接ELISA的基本操作程序 |
| 2.4 间接ELISA最佳工作条件的确定 |
| 2.5 特异性试验 |
| 2.6 敏感性试验 |
| 2.7 重复性试验 |
| 2.8 临床血清样品的检测 |
| 2.9 免疫鸭特异性抗体的检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 病毒抗原的含量和阳性血清效价 |
| 3.2 间接ELISA法最佳工作条件的选择 |
| 3.3 特异性试验 |
| 3.4 敏感性试验 |
| 3.5 重复性试验 |
| 3.6 临床血清样品的检测结果 |
| 3.7 免疫鸭特异性抗体的检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 间接ELISA技术参数的选择 |
| 4.2 间接ELISA特异性和敏感性 |
| 4.3 间接ELISA试验质量控制 |
| 4.4 间接ELISA在临床上的应用 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第三部分 结论 |
| 第四部分 参考文献 |
| 第五部分 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（6）针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语（abbeviations） |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 针刺治疗高血脂的研究进展 |
| 1 中医对高脂血症认识 |
| 2 高血脂的病因病机 |
| 3 针刺治疗高血脂的临床研究 |
| 4 针刺治疗高血脂的实验研究 |
| 5 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医学对中风病的认识 |
| 1 病名 |
| 2 病位 |
| 3 病因 |
| 4 促发因素 |
| 5 临床症状 |
| 6 辨证施治 |
| 7 预后 |
| 8 针灸在治疗中风中的作用 |
| 参考文献 |
| 综述三 针刺对实验性脑缺血作用机制的研究进展 |
| 1 针刺对脑缺血合并症的实验研究 |
| 2 针刺抗脑缺血的作用机制研究 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 综述四 神经干细胞与脑缺血 |
| 1 神经干细胞的发现 |
| 2 神经干细胞的概念 |
| 3 神经干细胞的生物学特性 |
| 4 神经干细胞的定位和标记 |
| 5 脑缺血与NSC 的激活 |
| 6 脑缺血时影响NSC 增殖的因素 |
| 7 针灸与脑缺血后神经干细胞的研究现状 |
| 8 研究展望与科学意义 |
| 参考文献 |
| 综述五 神经营养因子与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 1 神经干细胞分化及其相关因子 |
| 2 NGF 家族与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 2.1 NGF |
| 2.2 BDNF |
| 3 GDNF 家族与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 4 其他生长因子与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 4.1 bFGF |
| 4.2 其他生长因子 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 电针对实验性高血脂大鼠血脂四项的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 电针对高血脂合并脑缺血大鼠血脂四项的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 针刺对实验性脑缺血神经行为及脑缺血病理改变的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| HE 染色图 |
| 实验五 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠Nestin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Nestin 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠PCNA 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| PCNA 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠vimentin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Vimentin 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠Tuj-1 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Tuj-1 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经营养因子NGF、BDNF、bFGF 的影响.. |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综合讨论 |
| 实验结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）骨髓增生异常综合征患者凋亡造血细胞的克隆性初步研究（论文提纲范文）
| 病例和方法 |
| 1 病例 |
| 2 取材 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 ISEL/FISH分析: DNA ISEL检测试剂盒 (fluorescence) 购自德国Boehringer |
| 3.2 FCM/FISH 分析: Annexin |
| 结果 |
| 讨论 |
（8）救脑宁注射液治疗实验性脑血肿家兔的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药对出血性中风(脑出血)的研究概况 |
| 综述二 脑出血继发性脑损伤的发病机制研究进展 |
| 综述三 神经细胞凋亡及其线粒体信号调控通路 |
| 综述四 现代细胞生物学技术在神经疾病研究中的应用 |
| 实验研究 |
| 前 言 |
| 第一部分 救脑宁注射液对实验性脑血肿家兔治疗作用的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分 救脑宁注射液对缺血再灌注诱导原代神经细胞损伤的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第三部分 救脑宁注射液改善缺血再灌注所致原代神经细胞凋亡及其调控机制的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、APAAP免疫酶标及DNA末端原位标记双重染色检测急性白血病细胞原位凋亡（论文参考文献）
- [1]光动力疗法治疗小鼠乳腺癌的生物效应三维空间分布的研究[D]. 金文东. 北京协和医学院, 2019(02)
- [2]PRIM2在非小细胞肺癌中的表达及临床相关研究[D]. 罗详冲. 昆明医科大学, 2017(02)
- [3]雄黄纳米微粒在细胞水平抑制[D]. 程淼. 北京中医药大学, 2012(12)
- [4]健脾补肾法治疗骨髓增生异常综合征RA型的临床观察[D]. 井大新. 山东中医药大学, 2011(01)
- [5]鸭病毒性肿头出血症病毒感染特性及其免疫检测技术的研究[D]. 李传峰. 四川农业大学, 2010(12)
- [6]针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响[D]. 任秀君. 北京中医药大学, 2007(02)
- [7]骨髓增生异常综合征患者凋亡造血细胞的克隆性初步研究[J]. 李晓,沈炜明,浦权. 中华血液学杂志, 2005(01)
- [8]救脑宁注射液治疗实验性脑血肿家兔的作用及其机制研究[D]. 李克玲. 北京中医药大学, 2004(02)
- [9]骨髓增生异常综合征巨噬细胞增生与造血细胞凋亡的相关性[J]. 李晓,应韶旭,刘薏芝,陶英,常春康,蒋秦燕,黄薇,石军,浦权. 中华病理学杂志, 2003(03)
- [10]骨髓增生异常综合征巨核细胞增殖与凋亡的初步研究[J]. 李晓,浦权,刘薏芝,石军,陶英,常春康,蒋秦燕,黄薇. 中国实验血液学杂志, 2002(01)